In order to elucidate and characterize the signal transduction pathway(s) whereby yeast cells respond to mating pheromone, we have isolated mutants which are able to conjugate in the absence of the alpha-factor receptor. Sixty-one suppressors of a ste2-deletion mutation which also confer a ts conditional "start" arrest phenotypw have been subjected to genetic analysis. The mutants could be assigned to three complementation groups designated CDC70, CDC72 and CDC73, which are unlinked to each other as well as to the previously identified start genes. Quantitation of mating ability of the cdc70, cdc72 and cdc73 mutations in a ste2-deletion background gives levels ranging from 0.1% to 0.3% of wild type, depending on the allele and the gene. The results indicate that the signals from mating pheromone might be mediated by the CDC70, CDC72 and CDC73 products. products.
Developments toward a 'the end of the Cold War' are the main factor determining the situation in the Korean Peninsula. While all the combat resources of North Korea are systematically controlled and kept available for instant mobilization even in peacetime. South Korea is inferior to North Korea in terms of mobilization system and efficiency, exercise intensity and equipments. In sum, the South faces far greater restraints in wartime conversion capability than does the North. Mobilization refers to a nation's compulsory control, management and operation of its human and material resources for the purpose of national security. The total capability for safeguarding national security must be pursued by the continuous examination and complementation of our mobilization system and capability. This paper proposes an efficient management of national mobilization system that can be instantly operated on the whole in time of national emergency. Therefore, the actual operation of National Security Council is suggested to prepare operations against the emergencies and establish the foundation for national security.
The RAD4 gene of Saccharomyces cerevisiae is essential for the incision step of UV-induced excision repair. A yeast RAD4 gene has been previously isolated by functional complementation. In order to identify the RAD4 homologous gene from fungus Coprinus cinereus, we have constructed cosmid libraries from electrophoretically separated chromosomes of the C. cinereus. The 13 C. cinereus chromosomes were resolved by pulse-field gel electrophoresis, hybridized with S. cerevisiae RAD4 DNA, and then isolated homologous C. cinereus chromosome. Here, we report the cloning and characterization of fungus C. cinereus homolog of yeast RAD4 gene. Southern blot analysis confirmed that C. cinereus contains the sequence homologous DNA to RAD4 gene and this gene exists as a single copy in C. cinereus genome. When total RNA isolated from C. cinereus cells was hybridized with the 3.4 kb BglII DNA fragment of the S. cerevisiae RAD4 gene, a 2.5 kb of transcript was detected. The isolated gene encodes a protein of 810 amino acids.
공동연구 참여기관의 협력요소와 공동연구성과 간의 인과관계를 협력적 노력의 매개효과와 함께 분석하였다. 협력요소는 공동연구성과의 영향요인으로 사용되는 전략적 합의, 자원 보완성, 신뢰, 흡수역량으로 구성된 2차 요인이다. 공동연구성과에 대한 영향을 분석함에 있어 공동연구 참여를 결정하는 요인인 협력요소와 공동연구 수행 과정에서 성과에 영향을 줄 수 있는 협력적 노력을 구분하고자 하였다. 즉, 공동연구 수행 전과 수행 과정의 영향요인이 공동연구성과에 어떠한 영향을 주는지 구분하여 분석하고자 하였다. 결과를 종합하면 첫째, 전략적 합의, 자원 보완성, 신뢰, 흡수역량은 협력요소라는 2차 요인으로 구성하는 것이 적합하며, 협력요소는 장기 및 단기 공동연구성과 모두에 정의 유의한 영향을 갖는다. 둘째, 협력적 노력은 협력요소와 단기적 공동연구성과의 유의한 매개효과를 갖는다. 그러나, 장기적 공동연구성과에 대한 매개효과는 검증되지 않았다. 즉, 협력요소는 공동연구 참여의도를 높이고 공동연구성과에 긍적적 영향을 주지만, 협력적 노력은 단기적 성과에만 긍정적 영향을 줄 수 있음을 보여준다.
Diaminopimelate decarboxylase (DAPDC, EC 4.1.1.20) catalyzes the conversion of diaminopimelate into lysine (Lys), which is the last step in Lys biosynthetic pathway. The genes for DAPDC have been reported in many bacteria, and more recently in Arabidopsis. Here we report characterization of a gene for DAPDC from rice (OsDAPDC). Sequence analysis of a cDNA clone revealed a full-length open reading frame for OsDAPDC that encoded 490 amino acids, approximately 53.2 kDa protein. The OsDAPDC protein contains a consensus binding site for pyridoxal-5'-phosphate as a cofactor and has a sequence at the amino terminus that resembles a transit peptide for localization to plastids, similar to that of Arabidopsis. Single gene encoding DAPDC was found in chromosome II in rice. The predicted amino acid sequence of OsDAPDC is highly homologous to that of the enzymes for DAPDC encoded by lysA of many bacteria. Expression of OsDAPDC in lysA mutants of Escherichia coli shows that the gene is able to functionally complement the mutants. These results suggest that OsDAPDC encodes a protein for diaminopimelate decarboxylase in rice.
Sporangiophores (spphs) of Phycomyces blakesleeanus are positively phototropic to unilateral visible (blue) light over a range of fluence rates 10$^{-9}$ to 1 W/m$^2$. The maximal bending angle is always 70-75$\circ$ from the vertical. Many mutants with abnormal phototropism have been isolated. Complementation tests revealed that the genetic grouping is completely consistent with the phenotypic classification scheme, based on sensory responses other than those to light. The spph of the piloboloid mutant, the growth zone of which gradually ceases elongation but expands spherically, and the $\beta$-carotene-overproducing mutant show negative phototropism, in contrast to the wild type spph. We hypothesized that the phototropic orientation of spph is determined by the ratio of the maximal light fluenee rate at the proximal side to that at the distal side of the spph. Based on this hypothesis, we found that the maximal bending angle was larger in thin spphs than in thick ones, and larger in spphs containing smaller amount of $\beta$-carotene than in carotene-rich spphs. In addition to our hypothesis, gravitropic experiments revealed that the maximal bending angle of the wild type spph results from a balance among positive phototropism, negative gravitropism, and the optical properties of the spph. For further advancement of this study, we developed a mutant with a high proportion of uninucleate spores, and designed an efficient microinjection method for obtaining transformants.
The efficiency of Agrobacterium-mediated transformation in plants depends on the virulence of Agrobacterium strains, the plant tissue culture conditions, and the susceptibility of host plants. Understanding the molecular interactions between Agrobacterium and host plant cells is crucial when manipulating the susceptibility of recalcitrant crop plants and protecting orchard trees from crown gall disease. It was discovered that Arabidopsis voltage-dependent anion channel 1 (atvdac1) mutant has drastic effects on Agrobacterium-mediated tumorigenesis and growth developmental phenotypes, and that these effects are dependent on a Ws-0 genetic background. Genetic complementation of Arabidopsis vdac1 mutants and yeast porin1-deficient strain with members of the AtVDAC gene family revealed that AtVDAC1 is required for Agrobacterium-mediated transformation, and there is weak functional redundancy between AtVDAC1 and AtVDAC3, which is independent of porin activity. Furthermore, atvdac1 mutants were deficient in transient and stable transformation by Agrobacterium, suggesting that AtVDAC1 is involved in the early stages of Agrobacterium infection prior to transferred-DNA (T-DNA) integration. Transgenic plants overexpressing AtVDAC1 not only complemented the phenotypes of the atvdac1 mutant, but also showed high efficiency of transient T-DNA gene expression; however, the efficiency of stable transformation was not affected. Moreover, the effect of phytohormone treatment on competence to Agrobacterium was compromised in atvdac1 mutants. These data indicate that AtVDAC1 regulates the competence of Arabidopsis to Agrobacterium infection.
E. coli의 $tRNA^{phe}$내에는 세 개의 psiudouridine 염기들이 존재한다. 이 $tRNA^{phe}$내의 pseudouridine 염기들의 기능을 연구하기 위하여 부위특이적 돌연변이를 이용하여 $tRNA^{phe}$ 유전자의 염기를 다른 염기로 치환시켰다. E. coli $tRNA^{phe}$ 유전자들 중 하나인 phe W 유전자내에서 32번에 해당하는 T 염기를 C 염기로 39번 T 염기를 C 염기로 Kunkel이 개발한 부위특이적 돌연변이 방법을 사용하여 각각 치환시켰다. DNA 염기서열을 결정함으로써 돌연변이체를 확인하였으며, 이들 돌연변이 유전자를 함유한 재조합 플라스미드를 이용하여 돌연변이된 phe W 유전자들의 E. Coli NP37($pheS^{-ts}$)에 대한 complementation 활성을 조사하였다. 32번 위치가 변이된 pheW 유전자 뿐만아니라 39번 위치가 변이된 phe W 유전자를 함유한 E. coh NP37들은 모두 non-permissive temperature에서 자라지 못하였다. 이 결과는 변이된 pheW 유전자들이 E. coli NP37을 complementation 할 수 없으며, 또 pseudouridine 염기들이 생체내에서 E. coli $tRNA^{phe}$의 활성에 필수적이라는 것을 의미한다.
DevSR two-component system은 Mycobacterium smegmatis의 redox sensing에 관련된 주요한 regulatory system이다. DevSR system은 DevS histidine kinase와 DevR response regulator로 구성되어 있다. 저산소 조건에서 DevS histidine kinase는 활성화되어 DevR response regulator를 인산화 시키고, 인산화된 DevR response regulator는 DevR regulon의 transcriptional activator로 작용한다. DevS의 kinase activity는 DevS의 N-terminal에 위치한 GAF domain에 존재하는 heme의 ligand-binding state에 의해 결정된다. 본 연구에서는 C-terminal kinase domain의 redox-responsive cysteine (C547)이 DevS kinase activity의 redox-dependent control과 연관이 있음을 밝혔다. 산소가 존재할 때, C547 residue 사이의 disulfide bond의 형성은 DevS kinase activity를 불활성화 시킨다. $\beta$-mercaptoethanol과 dithiothreitol과 같은 환원제를 이용하여 산화된 DevS를 환원시켰을 때, DevS kinase activity가 복원된 것이 관찰되었다. 또한, C547을 alanine으로 치환했을 때, M. smegmatis의 DevS의 sensory 기능을 부분적으로 손상되는 것이 complementation 실험을 통해 in vivo 상에서 증명되었다.
작물의 생산성 증가를 위해 염해 저항성 메커니즘을 이해하는 것이 중요하다. 식물의 염해 저항성에 관련된 유전자를 확보하기 위한 여러 가지의 선별방법이 개발되었다. 본 논문에서는 애기장대의 cDNA 라이브리를 염해감수성 효모인 cnb 돌연변이체에 삽입하여 염해 감수성 표현형을 회복하는 콜로니를 선발하였다. 이 선별방법을 통하여 34종의 cnb 돌연변이체의 염해 감수성을 회복하는 콜로니를 선별하였으며, 염기서열분석을 통하여 CaS와 AtSUMO1, AtHB-12 등 9종의 유전자임을 확인하였다. 이들 유전자 중 CaS의 발현이 염해 저항성을 증가시키는 것과 염해 처리에 의해 CaS의 유전자의 발현이 증가되는 것을 확인하였다. CaS 발현억제 형질전환체는 100 mM 염처리에 의하여 뿌리생장이 저해되었다. 또한 150 mM 염처리에 의하여 CaS 발현억제 형질전환체의 잎에서 백화현상을 나타내었다. 이러한 결과를 통하여 CaS 유전자가 효모와 식물에서 염해 저항성에 중요한 유전자임을 증명하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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