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An Efficient Secretion of Type I Secretion Pathway-Dependent Lipase, TliA, in Escherichia coli: Effect of Relative Expression Levels and Timing of Passenger Protein and ABC Transporter

  • Eom Gyeong-Tae;Rhee Joon-Shick;Song Jae-Kwang
    • Journal of Microbiology and Biotechnology
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    • 제16권9호
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    • pp.1422-1428
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    • 2006
  • An ABC transporter apparatus of the Gram-negative bacterial type I secretion pathway can be used as a secretory protein expression system in Escherichia coli. Four types of coexpression systems for the Pseudomonas fluorescens lipase gene, tliA, and its cognate ABC transporter gene cluster, tliDEF, were constructed. When the relative expression levels were changed by adding different concentrations of IPTG, the secretion (16.9 U/ml of culture) of TliA in E. coli [pTliDEFA-223+pACYC184] was significantly higher than E. coli [pKK223-3+pTliDEFA-184] secreting the lowest level of TliA (5.2 U/ml of culture). Maximal accumulation of the lipase secreted occurred in the mid-exponential phase, implying that the efficient protein secretion via an ABC transporter was restricted only to actively growing cells. Finally, the secretion level of TliA in E. coli [pTliDEFA-223+pACYC184] was increased to 26.4 U/ml by inducing gene expression at the culture initiation time. These results indicate that a significant increase in the ABC transporter-dependent protein secretion can be achieved by simply controlling the relative expression levels between the ABC transporter and its passenger protein, even in the recombinant E. coli cells.

대전 지상국의 가시성을 고려한 달천이(TLI) 및 달포획(LOI) 기동의 달탐사 최적 궤적 설계

  • 우진;송영주;박상영;최규홍;김해동;심은섭
    • 한국우주과학회:학술대회논문집(한국우주과학회보)
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    • 한국우주과학회 2009년도 한국우주과학회보 제18권2호
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    • pp.40.2-40.2
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    • 2009
  • 이 연구에서는 달천이(TLI: Trans Lunar Injection) 및 달포획(LOI: Lunar Orbit Injection) 기동 시 대전 지상국의 가시성을 고려한 최적의 임무를 설계하였다. TLI 기동은 탐사선이 지구 주차궤도에서 지구-달 천이궤적으로 진입하기 위하여 주어지는 기동이며, LOI 기동은 탐사선이 지구-달 천이궤적에서 달의 중력권으로 진입하기 위하여 주어지는 기동이다. TLI 및 LOI 기동 시 대전 지상국에서의 가시성의 확보는 실제적인 미래 한국의 달 탐사를 대비하였을 때 중요한 요소이다. 따라서 이 연구에서는 TLI 및 LOI 기동 시 대전 지상국에서의 가시성을 모두 고려하여, 최소연료로 지구 주차궤도에서 달 임무궤도 진입까지의 모든 단계에 대해 임무설계를 실시하였다. TLI 및 LOI 기동 시 추력은 순간 추력(Impulsive thrust)로 가정하였으며, KSLV-II 발사체의 성능을 적용하여 설계하였다. 임무 설계 시 태양, 지구, 달의 섭동력을 고려한 N체 운동 방정식을 탐사선에 적용하였으며, 지구의 비대칭 중력장, 태양 복사압, 달의 J2 섭동에 의한 영향도 고려하였다. JPL의 정밀 천체력인 DE405를 사용하였고, 상용 소프트웨어인 SNOPT(Spares Nonlinear OPTimizer)를 이용하여 비행 궤적의 최적해를 도출하였다. 임무 설계 결과를 통해, 대전 지상국의 가시성을 고려한 TLI 및 LOI 기동의 크기에 의한 임무설계의 분석을 수행하였다. 또한 최적화된 달 탐사 임무의 단계별 기동의 크기와 지구-달 천이 궤적의 형상 및 다양한 임무 요소들의 해석을 도출하였다.

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An Earth-Moon Transfer Trajectory Design and Analysis Considering Spacecraft's Visibility from Daejeon Ground Station at TLI and LOI Maneuvers

  • Woo, Jin;Song, Young-Joo;Park, Sang-Young;Kim, Hae-Dong;Sim, Eun-Sup
    • Journal of Astronomy and Space Sciences
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    • 제27권3호
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    • pp.195-204
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    • 2010
  • The optimal Earth-Moon transfer trajectory considering spacecraft's visibility from the Daejeon ground station visibility at both the trans lunar injection (TLI) and lunar orbit insertion (LOI) maneuvers is designed. Both the TLI and LOI maneuvers are assumed to be impulsive thrust. As the successful execution of the TLI and LOI maneuvers are crucial factors among the various lunar mission parameters, it is necessary to design an optimal lunar transfer trajectory which guarantees the visibility from a specified ground station while executing these maneuvers. The optimal Earth-Moon transfer trajectory is simulated by modifying the Korean Lunar Mission Design Software using Impulsive high Thrust Engine (KLMDS-ITE) which is developed in previous studies. Four different mission scenarios are established and simulated to analyze the effects of the spacecraft's visibility considerations at the TLI and LOI maneuvers. As a result, it is found that the optimal Earth-Moon transfer trajectory, guaranteeing the spacecraft's visibility from Daejeon ground station at both the TLI and LOI maneuvers, can be designed with slight changes in total amount of delta-Vs. About 1% difference is observed with the optimal trajectory when none of the visibility condition is guaranteed, and about 0.04% with the visibility condition is only guaranteed at the time of TLI maneuver. The spacecraft's mass which can delivered to the Moon, when both visibility conditions are secured is shown to be about 534 kg with assumptions of KSLV-2's on-orbit mass about 2.6 tons. To minimize total mission delta-Vs, it is strongly recommended that visibility conditions at both the TLI and LOI maneuvers should be simultaneously implemented to the trajectory optimization algorithm.

선박의 통합정보처리를 위한 IEC 61162-4 기반 TLI 프로토콜 설계 및 구현 (Design and Implementation of IEC 61162-4 based TLI Protocol for e-Navigation on Ship)

  • 장길웅;이장세;박휴찬
    • 한국정보통신학회논문지
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    • 제14권2호
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    • pp.351-359
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    • 2010
  • 본 논문에서는 선박의 통합정보처리를 위해 표준화된 IEC 61162-4 기반 TLI 프로토콜의 전송 알고리즘을 제안하고, 제안된 알고리즘을 기반으로 프로토콜을 설계 및 구현한다. 구현된 프로토콜은 TCP/IP 기반의 프로토콜로서 IEC 61162-4에서 제안하고 있는 MAU와 LNA의 표준에 따른 통신 프로토콜이며, 클라이언트/서버 모델을 기반으로 한 네트워크 구조에서 데이터 전송이 이루어진다. 개발된 TLI 프로토콜은 하나의 호스트 내에 MAU와 LNA간의 통신과 서로 다른 호스트의 LNA 간 통신이 이루어지며, 하나의 LNA에 대해 다양한 서비스를 제공하기 위해 멀티 MAU 구조로 구현된다. 표준 규격과 제안된 전송 알고리즘에 따라 객체지향 기법을 이용하여 프로토콜 설계 및 구현이 되었으며, 실제 선박에서 사용될 수 있는 간단한 네트워크 환경에서 실험을 하여 성공적으로 데이터 송수신이 됨을 확인할 수 있었다.

개의 췌장적출이 혈청 Trypsin-like Immunoreacitivity (TLI)에 미치는 영향 (Effects of Pancreatectomy on Serum Trypsin-like Immunoreactivity (TLI) in Dogs)

  • 곽우연;윤화영;오태호;윤영민;이창우;최희인
    • 한국임상수의학회지
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    • 제18권1호
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    • pp.7-13
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    • 2001
  • Depending on the degree of exocrine pancreatic insufficiency, there are inconsistent values in the serum trypsin-like immunoreactivity (TLI), hematology, and serology. To determine the correlation between those values and complete pancreatic insufficiency, 10 pancreatectomized dogs as the treated group and 10 sham operation dogs as control group were used. The entire treated group showed significant decrease in serum TLI level from 2.63$\pm$0.20 ng/ml (day 0) to 1.81$\pm$0.43 ng/ml at day 1 after the pancreatectomy (p<0.05) and the decline maintained till the end of the experiment. Blood glucose level gradually increased, but albumin level showed significant decrease (p<0.05) at day 1 and maintained the decline. Three clinical signs were observed such as depression, vomiting, and diarrhea. The entire treated group showed diarrhea throughout the experiment, but depression and vomiting were gradually diminished. The activity of serum alkaline phosphatase in the treated group increased till day 2 then decreased, on the other hand, control group showed continuous increase till day 4, and then decreased. Only experimental group showed the increased alanine aminotransferase activity at day 1. Serum lipase activity in the treated group jumped up at day 1 and then dropped down, which was even lower than the control. Regarding serum amlyase activity gradually decreased. According to these results, the assay of trypsin-like immunoreactivity showed the consistent result, so it suggests that TLI is an useful tool to determine the pancreatic exocrine function and possible diagnosis of exocrine pancreatic insufficiency compared to the simple assay of plasma amylase and lipase.

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Salmonella Type III Secretion System을 이용한 단백질 분비시스템 개발 (Development of Protein Secretion System using Type III Secretion System of Salmonella)

  • ;홍순호
    • KSBB Journal
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    • 제24권4호
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    • pp.393-396
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    • 2009
  • 단백질을 동물세포내부로 직접 주입할 수 있는 살모넬라 균주의 T3SS를 활용하여 모델 단백질인 lipase를 세포외부로 분비하는 시스템을 제작하였다. T3SS의 effector 단백질인 SlrP, SptP의 N-말단부분과 lipase를 fusion하였다. Lipase 분비실험의 결과 S. typhimurium SL1344 (sptP-tliA) 균주의 경우 lipase 활성도가 약 2.6배 증가하는 결과를 얻을 수 있었다. 본 실험결과를 바탕으로 T3SS에 관한 연구가 더욱 활발히 이루어진다면, T3SS를 신개념 약물전달시스템으로 활용이 가능해 지리라 예상된다.

개 트립신양(樣) 면역반응성 단클론 항체의 제작 (Preparation of Monoclonal Antibodies for Canine Trypsin-Like Immunoreactivity)

  • 김성수;강지훈;정광면;유재철;정점규;양만표
    • 한국임상수의학회지
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    • 제25권5호
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    • pp.317-323
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    • 2008
  • Canine trypsin-like immunoreactivity (cTLI), which is a mirror of the concentration of trypsin and trypsinogen, is a pancreas-specific enzyme and a suitable marker for canine pancreatitis and especially exocrine pancreatic insufficiency (EPI). To develop the immunochromatographic test kit, monoclonal antibodies that recognize cTLI were prepared. Anionic trypsin, cationic trypsin, and chymotrypsin from canine pancreas were successfully purified to homogeneity, using ammonium sulfate fractionation and benzamidine-affinity chromatography. The purification fold for anionic trypsin was 108 times when compared with that of the homogenation of pancreas. The molecular weights by SDS-PAGE analysis were approximately 23 kDa for chymotrypsin and approximately 20 kDa for cationic trypsin and anionic trypsin, respectively. Using the purified trypsin-like proteins, ten hybridomas which secret canine trypsin-specific monoclonal antibody were prepared. Klotz plot indicated that hybridomas, 5G2H10G4 and 2F4A11, have high affinity constant (Ka) of $4.1\;{\times}\;10^{9}$ and $1.8\;{\times}\;10^{9}$, respectively. Especially, 5F9H3 showed the cationic typsin-specific binding pattern and its Ka was determined to $4.5\;{\times}\;10^{9}$. The development of immunochromatographic test kit using these monoclonal antibodies against cTLI will be very useful in the diagnosis of canine EPI or canine pancreatitis.

Constitutive Expression of Lipase on the Cell Surface of Escherichia coli using OmpC Anchoring Motif

  • Lee, Seung Hwan;Lee, Sang Yup
    • Korean Chemical Engineering Research
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    • 제58권2호
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    • pp.280-285
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    • 2020
  • We have developed a constitutive display system of the Pseudomonas fluorescens SIK W1 TliA lipase on the cell surface of Escherichia coli using E. coli outer membrane protein C (OmpC) as an anchoring motif, which is an economical compared to induced system. For the constitutive expression of truncated OmpC-TliA fusion proteins, gntT104 promoter was employed. Cell growth was not affected by over expression of fusion protein during entire culture time, suggesting cell lysis was not a problem. The localization of truncated OmpC-TliA fusion protein on the cell surface was confirmed by immunofluorescence microscopy and measuring whole cell lipase activity. Constitutively displayed lipase was very stable, retaining activity enantioselectivity throughout the five repeated reactions. These results suggest that OmpC from E. coli be a useful anchoring motif for displaying enzymes on the cell surface without any inducers, and this stable surface display system can be employed for a broad range of biotechnological applications.

나로호와 한국형발사체를 연계한 달탐사 발사체 개념설계 (Conceptual Design of a Launch Vehicle for Lunar Exploration by Combining Naro-1 and KSLV-II)

  • 양원석;김소연;최정열
    • 한국항공우주학회지
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    • 제42권8호
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    • pp.654-660
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    • 2014
  • 본 논문에서는 달 탐사위성을 위한 발사체로 한국형발사체(KSLV-II)와 나로호(KSLV-I)를 이용한 새로운 발사체에 대한 개념 연구를 수행하였다. 달 궤도 진입은 300 km 저고도에서 TLI를 수행해야 하므로 발사체의 목표성능을 한국형발사체와 동일하게 300 km 저고도에 2.6 ton의 물체를 올려놓을 수 있도록 설정하였다. 본 연구에서 제안하는 발사체는 나로호의 1단부와 한국형발사체의 2-3단부를 결합한 형태로서 검증된 발사체를 이용함으로써 기존의 한국형발사체에 비해 개발기간을 단축시킬 수 있고 발사체의 선택의 폭을 ?힐 수 있는 장점이 있다.

HEMP 상황 하 전술기동무선통신체계 안테나 유도전압 측정 및 분석 (Measurement and Analysis of Antenna Induced Voltage for Tactical Mobile Wireless Communication System under HEMP Environment)

  • 박경제;정길수;김정섭;박용우;박재현
    • 한국시뮬레이션학회논문지
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    • 제30권2호
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    • pp.33-40
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    • 2021
  • 고고도 전자기 펄스(HEMP)의 상황은 고고도 핵폭발로 인해 발생한다. HEMP상황은 위협 레벨 조사(TLI)를 통해 HEMP 상황을 시뮬레이션 할 수 있다. 본 논문에서는 전술기동무선통신체계의 안테나 종류에 따른 유도 전압을 위협 레벨 조사로 측정 및 분석 하였다. HEMP의 영향을 받으면 전자 장비가 마비되거나 손상 될 수 있다. HEMP 방호 필터는 전원선 및 신호선용으로 상용화되어 있다. 그러나 안테나용 HEMP 필터는 상용화가 부족한 편이며 존재하더라도 낙뢰보호용으로 제작되어 있다. 안테나의 주파수와 종류에 따라 적절한 HEMP 방호 필터를 만들기 위해 유도 전압을 측정하고 외삽법을 통해 최대 유도 전압을 분석하였다. 측정 결과 HF, VHF, UHF 대역과 같이 주파수가 증가할수록 측정된 유도전압은 감소하는 것으로 나타났다.