• 제목/요약/키워드: Sequence deletion

검색결과 211건 처리시간 0.031초

Cloning된 효모의 RNAI 유전자의 특성에 관하여 (Characterization of the cloned RNA1 gene of Saccharomyces cerevisiae)

  • 송영환;김대영;김진경
    • 한국어병학회지
    • /
    • 제6권2호
    • /
    • pp.93-101
    • /
    • 1993
  • 효모의 RNAI유전자는 RNA processing에 관여 하는지 혹은 RNA transport에 관여 하는지 아직까지 유전자의 기능이 정확히 알려져 있지 않은 실정이다. 효모의 RNAI 유전자의 기능을 파악하기 위한 방법으로 본 연구에서는 rna1-1 mutant gene을 cloning하여 이에 대한 DNA sequence를 조사함으로써 RNAI 유전자와 rna1-1 유전자의 차이점을 이해하고자 하였다. rna1-1 marker를 갖는 yeast strain(R49)로 부터 genomic DNA를 추출하여 이를 BglII로 절단하여 genomic southern blotting을 행한 결과 wild type의 경우와 동일하게 3.4 kb에서 hybridization되는 signal을 얻었으며, RNAl 및 rna1-1이 yeast genome내에 single site로 존재함을 보여 주는 결과를 얻었다. mutant strain으로 부터 얻은 3.4 kb의 BglI fragment를 pUC19의 BamHI site에 subcloning하여 transformant들을 얻었고, wild type RNAl 유전자를 probe로 하여 rna1-1 mutant 유전자를 cloning할 수 있었다. pUC19에 cloning된 RNA1유전자 및 rna1-1유전자로부터 다양한 Ba131유도체를 얻어 이들에 대한 염기 서열을 비교한 결과 transcription initation site에서부터 down stream쪽으로 17 아미노산위치에 TCC가 TTC로 대치되어 있었으며 그 결과 serine이 phenylalanine으로 변환되는 결과를 얻었다. Wild type RNAI gene의 5'-region에는 3군데의 TATA-like sequence가 true TATA box인지 확인하기 위하여 Bal3I deletion에 의해 -103nt까지 deletion된 유도체를 얻었으며 ${\Delta}RNAI$, rna1-1, 81-2-6 clone이 rna1-1 allele와 complementation한지 확인하였으나 ${\Delta}RNAI$은 TS-complementation을 하지 못하였다. 따라서 현재까지 TATA-box라고 알려진 부분은 promoter로 작용하지 못함을 확인하였다.

  • PDF

The Limiting Sequence and Proper Ratio of Lysine, Methionine and Threonine for Calves Fed Milk Replacers Containing Soy Protein

  • Wang, Jianhong;Diao, Qiyu;Tu, Yan;Zhang, Naifeng;Xu, Xiancha
    • Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
    • /
    • 제25권2호
    • /
    • pp.224-233
    • /
    • 2012
  • The limiting sequence and relative ratio of lysine (Lys), methionine (Met), and threonine (Thr) for calves about 2 mo of age fed milk replacers (MR) containing soy protein are not clearly defined. The objective of the study was to investigate the effect of supplementing MR containing 22% CP, half from soy protein concentrate (SPC, 40.56% CP, flour) and half from whey proteins, with Lys, Met, and Thr to estimate amino acid (AA) sequence and their relative ratio for calves about 2 mo of age. A method of partial deduction of AA was adopted. Twenty-four newborn calves (half males and half females, $40.7{\pm}0.9$ kg of BW) were fed 1 of 4 MR diets for 56 d (n = 6/diet). The diets were supplemented with all (positive control) or with 2 of the 3 AAs: Lys, Met and Thr, (i.e., PC (22% CP, 2.34% Lys, 0.72% Met and 1.80% Thr), PC-Lys (22% CP, 1.64% Lys, 0.72% Met and 1.80% Thr), PC-Met (22% CP, 2.34% Lys, 0.50% Met and 1.80% Thr), and PC-Thr (22% CP, 2.34% Lys, 0.72% Met and 1.26% Thr)). Calves were fed thrice daily; starter (20% CP, 1.03% Lys, 0.30% Met and 0.69% Thr), hay (3.23% CP, 0.29% Lys, 0.12% Met and 0.23% Thr) and water were offered free choice. Starter and hay were only offered beginning on d 36 (after 5 wk) and d 43 (after 6 wk), respectively. BW, body size and blood samples measures were taken every two weeks. Three-day total collection of feed refusals, feces, and urine were recorded starting at d 33 and d 54 of age, respectively. From the results, the limiting sequence and relative ratio between the 3 AAs in calves with different diet structures were calculated. The limiting sequence of the 3 AAs were ranked as Lys, Met and Thr; the proper ratio was 100:29:70 for MR-only diet and 100:30:60 for diets consisted of MR, starter and hay. Nitrogen digestion and utilization and nutrient digestibility were negatively affected by AA deletion treatments. From the evidence of this experiment, it did not appear that the AA limiting sequence was selectively altered by differences in diet structures such as would be encountered in practice. The relative ratio between the 3 AAs varied with the offer of starter and hay to calves, and the average ratio was 100:29.5:65 for calves during 2 to 10 wk of age.

벼물바구미 (Lissorhoptrus oryzophilus) 내충성 GM 벼에서 T-DNA와 게놈의 인접부위 분석 (Analysis of junction site between T-DNA and plant genome in Lissorhoptrus oryzophilus resistance GM rice)

  • 이진형;신공식;서석철;임성렬;임명호;우희종;친양;권순종;박순기
    • Journal of Plant Biotechnology
    • /
    • 제41권3호
    • /
    • pp.127-133
    • /
    • 2014
  • Bacillus thuringiensis 균주로부터 분리한 cry3A 유전자는 딱정벌레목 해충에 살충성을 가지고 있어서 효율적으로 딱정벌레목 해충을 방제 할 수 있다고 알려져 있다. 국립농업과학원에서는 cry3A 유전자 형질전환벼를 육성하였고, GMO 포장 생물검정 연구를 통해 벼물바구미에 대한 내충성을 확인하였다. 본 연구에서는 벼물바구미 내충성 벼 4 계통에 대한 도입유전자 특성을 분자생물학적 방법으로 검정하여 유전자의 도입 사본 수와 도입유전자의 염기서열 등의 분석결과를 제시하였다. BT12R1 계통은 염색체 10번의 exon 부위에 도입유전자가 단일 사본으로 삽입되었으며, BT12R2 계통은 두 개의 사본으로 삽입되었고, BT12R3 계통은 LB 인근의 염기서열만 확인되었다. BT12R4 계통의 경우 단일 사본의 도입유전자가 염색체 5번의 24,516,607 ~ 24,516,636 위치에 30개의 염색체 염기서열이 결실된 상태로 삽입되었다. 이 도입위치는 벼의 내재 유전자가 발현하지 않는 intergenic 부위로 판명되었으며, 도입유전자 이외의 벡터 염기서열이 삽입되지 않음을 확인하였다. 이러한 벼물바구미 내충성벼 BT12R4 계통에 대한 분자생물학적 분석 결과는 차후 GM 작물 실용화의 환경 위해성 및 안전성 평가에 대한 기초자료로 활용할 수 있을 것으로 생각된다.

닥나무 속 식물의 엽록체 유전체 기반 InDel 마커의 개발 (Development of Chloroplast Genome-based Insertion/Deletion Markers in the Genus Broussonetia)

  • 이은지;김윤아;이미선;김주혁;최용규;김정성;신창섭;이이
    • 한국자원식물학회지
    • /
    • 제36권4호
    • /
    • pp.290-298
    • /
    • 2023
  • 본 연구에서는 닥나무 속 식물에 대한 InDel 마커를 개발하였다. 전국의 닥나무 속 식물 22개체를 수집하였고, 수집한 닥나무 속 식물 중 6개체를 차세대염기서열 분석(NGS)을 실시하였다. NGS를 통하여 얻은 염기서열 정보를 기존에 발표되었던 닥나무 엽록체 서열과 비교하여 InDel 마커 후보를 선발하였다. 선발한 마커 후보를 수집된 닥나무 속 식물에 적용하여 마커의 특성 검정을 통해 총5개의 엽록체 기반 마커를 개발하였다. 개발된 InDel 마커를 22개의 유전자원에 적용한 후 군집 분석을 실시한 결과, 총5개의 그룹으로 나뉘었다. 본 연구에서 개발된 마커들은 닥나무 속의 육종이나 종 판별에 활용할 수 있을 것이라 판단된다.

Analysis of Small Fragment Deletions of the APC gene in Chinese Patients with Familial Adenomatous Polyposis, a Precancerous Condition

  • Chen, Qing-Wei;Zhang, Xiao-Mei;Zhou, Jian-Nong;Zhou, Xin;Ma, Guo-Jian;Zhu, Ming;Zhang, Yuan-Ying;Yu, Jun;Feng, Ji-Feng;Chen, Sen-Qing
    • Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
    • /
    • 제16권12호
    • /
    • pp.4915-4920
    • /
    • 2015
  • Background: : Familial adenomatous polyposis (FAP) is an autosomal dominant inherited disease mainly caused by mutations of the adenomatous polyposis coli (APC) gene with almost complete penetrance. These colorectal polyps are precancerous lesions that will inevitable develop into colorectal cancer at the median age of 40-year old if total proctocolectomy is not performed. So identification of APC germline mutations has great implications for genetic counseling and management of FAP patients. In this study, we screened APC germline mutations in Chinese FAP patients, in order to find novel mutations and the APC gene germline mutation characteristics of Chinese FAP patients. Materials and Methods: The FAP patients were diagnosed by clinical manifestations, family histories, endoscope and biopsy. Then patients peripheral blood samples were collected, afterwards, genomic DNA was extracted. The mutation analysis of the APC gene was conducted by direct polymerase chain reaction (PCR) sequencing for micromutations and multiplex ligation-dependent probe amplification (MLPA) for large duplications and/or deletions. Results: We found 6 micromutations out of 14 FAP pedigrees, while there were no large duplications and/or deletions found. These germline mutations are c.5432C>T(p. Ser1811Leu), two c.3926_3930delAAAAG (p.Glu1309AspfsX4), c.3921_3924delAAAA (p.Ile1307MetfsX13), c3184_3187delCAAA(p.Gln1061AspfsX59) and c4127_4126delAT (p.Tyr1376LysfsX9), respectively, and all deletion mutations resulted in a premature stop codon. At the same time, we found c.3921_3924delAAAA and two c.3926_3930delAAAAG are located in AAAAG short tandem repeats, c3184_3187delCAAA is located in the CAAA interrupted direct repeats, and c4127_4128 del AT is located in the 5'-CCTGAACA-3', 3'-ACAAGTCC-5 palindromes (inverted repeats) of the APC gene. Furthermore, deletion mutations are mostly located at condon 1309. Conclusions: Though there were no novel mutations found as the pathogenic gene of FAP in this study, we found nucleotide sequence containing short tandem repeats and palindromes (inverted repeats), especially the 5 bp base deletion at codon 1309, are mutations in high incidence area in APC gene,.

trnL-trnF 서열에 의한 한국 귤나무속과 두 근연 식물종의 계통분류학적 연구 (Phylogenic Study of Genus Citrus and Two Relative Genera in Korea by trnL-trnF Sequence)

  • 허만규;윤혜정;최주수
    • 생명과학회지
    • /
    • 제21권10호
    • /
    • pp.1452-1459
    • /
    • 2011
  • 귤나무속은 운향과(Rutaceae)에 속한다. 동남아시아, 미얀마, 중국 운남에서 기원된 것으로 알려져 있다. 이 속의 분류관계는 복잡한데 클론번식과 야생식물과 교잡이 빈번하다. 식물에서 속간 속내 계통관계 추론을 위해 널리 이용되고 있는 엽록체 trnL-trnF 부위가 있다. 이 귤나무속과 두 근연한 탱자나무속과 금감속에 속하는 7종간 계통 관계를 평가하였다. 많은 삽입이 발견되었고 속내 종간 변이는 결실/삽입에 의한 것으로 밝혀졌다. 이 속의 레몬과 당귤나무은 네 계통도(MP, ML, ME, and NJ)에서 모두 같은 분지군을 형성하여 가장 근연관계에 있었고 광귤나무(향귤나무)과 자매군을 형성하였다. 유자나무는 이들과 많은 서열 차이를 나타내었다. 외부 분지군은 낮은 지지도를 나타내었다.

효모에서 B형 간염바이러스의 내면항원의 발현과 분비에 미치는 전위내면항원의 역할 (Role of pre-C Region in the Expression and Secretion of Hepatitis B Viral Core Antigen in Yeast)

  • 신상훈;김성기;노현모
    • 미생물학회지
    • /
    • 제28권1호
    • /
    • pp.1-5
    • /
    • 1990
  • B형 간염바이러스($\alpha$dr 형)의 내면항원(HBcAg) 유전자는 두개의 단백질 합성시작 유전자 암호 ATG를 갖는다. 하나는 전위내 면항원을 다른 하나는 내면항원 유전자들 위한 ATG 부호이다. 내연항원의 발현과 전위내면항원의 역할을 연구한기 위하여 전위내면 항왼 유전자를 포함하는 것과 포함하지 않는 내연항원 유전자를 효모발현 운반체에 클j료녕 하였다. 또한 내면항원의 발현에 5 upstream 의 역할을 알아보기 위하여 여러 가지의 5’ 제거툴연변이체를 클로닝하였다. 앞에서 만들어진 플라스미드로 여러 효모 균주을 형질전환시킨 후 발헨된 내면항원과 그와 관련된 항원 HBeAg을 방사면역측정법 으로 확인하였다. 효모에서 내면항원 발현의 최적조건 허에서 가장 높은 수준의 항원은 PGK promoter 와 terminator에 내연향원 올 포함한 pGKHBc를 가진 SHY4에서 검출되었다. 전위내면부위의 존재와 우관하게 내면항원은 배양액에서는 검출되지 않고 세포내에서만 검출되었다. 이 결과는 전위내면항원이 효모 내에서 내연항왼의 분비에 영향올 주지않음을 의미한다.

  • PDF

Biosynthesis of 3-Hydroxy-5-Methyl-O-Methyltyrosine in the Saframycin/Safracin Biosynthetic Pathway

  • Fu, Cheng-Yu;Tang, Man-Cheng;Peng, Chao;Li, Lei;He, Yan-Ling;Liu, Wen;Tang, Gong-Li
    • Journal of Microbiology and Biotechnology
    • /
    • 제19권5호
    • /
    • pp.439-446
    • /
    • 2009
  • The biosynthesis study of antibiotics saframycin (SFM) in Streptomyces lavendulae and safracin (SAC) in Pseudomonas fluorescens demonstrated that 3-hydroxy-S-methyl-O-methyltyrosine (3hSmOmTyr), a nonproteinogenic amino acid, is the precursor of the tetrahydroisoquinoline molecular core. In the biosynthetic gene cluster of SAC/SFM, sacD/sfmD encodes a protein with high homology to each other but no sequence similarity to other known enzymes; sacF/sfmM2 and sacG/sfmM3 encode methyltransferases for C-methylation and O-methylation; and sacE/sfinF encodes a small protein with significant sequence similarity to the MbtH-like proteins, which are frequently found in the biosynthetic pathways of non ribosomal peptide antibiotics and siderophores. To address their function, the biosynthetic cassette of 3h5mOmTyr was heterologously expressed in S. coelicolor and P. putida, and an in-frame deletion and complementation in trans were carried out. The results revealed that (i) SfmD catalyzes the hydroxylation of aromatic rings; (ii) sacD/sacF/sacG in the SAC gene cluster and sfmD/sfmM2/sfmM3 in the SFM cluster are sufficient for the biosynthesis of 3h5mOmTyr; and (iii) the mbtH-like gene is not required for the biosynthesis of the 3h5mOmTyr precursor.

Quantitative Trait Locus Mapping and Candidate Gene Analysis for Plant Architecture Traits Using Whole Genome Re-Sequencing in Rice

  • Lim, Jung-Hyun;Yang, Hyun-Jung;Jung, Ki-Hong;Yoo, Soo-Cheul;Paek, Nam-Chon
    • Molecules and Cells
    • /
    • 제37권2호
    • /
    • pp.149-160
    • /
    • 2014
  • Plant breeders have focused on improving plant architecture as an effective means to increase crop yield. Here, we identify the main-effect quantitative trait loci (QTLs) for plant shape-related traits in rice (Oryza sativa) and find candidate genes by applying whole genome re-sequencing of two parental cultivars using next-generation sequencing. To identify QTLs influencing plant shape, we analyzed six traits: plant height, tiller number, panicle diameter, panicle length, flag leaf length, and flag leaf width. We performed QTL analysis with 178 $F_7$ recombinant inbred lines (RILs) from a cross of japonica rice line 'SNU-SG1' and indica rice line 'Milyang23'. Using 131 molecular markers, including 28 insertion/deletion markers, we identified 11 main- and 16 minor-effect QTLs for the six traits with a threshold LOD value > 2.8. Our sequence analysis identified fifty-four candidate genes for the main-effect QTLs. By further comparison of coding sequences and meta-expression profiles between japonica and indica rice varieties, we finally chose 15 strong candidate genes for the 11 main-effect QTLs. Our study shows that the whole-genome sequence data substantially enhanced the efficiency of polymorphic marker development for QTL fine-mapping and the identification of possible candidate genes. This yields useful genetic resources for breeding high-yielding rice cultivars with improved plant architecture.

Development of RAPD-SCAR and RAPD-generated PCRRFLP Markers for Identification of Four Anguilla eel Species

  • Kim, Woo-Jin;Kong, Hee-Jeong;Kim, Young-Ok;Nam, Bo-Hye;Kim, Kyung-Kil
    • Animal cells and systems
    • /
    • 제13권2호
    • /
    • pp.179-186
    • /
    • 2009
  • Discriminating between eel species of the genus Anguilla using morphological characteristics can be problematic, particularly in the glass eel and elver stages. In this study, sequence-characterized amplified region (SCAR) and polymerase chain reaction (PCR)-restriction fragment length polymorphism (RFLP) markers were developed for the identification of Anguilla japoniea, Anguilla btcoior bicaor. Anguilla rostrata, and Anguilla anguilla. Random amplified polymorphic DNA (RAPD) fragments from A. japoniea (362 bp), A. bicolor bicctor (375 bp), A. rostrata (375 bp), and A. anguilla (375 bp) were isolated, sequenced, and converted to SCAR markers. The principal difference between the SCARs of A. japoniea and the three other species is the absence of a 13 bp deletion in the A. japoniea SCAR. Specific PCR primers amplified a 290 bp fragment for A. japoniea and 303 bp fragments for A. bicolor bicoior. A. rostrata, and A. anguilla. Restriction enzyme digestion with Taql, Mael, and Tru9l yielded PCR-RFLP patterns with differences that, when analyzed together, are sufficient for distinguishing each of the four eel species. In addition, RAPD fragments for A. japoniea (577 bp), A. bicoior bicoor (540 bp), A. rostrata (540 bp), and A. anguilla (509 bp) were also isolated and sequenced. The A. japoniea, A. bicoior blcoior. A. rostrata, and A. anguilla PCR products contain ten, nine, nine, and eight tandem repeats, respectively, of a 37 bp sequence. These results suggest that SCAR and PCR-RFLP markers and repeat numbers for specific loci will be useful for the identification of these four Anguilla eel species.