This study is designed to investigate the protective effects of fermented Red Ginseng (FRG) against photoaging in vitro and in vivo. UVB was irradiated to the human keratinocyte HaCaT cell and dorsal skin of SKH-1 mice for the induction of photoaging. After treatment of non-fermented red ginseng (NRG), fermented red ginseng (FRG), and fortified fermented red ginseng (FFRG) to the UVB irradiated HaCaT cell, ROS production and activity of MMP-9 were examined by DCFC-DA assay and gelatin zymographic assay respectively. UVB irradiated SKH-1 mice were treated with NRG, FRG, and FFRG via oral(300 mg/Kg B.W./day) and topical($100{\mu}{\ell}/mouse/day$) route.All of NRG, FRG, and FFRG had significantly reduced the intracellular ROS production elicited by UVB, among them FRG slightly more reduced the ROS production than NRG and FFRG. FFRG had slightly more reduced the MMP-9 activity in UVB irradiated HaCaT cells than NRG and FFRG in high dose. Oral and topical treatment of NRG, FRG, and FFRG had decreased the expression of matrix metalloproteinase-2, -3, and -9 in dorsal skin of UVB irradiated mice. Among them, inhibitory effect of FRG on the expression of MMP-2 was apparent. We speculate that FRG has therapeutic potentials on the UVB irradiated photoaging.
Yoo, Jin Hee;Kim, Jong Keun;Yang, Hee Jin;Park, Ki Moon
한국축산식품학회지
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제35권1호
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pp.58-70
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2015
This study was conducted to examine the effect of egg shell membrane hydrolysates (ESMH) on wrinkle, UV, and moisture protection for cosmetic use. ESMH were fragmented as whole ESMH (before fractioning), Fraction I (> 10 kDa), Fraction II (3-10 kDa), and Fraction III (< 3 kDa). In order to test whether fractionated ESMH can be used for functional cosmetic materials, we examined not only the level of hyaluronic acid and collagen production, but also the MMP-1 activity using a HaCaT and CCD-986Sk cell line. Our study treated each sample of fractionated ESMH with different concentrations (0.01, 0.1, 1 mg/mL). In our in vivo research, we used hairless mice that had been exposed to UV-B to induce wrinkles for 7 wk, then applied Fraction I to the treatment group for 5 wk and then tested skin thickness, minimum erythema dose and moisture content. In addition, Fraction I was high in collagen and HA biosynthesis and it was better than TGF-${\beta}$ in improving of the skin. When TNF-${\alpha}$ caused MMP-1 activity in the CCD-986Sk cells, the whole ESMH and Fraction I proved to be effective in hindering the induction of collagenase depending on the concentration, and also showed outstanding effects in the suppression of skin aging. We found that the treatment group mice's UV-B radiation-induced skin damage was largely mitigated compared to that of the non-treatment group mice. Thus, we have concluded that EMSH helps to mitigate UV-B radiation-induced wrinkles, collagen, HA, MMP-1 activity and can be used for functional cosmetic materials.
In this study we assessed the influences of ultraviolet (UV) light B radiation on epidermal cells by apoptotic sunburn cell (SBC) and the effect of green tea treatment on the inhibition of SBC formation in SKH1-hr mouse. The extent of changes following $200mJ/cm^2$ (0.5 mW/sec) was studied at 0, 3, 6, 12, 18, 24, 30 or 36 hours after exposure. SBCs were recognized by 3 hours after irradiation. There was tendency to increase from 3 hours to 24 hours and decrease from then to 36 hours after irradiation. The mice that received 0, 25, 50, 100, 200, 400 or $800mJ/cm^2$ of UVB were examined 24 hours after irradiation. The SBCs were induced as the radiation dose increases from 0 to $200mJ/cm^2$. A further increase of radiation dose has little further effect. The frequency of UVB ($200mJ/cm^2$)-induced SBC formation was reduced by intraperitoneal injection of green tea extract (p<0.01).
최근 연구에서 잠재적 피부 색소침착 경감제로서 파라-쿠마린산(PCA)의 주목되는 특성이 발견되었다. 본 연구의 목적은 이 물질의 자외선 차단 효과를 탐구하는 것이다. 자외선에 노출된 HaCaT 세포의 생존율에 대한 PCA의 영향을 in vitro에서 조사하고, 자외선 흡수 스펙트럼이 유사한 방향성 아미노산 대사물들의 작용과 비교하였다. In vivo시험으로는 PCA 크림(1.5 %)과 크림 베이스를 SKH-1 무모 쥐의 등 피부에 도포하고 UVB에 의한 염증 반응으로 나타나는 피부색(홍반) 및 두께 변화(부종)를 측정하였다. 크림 도포-자외선 조사는 2일 간격으로 총 12회 반복하였다. HaCaT 세포를 UVB에 노출시켰을 때 광량 의존적으로 세포 생존율이 감소하였다. 자외선 노출(10 mJ $cm^{-2}$)에 의한 세포 생존율감소는 100 ${\mu}M$의 PCA, cinnamic acid, urocanic acid, 그리고 indole acrylic acid에 의해 각각 39, 27, 39, 31 %가 억제되었다. 무모 쥐의 등 부위에 도포된 PCA크림(10 ${\mu}g\;cm^{-2}$)은 자외선(150 mJ $cm^{-2}$)-노출 피부의 색 지수, 즉 $L^*$, $a^*$ 및 $b^*$ 값, 그리고 두께의 변화를 각각 59, 50, 58, 53 %씩 억제하였다. 본 연구의 결과는 PCA의 멜라닌 생성 억제 작용을 밝힌 선행 연구와 함께 PCA가 자외선에 노출된 피부의 색소 이상 침착과 염증 반응을 막아줄 수 있음을 시사하였다.
This study examined the effect of 3,4-dihydroxytoluene (DHT) on UVB-induced photoaging and determined its molecular mechanisms, using HaCaT human keratinocytes and SKH-1 hairless mice. DHT suppressed UVB-induced matrix metalloproteinase-1 (MMP-1) expression in HaCaT cells. In vivo data from mouse skin supported that DHT decreased UVB-induced wrinkle formation, epidermal thickness, and matrix metalloproteinase-13 (MMP-13) expression. DHT appeared to exert its anti-aging effects by suppressing UVB-induced Raf-1 kinase activity and subsequent attenuation of UVB-induced phosphorylation of MEK, ERK, and p90RSK in HaCaT cells. In vitro and in vivo pull-down assays revealed that DHT bound with Raf-1 in ATP-noncompetitive manner. Overall, DHT appears to anti-photoaging effects in vitro and in vivo through the suppression of Raf-1 kinase activity and may have potential as a treatment for the prevention of skin aging.
백차 열수추출물의 염증 및 피부장벽 손상완화 효과를 알아보기 위해 생후 6~7주령 암컷 SKH-1 hairless 마우스 등 부위에UVB를 12주간 조사하여 피부노화를 유발시킨 후, 실험동물을정상군(N), 대조군(UVB+saline, C), 양성대조군(UVB+0.01%retinoic acid, PC), 실험군1 (UVB+1% white tea water extract, E1), 실험군2 (UVB+2% white tea water extract, E2)로 나누어 1일 2회, 주 5일, 4주 동안 매회 200 ${\mu}L$씩 시료를 도포하여 다음과 같은 결과를 얻었다. (1) 피부 홍반도 측정에서, 실험 4주 후 C군에비해 PC, E1, E2군은 각각 31, 41, 46% 유의하게(p<0.001) 낮았다. (2) 수분함량 측정에서, 실험 4주 후 C군에 비해 PC, E1, E2군은 각각 190, 207, 225% 유의하게(p<0.001) 높았다. 경표피수분 손실량(transepidermal water loss, TEWL) 측정에서, 실험 4주후 C군에 비해 PC, E1, E2군은 각각 61, 79, 85% 유의하게(p<0.001) 낮았다. 조직학적 관찰에서, C군에 비해 E1, E2군은 표피층과 진피층의 비후, 비만세포수와 탈과립 정도가 현저하게 경감되었다. 이상의 연구결과를 종합할 때, hairless 마우스를 이용한in vivo 실험에서 백차 열수추출물 경피 도포는 자외선 조사로 인해 유발된 피부장벽 손상 및 염증 반응에 상당한 개선 효과가 있음을 확인하였다.
Hairless mouse에 자외선-B를 일회 조사한 후 시간에 따른 피부보호기능과 표면구조변화의 정도를 TEWL과 주름살밀도로 측정하였다. 자외선-B의 조사 량은 0.5, 1과 3 MED 였으며, 측정 및 관찰은 조사전과 조사 후 1, 3, 5, 7 및 14일에 수행하였다. TEWL은 Evaporimiter로, 주름살밀도는 silicone replica와 image-analyzer를 이용하여 측정하였다. 조사전과 0.5MED 그룹들의 TEWL값은 변화가 없었으나, 1과 3MED그룹들의 TEWL값은 현저한 변화를 보여 3일째에 극대 값을 보였고, 이후 감소하기 시작하여 14일째에는 거의 정상 값에 도달하였다. 반면 주름살밀도는 자외선-B의 조사량에 비례하는 경향을 보여 모든 조사 그룹에서 3-5일째까지 감소한 후 서서히 증가하였다. 결과로부터, 1) 자외선 조사 후 시간에 따른 TEWL과 주름살밀도의 최대, 소 값은 3일째에 나타났으며, 2) 주름살밀도의 회복정도가 조사량에 상관없이 시간에 따라 일정한 기울기를 보였으며, 3) 주름살밀도측정만이 Sub-erythemal 손상의 정도차를 유의하게 보여주었다.
Background: Naturally occurring antioxidants were used to regulate the skin damage caused by ultraviolet (UV) radiation because several antioxidants have demonstrated that they can inhibit wrinkle formation through prevention of matrix metalloproteinases (MMPs) and/or increase of collagen synthesis. We examined the effect of oral administration of the antioxidant mixture ("L-Skin Care") on UVB-induced wrinkle formation. In addition, we investigated the possible molecular mechanisms of photoprotection against UVB through inhibition of collagen-degrading MMP activity or through enhancing of pro collagen synthesis in mouse dorsal skin. Methods: Female SKH-l hairless mice were orally administrated "L-Skin Care" (test group) or vehicle (control group) for 10 weeks with UVB irradiation by three times a week. The intensity of irradiation was gradually increased from 30 to $180mJ/cm^2$. Microtopographic and histological assessments of the dorsal skins were carried out at the end of 10 weeks to evaluate wrinkle formation. Western blot analysis and EMSA were also carried out to investigate the changes in the balance of collagen synthesis and collagen degradation. Results: Our "L-Skin Care" significantly reduced UVB-induced wrinkle formation, accompanied by significant reduction of epidermal thickness, and UVB-induced hyperplasia, acanthosis and hyperkeratosis. Oral administration of "L-Skin Care" significantly prevented UVB-induced expressions of MMPs, mitogen-activated protein (MAP) kinases and activation of activator protein (AP)-1 transcriptional factor in addition to enhanced type I procollagen and transforming growth factor-$\beta$ (TGF-$\beta$) expression. Conclusion: Oral administration of "L-Skin Care" significantly inhibited wrinkle formation caused by chronic UVB irradiation through significant inhibition of UVB-induced MMP activity accompanied with enhancement of collagen synthesis.
본 실험에서는 안전하고 우수한 효과를 지닌 천연항산화제의 광노화에 의한 피부주름 형성을 억제하는 천연물질을 탐색하기 위한 연구의 일환으로 CTL80의 식이투여와 로션 도포가 광노화를 유발한 동물모델에서 주름 형성에 미치는 영향을 살펴보았다. 광노화 유발 동물모델을 만들기 위해 hairless mice에 10주 동안 UVB 조사를 주 3회 실시하였다. 형태학적 변화를 관찰한 결과 UVB를 조사한 군은 각질이 증가하고 주름 능선의 두께가 굵고 주름이 깊게 형성한 반면, 양성대조군인 비타민 C와 CTL80 처리한 군에서 주름 형성이 감소하였으며, 특히 2% CTL80 로션 도포군이 가장 주름 형성을 억제하였다. 피부조직의 H&E 염색을 통한 조직학적인 변화에서는 UVB 조사로 두꺼워진 각질층과 표피층을 관찰하였으며 진피층의 교원섬유가 감소되었음이 관찰되었다. CTL80은 각질층과 표피층의 증가를 감소시켰으며 진피층의 교원섬유를 증가시켰음을 관찰하였다. 형태학적 변화와 같이 2% CTL80 로션 도포군의 효과가 가장 양호하게 나타났다. 항산화 상태에 미치는 영향을 살펴보기 위해 동물 혈청의 SOD와 GSH-Px의 활성을 측정한 결과, 비타민C와 CTL80처리 군에서 UVB만 조사한 군에 비하여 활성이 유의적으로 높아졌음을 살펴볼 수 있었다. 항산화 활성 또한 CTL80에 농도 의존적이지는 않았으나 식이 투여군에 비하여 로션 도포군에서 높은 활성을 보였다. 교원질 합성을 억제하고 분해를 촉진시키는 MMPs(MMP-1, MMP-3, MMP-9)의 발현을 실시간 정량 PCR로 측정하여 발현 변화를 살펴보았다. 그 결과 식이 투여군과 로션 도포군 모두 UVB 조사군에서는 발현이 현저히 높아졌으나 비타민 C와 CTL80 처리 군에서 유의적으로 낮아졌음을 살펴볼 수 있었다. 특히 CTL80 로션 도포군에서 MMP-9의 발현이 확연히 낮아졌음을 관찰할 수 있었다. 이러한 결과를 통하여 CTL80은 높은 항산화 활성을 지녔으며 이러한 항산화능을 통하여 UVB로 광노화를 유발시킨 동물모델에서 주름 생성 억제에 긍정적인 영향을 미쳤고 주름 억제 효능을 지니는 기능성 소재로써 개발 가능성을 확인하였다.
자외선(Ultraviolet radiation)은 피부 주름 형성과 피부 건조를 특징으로 하는 광노화의 주요 원인이다. 모자반과(Sargassaceae)에 속하는 모자반(Sargassum fulvellum)은 항염증, 항산화, 항아토피 활성을 갖고 있다. 특히, 모자반은 인간 각질세포(keratinocyte)와 실험동물의 피부에서 UVB에 의한 염증 반응을 완화시키는 것으로 보고되었다. 그러나, 현재까지 모자반 추출물의 광노화 억제 효과에 대해서는 보고된 바가 없다. 본 연구에서는 광노화를 유도하기 위하여 UVB를 SKH-1 무모 마우스의 등 부분에 8주간 처리하였으며, 동시에 모자반 추출물을 300 mg/kg의 농도로 매일 경구 투여하였다. 현상학적으로, 모자반 추출물은 주름 형성, 홍반 및 피부 두께를 감소시켰으며, 피부 탄력을 증가시켰다. 모자반 추출물은 콜라겐 합성 유전의 발현을 증가시키고, matrix metalloproteinase의 발현을 감소시킴으로써 콜라겐의 하이드록시프롤린(hydroxyproline) 함량을 증가시켰다. 추가적으로, 모자반 추출물의 경구 투여는 무모 마우스의 피부 수분 함량을 증가시켰으며, 경피수분손실(transepidermal water loss)을 감소시켰다. 모자반 추출물은 각질세포막 형성에 관여하는 involucrin, loricrin, transglutaminase의 발현과 자연보습인자 관련 생체지표인 filaggrin 및 caspase-14의 발현을 증가시켰다. 종합적으로, 모자반 추출물은 피부의 콜라겐 손실과 건조를 완화함으로써 광노화 억제 활성을 제공하였다. 모자반 추출물은 피부 광노화를 억제하기 위한 기능성 식품 소재로서 활용될 수 있을 것으로 판단된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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