Prostate specific $antigen-{\alpha}_1-antichymotrypsin$ was detected by a double-enhancement strategy involving the exploitation of both colloidal gold nanoparticles (AuNPs) and precipitation of an insoluble product formed by HRP-biocatalyzed oxidation. The AuNPs were synthesized and conjugated with horse-radish peroxidase-PSA polyclonal antibody by physisorption. Using the protein-colloid for SPR-based detection of the PSPJACT complex showed their enhancement as being consistent with other previous studies with regard to AuNPs enhancement, while the enzyme precipitation using DAB substrate was applied for the first time and greatly amplified the signal. The limit of detection was found at as low as 0.027 ng/ml of the PSA/ACT complex (or 300 fM), which is much higher than that of previous reports. This study indicates another way to enhance SPR measurement, and it is generally applicable to other SPR-based immunoassays.
Proceedings of the Korean Vacuum Society Conference
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2013.02a
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pp.105-106
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2013
Surface plasmon resonance (SPR) is classified into the propagating surface plasmon (PSP) excited on flat metal surfaces and the local surface plasmon (LSP) excited by metalnanoparticles. It is known that fluorescence signals are enhanced by these two SPR-fields.On the other hand, fluorescence is quenched by the energy transfer to metal (FRET). Bothphenomena are controlled by the distance between dyes and metals, and the degree offluorescence enhancement is determined by the correlation. In this study, we determined thecondition to achieve the maximum fluorescence enhancement by adjusting the distance of ametal nanoparticle 2D sheet and a quantum dots 2D sheet by the use of $SiO_2$ spacer layers. The 2D sheets consisting of myristate-capped Ag nanoparticles (AgMy nanosheets) wereprepared at the air-water interface and transferred onto hydrophobized gold thin films basedon the Langmuir-Schaefer (LS) method [1]. The $SiO_2$ sputtered films with different thickness (0~100 nm) were deposited on the AgMy nanosheet as an insulator. TOPO-cappedCdSe/CdZnS/ZnS quantum dots (QDs, ${\lambda}Ex=638nm$) [2] were also transferred onto the $SiO_2$ films by the LS method. The layered structure is schematically shown in Fig. 1. The result of fluorescence measurement is shown in Fig. 2. Without the $SiO_2$ layer, the fluorescence intensity of the layered QD film was lower than that of the original QDs layer, i.e., the quenching by FRET was predominant. When the $SiO_2$ thickness was increased, the fluorescence intensity of the layered QD film was higher than that of the original QDs layer, i.e., the SPR enhancement was predominant. The fluorescence intensity was maximal at the $SiO_2$ thickness of 20 nm, particularly when the LSPR absorption wavelength (${\lambda}=480nm$) was utilized for the excitation. This plasmonic nanosheet can be integrated intogreen or bio-devices as the creation point ofenhanced LSPR field.
Characteristics of the conventional gold (Au) surface plasmon resonance (SPR) chip, bi-metallic(Au/silver (Ag)) SPR chip, and tri-metallic(Au/Ag/Au) SPR chip were investigated and compared in the intensity measurement mode for the enhancement of SPR image sensor reactivity. Reflectance curves of the Au, bi- and tri-metallic SPR chips were acquired in phosphate-buffered saline (PBS) solution and were compared. The line width of the reflectance curve of the bi-metallic chip was the narrowest among the three different types of the chips. Also, the tangential slope of the bi-metallic chip was steeper than those of the other chips. Various concentrations of bovine serum albumin (BSA) were utilized in the SPR experiment. As a result, among the above three chips reflectance variation value of the bi-metallic chip was the largest.
In this research, we developed a biosensor to detect lung cancer-specific biomarker using Anodic Aluminum Oxide (AAO) chip based on interference and nano surface plasmon resonance (nanoSPR). The nano-porous AAO chip was fabricated $2{\mu}m$ of pore-depth by two-step anodizing method for surface uniformity. NanoSPR has sensitivity to the refractive index (RI) of the surrounding medium and also provides simple and label-free detection when specific antibodies are immobilized to the Au-deposited surface of nano-porous AAO chip. To detect the lung cancer-specific biomarker, antibodies were immobilized on the surface of the chip by Self Assembled Monolayer (SAM) method. Since then lung cancer-specific biomarker was applied atop the antibodies immobilized layer. The specific reaction of the antigen-antibody contributed to the change in the refractive index that cause shift of resonance spectrum in the interference pattern. The Limit of Detection (LOD) was 1 fg/ml by using our nano-porous AAO biosensor chip.
We performed a basic experiment for the rapid, on-line, real-time measurement of hepatitis B surface antigen using a surface plasmon resonance biosensor. We immobilized antiHBsAg (hepatitis B surface antigen) polyclonal antibody, as a ligand, to the dextran layer on a CM5 chip surface that had previously been activated by N-hydroxysuccinimide. A sample solution containing HBsAg was fed through a microfluidic channel, and the reflecting angle change due to the mass increase from the binding was detected. The binding characteristics between HBsAg and its polyclonal antibody followed the typical monolayer adsorption isotherm. When the entire immobilized antibody had interacted, no additional, non-specific binding occurred, suggesting the immunoreaction was very specific. The bound antigen per unit mass of the antibody was independent of the immobilized ligand density. No significant steric hindrance was observed at an immobilization density of approximately $17.6 ng/mm^2$. The relationship between the HBsAg concentration in the sample solution and the antigen bound to the ligand was linear up to ca. $40{\mu}g$/mL. This linearity was much higher than that of the ELISA method. It appeared the antigen-antibody binding increased as the immobilized ligand density increased. In summary, this study showed the potential of this SPR biosensor-based method as a rapid, simple and multisample on-line assay. Once properly validated, it may serve as a more efficient method for HBsAg quantification for replacing the ELISA.
An, Jae-Heon;Seong, Tae-Yeon;Kim, Won-Mok;Lee, Gyeong-Seok
Proceedings of the Korean Vacuum Society Conference
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2011.02a
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pp.305-305
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2011
표면 플라즈몬 공진(SPR) 현상을 이용한 광섬유 센서는 SPR 센서의 우수한 표면 민감도, 비표지 검출능 등의 특징은 유지하면서 측정시스템이 단순해지고 저렴하게 제작이 가능하며 원거리 검출에 유리하다는 장점으로 많은 연구가 진행되고 있다. 최근 스택 제어가 용이하고 민감도 또한 우수하다는 이유로 측면 연마형 센서 구조를 적용한 연구가 많이 이루어지고 있다. 본 연구에서는 기존 Kretchman형태의 SPR 센서의 분해능 향상을 위해 사용된 광도파로 구조를 측면 연마형 광파이버에 적용시켰다. 금속 층 / 유전체 층 / 금속 층으로 구성되어 있는 광도파로 구조와 Au 단일 층을 사용한 기존 구조에 대한 이론 전사모사를 진행하고 실물 소자를 제작하여 특성을 평가하였다. WCSPR 센서에서는 두 개의 반사율 dips이 나타난다. 하나는 단파장영역에서 나타나는 폭이 작은 형태이며 또 다른 하나는 장파장영역에서 나타나는 폭이 넓은 형태이다. 단파장에서의 dip은 입사각에 크게 영향을 받지 않기 때문에 Wavelength interrogation mode을 이용하는 광섬유 SPR센서에 적용할 경우 분해능이 향상될 것 이다. WCSPR 센서는 도파로의 유전체층에서 진행되는 모드를 이용하면 Self-referencing을 할 수 있다, 또한 유전체 층의 두께를 변화 시켜 중심파장의 위치를 조절할 수 있는 특징을 갖고 있다. 결과적으로 광도파로 구조를 광파이버에 적용시켜 기존 Au 단일 층 구조의 SPR 센서에 비해 좀 더 정확하고 광범위한 감지를 할 수 있다.
Kim, Raekyung;Jee, Seohyeon;Ryu, Unjin;Lee, Hyeon Shin;Kim, Se Yun;Choi, Kyung Min
Korean Journal of Chemical Engineering
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v.36
no.6
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pp.975-980
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2019
Infrared (IR) spectroscopy is a powerful technique for observing organic molecules, as it combines sensitive vibrational excitations with a non-destructive probe. However, gaseous volatile compounds in the air are challenging to detect, as they are not easy to immobilize in a sensing device and give enough signal by themselves. In this study, we fabricated a thin nanocrystalline metal-organic framework (nMOF) film on a surface plasmon resonance (SPR) substrate to enhance the IR vibration signal of the gaseous volatile compounds captured within the nMOF pores. Specifically, we synthesized nanocrystalline HKUST-1 (nHKUST-1) particles of ca. 80 nm diameter and used a colloidal dispersion of these particles to fabricate nHKUST-1 films by a spin-coating process. After finding that benzene was readily adsorbed onto nHKUST-1, an nHKUST-1 film deposited on a plasmonic Au substrate was successfully applied to the IR detection of gaseous benzene in air using surface-enhanced IR spectroscopy.
Surface plasmon resonance (SPR) which is utilized in thin film refractometry-based sensors has been concerned on measurement of physical, chemical and biological quantities because of its high sensitivity and label-free feature. In this paper, an application of SPR to detection of alcohol content in wine and liquor was investigated. The result showed that SPR sensor had high potential to evaluate alcohol content. Nevertheless, food industry may need SPR sensor with higher sensitivity. Herein, we introduced a nano-technique into fabrication of SPR chip to enhance SPR sensitivity. Using Langmuir-Blodgett (LB) method, gold film with nano-structured surface was devised. In order to make a new SPR chip, firstly, a single layer of nano-scaled silica particles adhered to plain surface of gold film. Thereafter, gold was deposited on the template by an e-beam evaporator. Finally, the nano-structured surface with basin-like shape was obtained after removing the silica particles by sonication. In this study, two types of silica particles, or 130 nm and 300 nm, were used as template beads and sensitivity of the new SPR chip was tested with ethanol solution, respectively. Applying the new developed SPR sensor to a model food of alcoholic beverage, the sensitivity showed improvement of 95% over the conventional one.
Immunosensors are of great interest because of their potential utility as specific, simple, label-free, direct detection means and provision of reduction in size, cost and time of analysis comparing with conventional immunoassay. In the last two decades, many reports have been published on the use of immunosensors for a wide range of applications to clinical diagnostics, pharmaceutical chemistry, environmental monitoring, biotechnology and food industries. There are also numerous transduction techniques developed such as electrochemical techniques, piezoelectric crystal, and surface plasmon resonance receiving much attention for the direct monitoring of immune reactions at solid surfaces. In this article, the principles, characteristics, structures, fonctions and clinical applications of immunosensors were reviewed
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