본 연구는 식중독 원인 세균인 Salmonella enteritidis JK-15를 장미추출물에 노출시켜 나타나는 살균효과를 조사하기 위하여 실시하였다. 분리세균인 S. enteritidis JK-15는 장시간 노출된 음식으로부터 농화, 분리되었다. 16S rRNA PCR을 수행하여 S. enteritidis JK-15의 유전학적 계통수를 작성하였다. BIOLOG 분석 시스템과 16S rRNA 염기서열 분석을 통하여 S. enteritidis 종(species)과 98% 유사성을 가졌으며, 이 균주를 S. enteritidis JK-15로 명명 하였다. 5~100 mg/ml 범위의 장미추출물에 노출된 S. enteritidis JK-15의 살균효과를 조사하였고, 100 mg/ml의 장미추출물에서 6시간, 그리고 50 mg/ml에서 12시간 이내에 완전히 살균되었다. 지수생장기의 S. enteritidis JK-15 균주는 노출된 장미추출물의 농도와 시간에 따라 lipopolysaccharide의 양이 변화하는 것을 SDS-PAGE와 silver staining을 통하여 관찰하였다. 또한, 주사전자현미경을 이용하여 장미추출물에 노출시킨 세균의 외부 형태를 분석한 결과, 움푹 패이고 불규칙적인 간균 형태로 관찰되었다.
The result of studying the pathogenicity of Salmonella typhimurium and S enteritidis isolated from domestic animals in Gyeongbuk province were summarized as follows. In Congo-red binding test, S typhimurium had much more rough types than S enteritidis. In colicin production test, 4 strains of S typhimurium were positive but all of S enteritidis were negative. In hemolysin production test, all of S typhimurium and S enteritidis were negative. In Guinea pig serum resistant test, all of S typhimurium and S enteritidis were positive. As a result of pathogenicity test to mice, 54.4% of mice were died. Therefore, S typhimurium and S enteritidis were considered as highly pathogenic. S typhimurium DT104 and S enteritidis PT4 were more pathogenic to mice than other phage types of same serovar. S typhimurium and S enteritidis were considered not so pathogenic for 6-day-old chickens. The recovery rates of Salmonella stains from mice and chickens inoculated were 96.8%, and 54%, respectively. In chickens, proportional to the time from 2 weeks after challenge inoculation, the recovery rates were noticeably decreased.
Foodborne contamination and salmonellosis caused by Salmonella Enteritidis (S. Enteritidis) are a significant threat to human health and poultry enterprises. Outer membrane vesicles (OMVs), which are naturally secreted by gram-negative bacteria, could be a good vaccine option because they have many biologically active substances, including lipopolysaccharides (LPS), outer membrane proteins (OMPs), and phospholipids, as well as periplasmic components. In the present study, we purified OMVs derived from S. Enteritidis and analyzed their characteristics through silver staining and sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis. In total, 108 proteins were identified in S. Enteritidis OMVs through liquid chromatography tandem mass spectrometry analysis, and OMPs, periplasmic proteins, and extracellular proteins (49.9% of total proteins) were found to be enriched in the OMVs compared with bacterial cells. Furthermore, native OMVs used in immunizations by either the intranasal route or the intraperitoneal route could elicit significant humoral and mucosal immune responses and provide strong protective efficiency against a lethal dose (~100-fold $LD_{50}$) of the wild-type S. Enteritidis infection. These results indicated that S. Enteritidis OMVs might be an ideal vaccine strategy for preventing S. Enteritidis diseases.
Salmonella enteritidis is the most prevalent etiologic agents of foodborne acute gastroenteritis. Direct isolation and identification of S enteritidis are time consuming work and not so highly sensitive. This study was conducted to develop for the specific detection of S enteritidis using polymerase chain reaction(PCR). PCR primers were selected to amplify a 351-base pair(bp) DNA fragment from the salmonella plasmid virulence A(spv A) gene of S enteritidis. With the primers, 351 bp DNA products were amplified from S enteritidis but not from other B, D, Cl serogroup Salmonella spp. It was sensitive to detect up to 40 pg of template DNA by agarose gel electrophoresis. This PCR assay is very rapid and specific method and less time consuming than the standard bacteriological methods.
본 연구는 계란을 난백과 난황으로 분리하여, 액란 상태에서 8, 10, 15, 25, $35^{\circ}C$의 보관온도가 S. Enteritidis와 S. Typhimurium 두 혈청 형의 증식 또는 사멸패턴에 미치는 영향을 비교 분석하였다. 난백에서는 8, 10, 15, $35^{\circ}C$에서 두 혈청 형 모두 감소하였으나 $25^{\circ}C$에서는 두 혈청 형 모두 증식 하여 상온에서의 관리에 대한 주의가 필요한 것으로 나타났다. 반면 10, 15, 25, $35^{\circ}C$ 난황에서는 두 혈청 형 모두 성장하였으나 $8^{\circ}C$에서는 감소하여 유통 판매시 난황으로 준비된 액란을 냉장온도로 철저하게 관리해야 할 것으로 판단된다. 난황에서 증식한 S. Enteritidis와 S. Typhimurium의 성장곡선을 Modified Gompertz model에 적용하여 산출된 유도기(LT)와 최대증식속도(SGR) 및 최대개체군밀도(MPD)값을 Davey model과 Square-root model 및 Polynomial second order model을 이용하여 각각 온도의 영향을 나타내는 2차 모델을 개발하였다. 모든 온도에서 S. Enteritidis가 S. Typhimurium보다 유도기가 짧고 최대증식속도가 빠르게 나타나 액란 제품에서의 S. Enteritidis에 대한 위험성이 더 큰 것으로 나타났다.
A total of 79 Salmonella spp. were isolated from Pusan area in 2000. The serotypes of 79 Salmonella isolates were classified as 42 strains of S. typhi(53.1%), 24 strains of S. enteritidis(30.4%), 9 strains of S. montevideo(11.4%), 2 strains of S. typhimurium(2.5%), 1 strain of S. infantis(1.3%) and 1 strain of S. indiana(1.3%) strains(16.5%) of Salmonella sp. were isolated at May July, respectively. The isolates of S. typhi were sensitive to most sntibiotics except streptomycin. All isolates of S. typhi were especially sensitive to tobramycin, gentamicin, colistin, kanamycin, samikacin, sulfamethozazole/ trimethoprim, cefriaxone, ceftazdime, cifrofloxacin, cefoxitin and cefotaxime. Isolates of S. enteritidis wer presented higher resistance than isolates of S. typhi. Twenty-four strains of S. enteritidis were sensitive to kanamycin, amikacin cifrofloxacin, cefoxitin and cefotaxime, however 13 strains(54.2%) of S. enteritidis were resistant to carbenicillin, ampicillin and ticarcillin. Nine strains of S. montevideo were sensitive to most antibiotics except carbenicillin and streptomycin. Each 1 stain of S. indiana and S. infantis was sensitive to most antibiotics used in this study except streptomycin. Three kinds of resistant pattern (CB, SM, TE, AM, TC). In the case of S. enteritidis isolates, 9 kinds resistant pattern were detected. Most frequent resistant pattern of S. enteritidis isolates was CB, AM, TC type(16.7%)
The objective of this study was to investigate the effects of various washing waters on the quality and safety characteristics of eggs during storage. Eggs were washed with tap water, 100 ppm of sodium hypochlorite, or 30 ppm of slightly acidic electrolyzed water and stored at $10^{\circ}C$ and $20^{\circ}C$. Effects of various washing waters on reduction of Salmonella Enteritidis and aerobic plate counts and survival of S. Enteritidis on egg shells were also analyzed at $10^{\circ}C$ and $20^{\circ}C$ for 25 days. As an index of quality, haugh unit, weight reduction, and pHs of egg white and egg yolk were measured. Reduction percentages of haugh unit and weight were higher at $20^{\circ}C$ than at $10^{\circ}C$. Egg qualities were less affected by tap water, slightly acidic electrolyzed water, and sodium hypochlorite, regardless of storage temperature. The greatest reductions in aerobic plate counts and S. Enteritidis were observed with slightly acidic electrolyzed water. The level of S. Enteritidis on egg shells gradually decreased during 20 days of storage at both $10^{\circ}C$ and $20^{\circ}C$, whereas S. Enteritidis survived longer at $20^{\circ}C$ than at $10^{\circ}C$. S. Enteritidis was not detected in eggs at $10^{\circ}C$, 2.13 log CFU/g of S. Enteritidis was detected in eggs washed with sodium hypochlorite after 20 days of storage at $20^{\circ}C$, indicating that S. Enteritidis penetrated into the egg shell during storage at $20^{\circ}C$. In conclusion, slightly acidic electrolyzed water increased microbial reduction and least affected quality of washed eggs. Thus, slightly acidic electrolyzed water can be recommended for washing of graded eggs, at retail markets.
Salmonella species are the most important etiologic agents of food-borne acute gastroenteritis. The most common serotypes isolated from humans are Salmonella enterica serotype Typhimurium (S. Typhimurium) and S. Enteritidis. Traditional detection methods for Salmonella are based on cultures using selective media and characterization of suspicious colonies by biochemical and serological tests. These methods are generally time-consuming and not so highly sensitive. Recently, the polymerase chain reaction (PCR) has been used as a highly sensitive, specific, and rapid test for the presence of pathogenic bacteria. In this study, a multiplex PCR (m-PCR) was used to detect S. Typhimurium and S. Enteritidis. We selected m-PCR target genes, which were the spv (virulence plasmid specific for S. Enteritidis) and sefA (S. Enteritidis fimbrial antigen) genes, fliC (H1-i antigen specific for S. Typhimurium) and a randomly cloned sequence specific for the genus Salmonella. With m-PCR, random sequence was detected from all strains of Salmonella spp, spv and sefA were detected from all strains of S. Enteritidis (100%), and fliC was detected from all strains of S. Typhimurium (100%). This assay indicate that the specificity of the m-PCR make them potentially valuable tools for detection of S. Typhimurium and S. Enteritidis.
천연 녹차추출물인 epigallocatechin gallate (EGCG)의 메추리알 장조림에서 천연식품첨가제로서의 적용 가능성을 탐색하고자 S. Enteritidis에 대한 항미생물 활성을 냉장온도($4^{\circ}C$)와 일반실내온도($25^{\circ}C$)에서 평가하였다. 순수배양액에서의 실험결과 첨가된 EGCG의 농도($200-800{\mu}g/mL$)에 따라 $4^{\circ}C$에서 5일에서 16일 사이에서 그리고 $25^{\circ}C$에서 1일부터 6일 사이에서 S. Enteritidis균이 검출한계 이하로 억제되는 것이 관찰되었다. 이와 대조적으로 간장소스에서의 실험에서는 $25^{\circ}C$에서 첨가된 EGCG의 농도와 관계없이 S. Enteritidis균이 억제되지 않았으며, $4^{\circ}C$에서는 $400{\mu}g/mL$ 이상의 농도일 때 16일에 S. Enteritidis균이 검출한계 이하로 억제되는 것이 관찰되었다. 메추리알 장조림의 경우, $25^{\circ}C$에서 간장소스의 결과와 동일하게 어떠한 EGCG의 항미생물 활성이 나타나지 않았지만, $4^{\circ}C$에서 $400{\mu}g/mL$의 EGCG 농도 첨가 시 16일에 S. Enteritidis 균이 검출한계 이하로 억제되는 것이 확인되었다. 따라서, 메추리알 장조림 완제품에서 EGCG는 $4^{\circ}C$ 이하의 저온유통체계(cold chain system)하에서 S. Enteritidis과 같은 식중독세균을 제어할 수 있는 적합한 천연 식품첨가제로서 활용될 수 있을 것으로 기대된다.
우유에 포함된 Salmonella enteritidis를 효과적으로 분리하는 방법을 찾고 이를 이용하여 우유속의 S. enteritidis의 량을 추정하는 방법을 개발하였다. 일정량의 S. enteritidis를 접종한 우유로부터 guanidine thiocyanate/phenol/chloroform을 이용하여 DNA를 추출한 후 중합효소반응으로 S. enteritidis 섬모항원 유전자를 선택적으로 검출함으로써 우유 1ml당 200 colony forming unit까지 검출이 가능하였고 전체 과정의 수행에 단지 5시간 정도 걸렸다. S. enteritidis 섬모항원 유전자를 cloning한 pGem-4-Sef B(-) DNA와 인위적으로 접종된 우유로부터 추출한 Salmonella DNA를 함께 중합효소반응으로 증폭한 후 제한효소로 잘라 전기영동을 행하여 band의 강도를 비교함으로써 Salmonella DNA copy수를 추정하는 것이 가능하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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