전남 지역에서 토마토반점위조바이러스병은 나주, 순천, 영광, 신안 등 8개 시군에서 발생되었으며, 영광 지역이 가장 심하였다. 시설재배에서는 주로 고추, 피망, 토마토에 발생하였고, 노지재배에서는 고추의 피해가 컸다. 고추 육묘장에서 Tomato spotted wilt virus(TSWV) 발생을 조사한 결과, 나주, 순천, 장흥 지역에서 발병주율은 1.1-30%로 조사되었다. TSWV은 일반적으로 6월 상순에 초발하여 8월까지 지속적으로 발병이 증가하였으나, TSWV에 감염된 묘가 정식된 경우 정식 초기인 5월 상순부터 발생을 시작하였다. 시설재배지에서 꽃노랑총채벌레가 대만총채벌레보다 황색점착트랩에 높은 밀도로 채집되었고, 노지고추에서는 대만총채벌레가 꽃노랑총채벌레보다 우점하였다. 동절기 휴경기에 하우스 내와 측창 사이의 잡초를 완전히 제거한 경우에는 방치한 포장에 비해 바이러스 초발일이 1개월 정도 지연되는 경향을 보였고, 측창쪽에서 가까운 열이 바이러스 발생율이 높았고 측창에서 멀어질수록 발생율이 낮아졌다.
토마토반점위조바이러스(Tomato spotted wilt virus, TSWV)에 대한 고추 유전자원 및 시판품종 등 100점의 병징 유형과 저항성 반응을 조사하였다. 병징 유형과 TSWV 감염률은 접종 후 9, 12, 14, 45일에 각각 육안으로 조사하였으며, 접종 14일에는 효소면역항체법을 이용하여 실험에 사용한 모든 개체의 비 접종 상엽에서 바이러스 감염 유무를 검정하였다. 감염된 대다수의 개체에서 잎 말림 증상이 가장 빈번하게 관찰되었으며, 국내 상용 $F_1$ 품종과 재래종고추에서는 황화 증상이, 야생형 수집종에서 줄기괴사 증상이 특이적으로 관찰되었다. TSWV의 전형적인 병징으로 알려진 원형반점은 조사한 일부 계통에서 관찰되었고, 계통 내 개체간 바이러스 병징 발현 정도는 상이하였다. 상용 F1 4품종(Kpc-35, -36, -57, -62)과 야생형 고추 8계통(PBI-11, C00105, PBC076, PBC280, PBC426, PBC495, PBC537, PI201238)은 유묘기에 기계적 접종했을 때 TSWV에 대해 고도의 저항성을 보였다.
Demand for tomatoes has been increasing every year as people desire more healthy food. In Korea, tomatoes are mainly grown in the Chungnam, Chunnam and Kyungnam provinces. Recently, reports of whitefly-transmitted viral diseases have increased due to newly emerging whitefly pressures caused by climate change in Korea. Specifically, in 2017, the main tomato growing areas, Buyeo and Nonsan in Chungnam, showed damage typical of viral infection; therefore, we investigated viral diseases in these areas. We collected samples with virus-like symptoms and found that not only whitefly transmitted Tomato yellow leaf curl virus (TYLCV) and Tomato chlorosis virus (ToCV) were detected but also Tomato mosaic virus (ToMV, for which no specific vector is known) and Tomato spotted wilt virus (TSWV, transmitted by thrips). The ToMV-infected samples were mostly co-infected with either TYLCV or ToCV. Mixed infections of different combinations of TYLCV, ToCV and ToMV were detected with the mixed infection of two whitefly-transmitted viruses (TYLCV and ToCV) causing the most severe symptoms. According to the CP sequence of each virus, the 100% identities were shown to be Mexico/ABG73017.1 (TYLCV), Greece/CDG34553.1 (ToCV), China/AKN79752 (TSWV), and Australia/NP078449.1 (ToMV). Based on the sequence data, we presumed that these tomato infecting viruses were transmitted through insects and seeds introduced from neighboring countries.
The genome of tomato spotted wilt virus (TSWV) is composed of three RNA segments, S, M, and L RNA and the 5.0 kb M RNA encodes two glycoproteins Gl, G2 and NSm protein of unknown function. In an effort to investigate the function of the NSm protein, antibody was raised against NSm fusion protein overexpressed in Escherichia coli. This antibody was used to detect the NSm protein by using western blot analysis and electron microscopic observation after immunogold labelling. For the cloning of the NSm gene, total RNA extracted from a TSWV infected plant was used for cDNA synthesis and polymerase chain reaction (PCR) instead of going through time-consuming virus purification. A protein band specifically reacting to the NSm antibody was detected from TSWV inoculated plants. The NSm protein was detected in the cell wall fraction and in pellet from low speed centrifugation when the infected plant tissue was fractionated into 4 fractions. In the immuno-electron microscopic observation, gold particles were found around the plasmodesmata of infected plant tissue. These results suggest that the NSm protein of TSWV plays some role in cell-to-cell movement of this virus.
Capsicum annuum (CA) is grown outdoors across fields in Jeollabuk-do, South Korea. The weeds surrounding these fields were investigated regarding the infection of 11 viruses infecting CA during the year 2014-2018. In the reverse transcription polymerase chain reaction diagnosis, 546 out of 821 CA samples (66.5%) were infected by nine viruses, and 190 out of 918 weed samples (20.7%) were infected by eight viruses. Correlation analysis of the mutual influence of the viruses infecting CA and weeds during these 5 years showed that five viruses had significant positive correlations with the infection in both CA and weeds. Over the study period, the weeds infected by cucumber mosaic virus (CMV) in the previous year were positively correlated with the incidence of CMV infection in CA in the current year, although the correlation was lower for tomato spotted wilt virus (TSWV) compared to CMV. The CMV infection percent was 14.0% in summer annuals, 11.4% in perennials, and 7.8% in winter annuals. However, considering the overwintering period without CA, the infection percent was 5.2% higher in winter annuals and perennials than that in summer annuals, indicating that winter annual and perennial weeds served as the main habitats for insect vectors. The TSWV infection percent in weeds was 10.4% in summer annuals, 6.4% in winter annuals, and 6.2% in perennials. The weeds surrounding CA fields, acting as the intermediate hosts, were found to be the potent sources of infection, influencing the spread and diversity of CA-infecting viruses. The results of this study can contribute to prevent viral infection in agricultural fields.
안양지역에서 발생되고 있는 토마토 반점 위조 바이러스 (TSWV)가 국내 처음으로 화훼류인 봉선화 (Impatiens balsamina), 과꽃 (Callistephus chinensisr), 백일홍 (Zinnia elegans) 그리고 다알리아 (Dahlia variabilis)에서 발생하였다. 화훼류에 발생한 TSWV는 잎에 전형적인 단독 혹은 이중 원형반점을 일으켰으며, 괴저 반점, 위조 및 심한 모자이크 증상을 나타내었다.
국내의 토마토에서 발생하는 주요 바이러스는 Tomato chlorosis virus (ToCV), Tomato spotted wilt virus (TSWV), Cucumber mosaic virus (CMV), Pepper mottle virus (PepMoV), Tomato mosaic virus (ToMV)이다. 이들 바이러스를 진단하기 위해 프라이머 세트와 반응액을 포함하는 역전사중합반응(RT-PCR)법의 조건을 조사하였다. 공시한 바이러스에 특이적인 염기서열로부터 모두 46개 프라이머 세트를 설계하고, 이를 이용해 주형을 넣지 않은 RT-PCR에서 비특이 반응을 조사하였다. 이들 가운데 16개 조합을 건전한 토마토 RNA에 적용한 결과 프라이머 세트와 RT-PCR 반응액 간의 친화성이 비특이 반응 감소에 영향을 주었다. cDNA 합성과 관련된 인자와 RT-PCR 반응액 사이의 조합을 근거로 ToCV 진단을 위한 두 종류의 반응액을 선발하였다. ToCV 진단 시 수립된 조건을 나머지 바이러스 진단에 적용했을 때, 특이성이 높은 프라이머 세트 C029 (ToCV), C072 (TSWV), C070 (CMV), C048 (PepMoV), C065 (ToMV)를 선발할 수 있었다. 이들 프라이머 세트는 공시한 바이러스를 특이적으로 진단하는 데 유용할 것으로 판단된다.
Tomato spotted wilt virus (TSWV) causes one of the most destructive viral diseases that threatens global tomato production. Sw-5b was reported as the resistance gene effective against TSWV. The objective of this research was to develop a single-nucleotide polymorphism (SNP) marker to distinguish tomato cultivars resistant to TSWV from susceptible cultivars for marker-assisted breeding. First, we determined genotypes for TSWV resistance in 32 commercial tomato cultivars using the previously reported Sw-5b gene-based marker. Then, DNA sequences of Sw-5b alleles in tomato cultivars showing resistant or susceptible genotypes were analyzed; a single SNP was found to distinguish tomato cultivars resistant to TSWV from susceptible cultivars. Based on the confirmed SNP, a SNP primer pair was designed. Using this new SNP sequence and high-resolution melting analysis, the same 32 tomato cultivars were screened. The results were perfectly correlated with those from screening with the Sw-5b gene-based marker. These results indicate that the SNP maker developed in this study will be useful for better tracking of resistance to TSWV in tomato breeding.
Sw5-2 SCAR 분자표지와 생물검정법을 이용하여 토마토 유전자원 94종의 $Tomato$$spotted$$wilt$$virus$(TSWV) 저항성을 조사하였다. Sw5-2 SCAR 분자표지의 PCR 산물은 대략 574bp, 500bp, 462bp였는데, 크기가 가장 큰 PCR 산물이 Sw5-b 저항성 대립유전자와 연관되어 있었다. Sw5-b 저항성 대립유전자는 3개 수집종('Eureta', 10-318, 10-321)에서 관찰되었는데, 접종한 개체 가운데 이들 가운데 일부는 TSWV-pb1(토마토 분리주)에 일시적으로 감염되어 회복되거나 줄기에 괴사 병징을 보였다. ELISA 검사에서 음성으로 판명된 수집종 당 1개체씩 총 35개체를 선발하여 병징 발현 및 바이러스 감염 유무를 추가로 조사하였다. 접종 5개월 이후에 병징이 나타나지 않은 26개체를 대상으로 RT-PCR을 이용하여 TSWV 감염유무를 조사한 결과, 모든 개체에서 TSWV의 RT-PCR 산물이 약하게 증폭되었고, 이들 PCR 산물의 증폭 수준은 'Eureta'와 비슷하였다. 선발된 유전자원의 저항성은 조직 내 TSWV의 농도를 낮게 하는데 중요한 역할을 하고 이들은 Sw5를 포함한 여러 가지 유전자들에 의해 양적으로 조절되는 것으로 판단된다.
포장에서 고추에 황화, 엽맥록대 그리고 엽맥주름을 일으키는 바이러스가 분리되었다. 이 바이러스는 PVY항혈청과 ELISA 검정에서 반응하였으나 CMV, TMV, TBRV, AMV, TSWV, TEV, PMV, TRSV와는 반응하지 않았다. 바이러스 입자의 전자현미경 검경 결과 길이가 750-760nm의 사상형 입자였다. 이 바이러스는 진딧물에 의해 쉽게 전염되었으며 기주범위는 PVY와 비슷하였으나 Chemopodium amaranticolor와 C. quinoa에 전신 감염을 일으켰다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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