• 한국균학회지
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• 제47권4호
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• pp.359-371
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• 2019

큰느타리버섯에서 철 저장과 관련된 페리틴 단백질의 발현 및 분비를 최적화하기 위해, T-Fer 벡터에 EcoRI 및 HindIII처리를 해 페리틴 유전자를 얻은 후, BamHI으로 처리된 선형의 pPEVPR1b 분비 벡터에 클로닝하여pPEVPR1b-Fer 재조합 벡터를 구축한 다음 Agrobacterium tumefaciens LBA4404 로 도입하였다. Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation 방법에 의해 Pleurotus eryngii로 형질전환하고 kanamycin함유된 MCM 배지에서 올바른 형질전환체를 선별하였고, 단백질 발현은 SDS-PAGE 및 항원항체 반응에 의한 western blot으로 확인하였다. 페리틴 단백질의 분비 발현은 batch culture 및 20 L airlift type fermenter에서 배양 시간 및 온도와 같은 배양 조건에 의해 최적화되었다. 페리틴 생산을 위한 배양 조건은 MCM 배지에서 25℃ 및 8 일 배양에 의해 최적화되었다. 페리틴 단백질의 양은 정량적 단백질 분석에 의해 2.4 mg/g mycelium으로 측정되었다. 그러나, PR1b (32 amino acid)의 분비서열은 큰느타리버섯 내부의 peptidase에 의해 정확하게 processing되지 않았지만, 페리틴 단백질은 균사체에서 최대로 전체단백질의 24.7% 발현되었고, 배양액에서는 검출되지 않았다. 철 결합 활성은 7.5% non-denaturing gel에서 Perls' staining에 의해 확인되었으며, 다량체 페리틴(24 subunits)이 P. eryngii 균사체에서 형성되었음을 보여준다. 생물학적 활성 측정을 위하여 페리틴을 함유한 분말을 제조하여 육계의 사료 첨가제로서의 사용 가능성에 대해 시험하였으며, 결과적으로 페리틴은 육계의 성장을 촉진하고 사료 효율 및 생산 지수를 향상시키는것으로 확인되었다.

• 한국환경생태학회지
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• 제26권1호
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• pp.67-73
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• 2012

본 연구에서는 2007년 7월부터 2010년 10월까지 4년 동안 강원도 삼척시에서 산불유형과 산불의 피해로부터 회복정도에 따른 낙엽생산량과 낙엽에 의해 임상으로 이입되는 영양염류 함량을 비교하였다. 산불대조구, 수관화 발생 조사구 (C-1, C-3), 지표화 발생 조사구(G-2)에서 4년간 평균 낙엽생산량은 각각 $7.74{\pm}2.56$, $1.17{\pm}0.67$, $2.97{\pm}0.44$, $2.92{\pm}0.42ton{\cdot}ha^{-1}{\cdot}yr^{-1}$로 나타났다. 낙엽 생산을 통해 임상으로 이입되는 4년간 평균 총질소, 총인, 칼륨, 칼슘과 마그네슘의 양은 산불대조구에서 각각 $22.20{\pm}12.43$, $1.16{\pm}0.46$, $2.68{\pm}1.44$, $16.22{\pm}4.69$, $1.36{\pm}0.32kg{\cdot}ha^{-1}{\cdot}yr^{-1}$로 가장 높은 값을 보였으며, 수관화 발생 조사구(C-1)에서는 각각 $3.73{\pm}2.31$, $0.10{\pm}0.09$, $0.27{\pm}0.20$, $2.75{\pm}2.58$, $0.24{\pm}0.27kg{\cdot}ha^{-1}{\cdot}yr^{-1}$로 가장 낮은 결과를 보였다. 총질소, 총인, 칼륨, 칼슘 및 마그네슘의 5개의 영양염류를 합산하여 보면 낙엽에 의해 임상으로 이입되는 영양염류의 함량은 산불대조구 > 수관화 발생 조사구(C-3), 지표화 발생 조사구 (G-2) > 수관화 발생 조사구(C-1) 순으로 나타났다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제28권8호
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• pp.1391-1400
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• 2018

Angelica tenuissima root has historically been used as a traditional medicine in Korea. Previous studies have identified the anti-melanogenic effects of the extract of A. tenuissima root fermented by Aspergillus oryzae (FAT). This study investigated the protective effects of FAT against ultraviolet light B exposure (UVB; $30mJ/cm^2$) in HaCaT (human keratinocyte) or Hs68 (human foreskin fibroblast) skin cells. FAT treatment was able to stimulate wound healing rate at the basal condition. FAT also favored the maintenance and/or improvement of extracellular matrix impairment caused by UVB irradiation through: 1) upregulation of procollagen Type-1 synthesis and secretion; 2) suppression of MMP-1 and elastase expression. FAT was able to play a role in the attenuation of inflammatory responses caused by UVB irradiation via upregulation of photo-protective hemeoxygease-1 and suppression of proinflammatory cyclooxygenase-2 expression. After further verification of the anti-photoaging potential of FAT, it could be utilized as an effective ingredient in anti-aging and anti-wrinkle cosmetics.

• The Korean Journal of Physiology and Pharmacology
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• 제6권5호
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• pp.247-253
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• 2002

Major pelvic ganglia (MPG) neurons are classified into sympathetic and parasympathetic neurons according to the electrophysiological properties; membrane capacitance (Cm), expression of T-type $Ca^{2+}$ channels, and the firing patterns during depolarization. In the present study, function and molecular expression of ATP-sensitive $K^+\;(K_{ATP})$ channels was investigated in MPG neurons of male rats. Only in parasympathetic MPG neurons showing phasic firing patterns, hyperpolarizing changes were elicited by the application of diazoxide, an activator of $K_{ATP}$ channels. Glibenclamide $(10{\mu}M),$ a $K_{ATP}$ channel blocker, completely abolished the diazoxide-induced hyperpolarization. Diazoxide increased inward currents at high $K^+$ (90 mM) external solution, which was also blocked by glibenclamide. The metabolic inhibition by the treatment with mitochondrial respiratory chain inhibitors (rotenone and antimycin) hyperpolarized the resting membrane potential of parasympathetic neurons, which was not observed in sympathetic neurons. The hyperpolarizing response to metabolic inhibition was partially blocked by glibenclamide. RT-PCR analysis revealed that MPG neurons mainly expressed the $K_{ATP}$ channel subunits of Kir6.2 and SUR1. Our results suggest that MPG neurons have $K_{ATP}$ channels, mainly formed by Kir6.2 and SUR1, with phenotype-specificity, and that the conductance through this channel in parasympathetic neurons may contribute to the changes in excitability during hypoxia and/or metabolic inhibition.

• Journal of Ginseng Research
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• 제47권2호
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• pp.291-301
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• 2023

Introduction: Non-small cell lung cancer (NSCLC) patients are particularly vulnerable to the Coronavirus Disease-2019 (COVID-19). Currently, no anti-NSCLC/COVID-19 treatment options are available. As ginsenoside Rg3 is beneficial to NSCLC patients and has been identified as an entry inhibitor of the virus, this study aims to explore underlying pharmacological mechanisms of ginsenoside Rg3 for the treatment of NSCLC patients with COVID-19. Methods: Based on a large-scale data mining and systemic biological analysis, this study investigated target genes, biological processes, pharmacological mechanisms, and underlying immune implications of ginsenoside Rg3 for NSCLC patients with COVID-19. Results: An important gene set containing 26 target genes was built. Target genes with significant prognostic value were identified, including baculoviral IAP repeat containing 5 (BIRC5), carbonic anhydrase 9 (CA9), endothelin receptor type B (EDNRB), glucagon receptor (GCGR), interleukin 2 (IL2), peptidyl arginine deiminase 4 (PADI4), and solute carrier organic anion transporter family member 1B1 (SLCO1B1). The expression of target genes was significantly correlated with the infiltration level of macrophages, eosinophils, natural killer cells, and T lymphocytes. Ginsenoside Rg3 may benefit NSCLC patients with COVID-19 by regulating signaling pathways primarily involved in anti-inflammation, immunomodulation, cell cycle, cell fate, carcinogenesis, and hemodynamics. Conclusions: This study provided a comprehensive strategy for drug discovery in NSCLC and COVID-19 based on systemic biology approaches. Ginsenoside Rg3 may be a prospective drug for NSCLC patients with COVID-19. Future studies are needed to determine the value of ginsenoside Rg3 for NSCLC patients with COVID-19.

• Molecules and Cells
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• 제37권5호
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• pp.426-434
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• 2014

Peptidylarginine deiminase type 2 (PADI2) deiminates (or citrullinates) arginine residues in protein to citrulline residues in a $Ca^{2+}$-dependent manner, and is found in lymphocytes and macrophages. Vimentin is an intermediate filament protein and a well-known substrate of PADI2. Citrullinated vimentin is found in ionomycin-induced macrophage apoptosis. Citrullinated vimentin is the target of anti-Sa antibodies, which are specific to rheumatoid arthritis, and play a critical role in the pathogenesis of the disease. To investigate the role of PADI2 in apoptosis, we generated a Jurkat cell line that overexpressed the PADI2 transgene from a tetracycline-inducible promoter, and used a combination of 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate and ionomycin to activate Jurkat cells. We found that PADI2 overexpression reduced the cell viability of activated Jurkat cells in1a dose- and time-dependent manner. The PADI2-overexpressed and -activated Jurkat cells presented typical manifestations of apoptosis, and exhibited greater levels of citrullinated proteins, including citrullinated vimentin. Vimentin overexpression rescued a portion of the cells from apoptosis. In conclusion, PADI2 overexpression induces apoptosis in activated Jurkat cells. Vimentin is involved in PADI2-induced apoptosis. Moreover, PADI2-overexpressed Jurkat cells secreted greater levels of vimentin after activation, and expressed more vimentin on their cell surfaces when undergoing apoptosis. Through artificially highlighting PADI2 and vimentin, we demonstrated that PADI2 and vimentin participate in the apoptotic mechanisms of activated T lymphocytes. The secretion and surface expression of vimentin are possible ways of autoantigen presentation to the immune system.

• 한국환경농학회지
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• 제27권1호
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• pp.1-9
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• 2008

본 연구는 농촌유역 시설재배지에 대한 농업용 지하수의 수질 경향을 파악하여 기초자료로서 이용하고자 하였고, 또한 이들 결과들에 대한 특성을 파악하기 위하여 다변량 분석을 이용하는 등 다각적인 방법을 시도하고자 하였다. 수질분석 결과, 일부 지점에 대하여 한시적으로 농도가 높은 경우는 있었지만, 평균 농도로 볼 때, 농업용수 수질기준에 적합하였고, 농작물에 대한 피해가 없는 비교적 양호한 것으로 조사되었다. 수질항목간의 상관관계는 영농활동 전인 4월과 영농활동기인 7월에는 EC와 $Mg^{2+}$가 각각 0.810(p<0.01), 0.776(p<0.01)으로 가장 높은 양의 상관관계를 보여 EC와 양이온간에는 상관성이 있음을 보여 주었고, 영농활동후인 10월은 $NO_3-N$과 T-N이 0.794(p<0.01)로 가장 높은 양의 상관관계를 보여, 4월과의 상관성 차이가 뚜렷하여 같은 건조기라 할지라도 상이한 결과가 나타날 수 있음을 간접적으로 알 수 있었다. 또한 시설재배지의 지하수 수질에 영향을 주는 인자로 건조기인 4월과 10월에는 4개의 인자가 각각 64.9%, 60.2%의 누적기여율로 추출되었고, 7월의 경우는 5개의 인자가 70.7%로 추출되었는데, 주인자인 제1인자에 속하는 수질항목들이 시기별로 모두 EC, $Ca^{2+},\;Mg^{2+},\;Cl^-,\;{SO_4}^{2-}$와 같은 양이온 및 음이온들이었으므로 시설재배지에서의 지하수 수질은 이들에 의해 영향을 많이 받고 있는 특성임을 알 수 있었다. 인자점수를 이용한 군집분석 결과4개의 군집으로 분류되었는데, 이들 중 $COD_{Mn}$의 농도가 높고, 평균적인 시설재배지 지하수 수질의 경향을 보이는 149개 지점의 A그룹은 우리나라에서의 일반적인 시설재배지 지하수 수질특성을 보여주고 있다고 할 수 있다. 뿐만 아니라 pH와 $PO_4-P$가 높은 41개 지점의 B그룹, 양이온, 음이온, EC가 높은 경향으로 특히 $NH_3-N,\;NO_3-N$, T-N이 높은 16개 지점의 C그룹, 그리고 $COD_{Cr}$이 높은5개 지점의 D그룹으로 분류되어 시설재배지 지하수 수질 특성은 각각 그룹별로 뚜렷하게 구분되고 있음을 알 수 있었다.

• Bulletin of the Korean Chemical Society
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• 제31권12호
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• pp.3588-3592
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• 2010

Second-order rate constants ($k_N$) have been measured spectrophotometrically for nucleophilic substitution reactions of 2-pyridyl X-substituted benzoates 8a-e with a series of alicyclic secondary amines in $H_2O$ at $25.0{\pm}0.1^{\circ}C$. The $k_N$ values for the reactions of 8a-e are slightly smaller than the corresponding reactions of 4-nitrophenyl X-substituted benzoates 1a-e (e.g., $kN^{1a-e}/k_N^{8a-e}$ = 1.1 ~ 3.1), although 2-pyridinolate in 8a-e is ca. 4.5 $pK_a$ units more basic than 4-nitrophenolate in 1a-e. The Br$\o$nsted-type plot for the aminolysis of 8c (X = H) is linear with $\beta_{nuc}$ = 0.77 and $R^2$ = 0.991 (Figure 1), which is typical for reactions reported previously to proceed through a stepwise mechanism with breakdown of a zwitterionic tetrahedral intermediate $T^{\pm}$ being the rate-determining step (RDS), e.g., aminolysis of 4-nitrophenyl benzoate 1c. The Hammett plot for the reactions of 8a-e with piperidine consists of two intersecting straight lines (Figure 2), i.e., $\rho$ = 1.71 for substrates possessing an electron-donating group (EDG) while $\rho$ = 0.86 for those bearing an electron-withdrawing group (EWG). Traditionally, such a nonlinear Hammett plot has been interpreted as a change in RDS upon changing substituent X in the benzoyl moiety. However, it has been proposed that the nonlinear Hammett is not due to a change in RDS since the corresponding Yukawa-Tsuno plot exhibits excellent linear correlation with $\rho$ = 0.85 and r = 0.62 ($R^2$ = 0.995, Figure 3). Stabilization of substrates 8a-e in the ground state has been concluded to be responsible for the nonlinear Hammett plot.

• Tuberculosis and Respiratory Diseases
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• 제64권4호
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• pp.278-284
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• 2008

연구배경: TRAIL 은 death 수용체(DR4, DR5)와 decoy 수용체(DcR1, DcR2)라는 독특한 수용체 시스템 덕분에 정상세포는 보호하고 종양선택적 살상능을 가진 유망한 항암제로 주목받고 있다. DR5 TRAIL 수용체는 wild-type p53 세포에서 DNA 손상항암제인 doxorubicine에 의해 발현 유도되는 p53-조절 death 수용체 유전자로 처음에 발견되었다. 폐암 조직에서 이러한 DR5와 p53 발현에 관연 연구 보고는 많지 않다. 본 연구에서 비소세포폐암 조직에서 면역조직화학적 방법을 이용하여 DR5 발현과 p53과의 상관관계를 중심으로 분석하였다. 방법: Avidin-biotinylated horseradish peroxidase complex를 이용하여 89예의 수술적 절제된 비소세포폐암 포르말린 고정조직에서 면역조직화학적 염색을 시행하였다. 1차 항체로는 anti-DR5 polyclonal antibody (Pro Sci Inc., Poway, CA)와 anti-p53 monoclonal antibody (DO-7, Novocastra, Inc, Manhasset, NY)를 이용하였다. DR5 발현에 대한 면역조직화학적 판정은 면역염색의 범위와 강도를 합산하여 다음과 같이 판정하였다; 0, non-staining; 1+, weak and diffuse(>50%) or focal (<50%) or moderate and focal; 2+, strong and focal or moderate and diffuse ; 3+, strong and diffuse. 2+ 이상을 고발현(high expression)으로 분류하였다. p53 발현 정도에 따른 p53 wild type과 mutant type의 구분은 3+의 강양성인 경우를 mutant type으로 판정하였고, 나머지 0, 1+, 2+ 발현은 wild type p53으로 판정하였다. 결과: 주변 정상폐조직에서의 DR5발현은 기관지점막에서 89%의 고발현율을 보였으나, type I, II 폐상피세포, 림프구, 평활근세포 등의 정상 세포에서는 거의 발현되지 않았다. 폐암 조직에서 DR5 고발현율은 편평상피암에서 28% (15/53), 선암에서 47% (15/32), 대세포암에서 50% (2/4)의 빈도를 보여 전반적으로 36%의 고발현율을 보였다. DR5 고발현율은 임상병기, 생존기간 등 임상 지표와 유의한 상관관계를 보여주지 못하였지만 p53 발현과는 유의한 역상관관계를 보여주었다. 결론: 비소세포폐암 조직에서 면역조직화학적 분석을 통하여 DR5 발현이 기관지점막을 제외하고는 종양 선택적임을 확인하였고 p53 발현과 유의한 역상관관계가 있음을 확인하였다. 이는 DR5가 p53 조절 유전자임을 in vivo에서 확인한 유력한 증거일 수 있다고 생각된다.

• The Journal of Advanced Prosthodontics
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• 제6권4호
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• pp.253-258
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• 2014

PURPOSE. To compare marginal and internal gaps of zirconia substructure of single crowns with those of three-unit fixed dental prostheses. MATERIALS AND METHODS. Standardized Co-Cr alloy simulated second premolar and second molar abutments were fabricated and subsequently duplicated into type-III dental stone for working casts. After that, all zirconia substructures were made using $Lava^{TM}$ system. Marginal and internal gaps were measured in 2 planes (mesial-distal plane and buccal-palatal plane) at 5 locations: marginal opening (MO), chamfer area (CA), axial wall (AW), cusp tip (CT) and mid-occlusal (OA) using Replica technique. RESULTS. There were significant differences between gaps at all locations. The $mean{\pm}SD$ of marginal gap in premolar was $43.6{\pm}0.4{\mu}m$ and $46.5{\pm}0.5{\mu}m$ for single crown and 3-unit bridge substructure respectively. For molar substructure the $mean{\pm}SD$ of marginal gap was $48.5{\pm}0.4{\mu}m$ and $52.6{\pm}0.4{\mu}m$ for single crown and 3-unit bridge respectively. The largest gaps were found at the occlusal area, which was $150.5{\pm}0.5{\mu}m$ and $154.5{\pm}0.4{\mu}m$ for single and 3-unit bridge premolar substructures respectively and $146.5{\pm}0.4{\mu}m$ and $211.5{\pm}0.4{\mu}m$ for single and 3-unit bridge molar substructure respectively. CONCLUSION. Independent-samples t-test showed significant differences of gap in zirconia substructure between single crowns and three-unit bridge (P<.001). Therefore, the span length has the effect on the fit of zirconia substructure that is fabricated using CAD/CAM technique especially at the occlusal area.