• 한국동물학회지
• /
• 제33권2호
• /
• pp.141-151
• /
• 1990

Raf protein kinases and protein kinase C는 세포질내 serine/threonine-specific protein에 속한다. 그리고 기능적인 구조와 세포내의 분포 양상은 서로 비슷하다. Raf family oncogene를 발현시키는 a-raf와 c-raf protein kinase에 대한 antibodies로써 남생이 대뇌의 raf protein kinase의 분포를 조사하였다. 일반적으로 raf protein kinase는 제한된 지역에서 즉,general pallium,hippocampal formation, pdmordiuin hippocampi,nucleus of lateral olfactory tract, basal amygdaloid nucleus와bed of stria terminalis에 나타났으며, c-raf protein kinase의 면역학적 labeling은 a-raf보다 그 범위가 넓었다. 그렇지만 labeling되는 intensity는 오히려 a-raf보다 낮았다. 그런데 a-raf에서 가장 명확한 좋은 예는 basal amygdaloid nucleus내의 구형모양의 세포인데, 이 세포는 세포질이 매우 강하게 labeling되어 지므로 ring모양과 같이 나타났다. 특히 c-raf는 protein kinase C 가 많이 나타나는 pyramidal 세포나 Purkinje세포에 많이 존재하는 것을 볼 때 protein kinase에 의하여 활성화되는 myc와 서로 상협작용을 유도한다고 제안하는 바이다.

• 한국동물학회지
• /
• 제33권3호
• /
• pp.266-275
• /
• 1990

Onocogene의 일종인 c-raf protein kinase는 세포질 속에 존재하는 serine / threonine-speccific protein이며, 이것은 mitogene signal에 의해 활성화된다. c-raf protein kinase의 구조와 기능은 protein kinase C와 매우 유사한 것으로 생각된다. 면역세포화학적으로 c-raf protein kinase의 signal transduction을 조사하기 위하여 EC-4 세포에 tumor promotor인 12-0-tet-radecanoylphorbol-13-acetae와 mitogenic gactor인 platelet-derived growth factor로 time-course에 따라서 처리하였다. Translocotion되는 c-raf는 먼저 perinuclear membrane에 모이고 그 후에 핵내로 이동되었다. 그런데 TPA와 PDGF로 처리한 c-raf의 translocotion은 각각의 다른 경로를 가짐을 알 수 있었다. TPA와 PAGF을 장기간 처리하였을 때, c-raf protein kinase의 down regulation이 유도됨을 알 수 있었다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
• /
• 제21권5호
• /
• pp.525-528
• /
• 2011

The Raf-1 kinase inhibitory protein (RKIP) can regulate multiple key signaling pathways. Specifically, RKIP binds to Raf-1 kinase and inhibits the Ras-Raf-1-MEK1/2- ERK1/2 pathway. Additionally, Raf-1 has been shown to translocate to mitochondria and thereby protect cells from stress-mediated apoptosis. Recently, HBx was found to stimulate the mitochondrial translocation of Raf-1, contributing to the anti-apoptotic effect. We found that RKIP was downregulated during HBx-mediated hepatocarcinogenesis. In this study, we show that RKIP bound to Raf-1 and consequently inhibited the translocation of Raf-1 into mitochondria. This promoted the apoptosis of cells treated with apoptotic stimulus. Thus, the downregulation of RKIP increased the level of free Raf-1 and thereby elevated the mitochondrial translocation of Raf-1 during HBx-mediated hepatocarcinogenesis. The elevated Raf-1 mitochondrial translocation induced the increased anti-apoptotic effect and subsequently promoted HBx-mediated hepatocarcinogenesis.

• 생명과학회지
• /
• 제8권1호
• /
• pp.14-26
• /
• 1998

본 연구에서는 SDS/polyacrylamide 젤 전기영동에 의한 쥐의 성장과정에 따른 소뇌의 단백질양상의 변화양상과 immunocytochemistry를 이용하여 c-raf a-raf kinase의 정상 소뇌에서의 분포에 대해 관찰 하였으며 western blot을 이용하여 소뇌의 단백질들에서 c-raf의 존재에 대해 살펴보았다. 단백질 양상에서 쥐의 성장에 따라 crude에선,ㄴ 49,200 dalton과 169,000 dalton 사이의 bands가 양적 증가를 보였으며 cytosolic fraction 에서는 37,800 dalton의 band가 양적 증가를 보이는데 비해 membrane fraction 에서는 260,600 dalton의 band가 증가하였다. 이러한 결과로 성장 발달에 따라 고분자 량의 물질들이 이들 소뇌 부위에서 기여하였을 것으로 추정할 수 있었다. Immunocytochemistry에 의한 분석에서는 c-raf와 a-raf가 소뇌의 피질주위에서 조롱박 세포(Purkinje cell) 의 세포질 특히 핵 주변부위에서 강하게 검출되었으며 a-raf에 비해 c-raf가 더 강하게 나타났었다. 그리고 그 외에 Nucleus embolifornis의 큰 neuronal cell의 세포질 부위의 나타남을 볼 수 있었다. Immunoblot에 의한 분석에서는 crude와 cytosolic fraction에서 raf protein kinase의 존재를 확인할 수 있었으며, 이상의 결과들을 종합해 보았을 때 소뇌의 정상의 많은 신경세포(neuronal cell)에 raf protein kinase가 분포되어 있으며 이들이 정상의 cell에서 기능을 가질 것으로 추정된다.

• Animal cells and systems
• /
• 제1권4호
• /
• pp.637-640
• /
• 1997

Raf-1, a cytoplasmic serine/threonine protein kinase, serves as a central intermediate in many signaling pathways in cell proliferation, differentiation, and development. In this study, we investigated that B-raf, Drosophila homolog of the human c-raf-1, is involved in ultraviolet (UV) responsive events by using hypomorphic mutant $D-raf^{c110}$ and Draf-lacZ transgenic fly. At first, effect of UV damage on the survival of wild-type and $D-raf^{C110}$ strains was examined. In terms of $1/LD_{50}$ value, the relative ratio of UV sensitivities of wild-type versus $D-raf^{C110}$ strain was 1 : 2.2. By using quantitative $\beta$-galactosidase activity analysis, transcriptional activity of the D-raf gene promoter was also examined in UV-irradiated Draf-lacZ transgenic larvae. UV irradiation increased the expression of lacZ reporter gene in Draf-lacZ transgenic fly. However, in $D-raf^{C110}$ strain the transcriptional activity of D-raf gene promoter by UV irradiation was extensively reduced. Results obtained in this study suggest that D-raf plays a role in UV response, leading to better survival of Drosophila to UV damage.

• Animal cells and systems
• /
• 제2권1호
• /
• pp.117-122
• /
• 1998

D-raf, a Drosophila homolog of the human c-raf-1, is known as a signal transducer in cell proliferation and differentiation. A previous study found that the D-raf gene expression is regulated by the DNA replication-related element (DRE)/DRE-binding factor (DREF) system. In this study, we found the sequences homologous to transcription factor C/EBP, MyoD, STAT and Myc recognition sites in the D-raf promoter. We have generated various base substitutional mutations in these recognition sites and subsequently examined their effects on D-raf promoter activity through transient CAT assays in Kc cells with reporter plasmids p5'-878DrafCAT carrying the mutations in these binding sites. Through gel mobility shift assay using nuclear extracts of Kc cells, we detected factors binding to these recognition sites. Our results show that transcription factor C/EBP, STAT and Myc binding sites in D-raf promoter region play a positive role in transcriptional regulation of the D-raf gene and the Myo D binding site plays a negative role.

• 한국식품영양학회지
• /
• 제28권1호
• /
• pp.111-118
• /
• 2015

이전 연구들에서 rutin과 quercetin을 포함한 여러 flavonoids의 암예방 활성이 보고되었으나, rutin의 경우 섭취 시 체내에서 HVA, HPAA, DHT라는 대사체로 변형되어 흡수된다. 그러나, 이들 대사체와 관련한 암예방 효능 및 그 분자생물학적 작용기작에 대한 연구 결과는 보고된 바가 없어, 본 연구에서 이를 규명하였다. DHT는 EGF로 유도된 세포 변형을 억제하였으며, AP-1 전사인자의 활성 또한 억제하였다. DHT는 Raf-1 효소 활성을 효과적으로 저해하므로서 MEK 및 ERK의 인산화를 억제하였으며, Raf-1과 ATP는 비경쟁적으로 직접 결합하여 Raf-1 효소 활성을 저해한다는 사실을 밝혀내었다. 이와는 대조적으로, rutin은 EGF로 유도된 세포 변형, AP-1 활성, ERK 신호전달체계, Raf-1 효소 활성을 억제하지 못하였다. 이상의 연구결과는 DHT의 암예방 활성이 발암과정과 밀접한 연관이 있는 Raf-1 효소 활성을 억제하여 세포 변형을 억제하는 것과 관련되어 있다는 것을 제시한다.

• BMB Reports
• /
• 제43권3호
• /
• pp.205-211
• /
• 2010

Sprouty (Spry) proteins have previously been suggested as negative regulators of the MAPK pathway through interaction with Raf-1. However, the molecular basis of this inhibition has not been elucidated. In this study, we used cells expressing FLAGtagged Raf-1 with point mutations at known phosphorylation sites to reveal that activation of Raf-1 mutants does not correlate with their degree of interaction with Spry2. The association of Raf-1 with Spry2 in intact cells was further corroborated by immunofluorescence colocalization. Additionally, there was no significant change observed in the strength of interaction between Raf-1 mutants and Spry2 after paclitaxel treatment despite differences in the activation levels of these mutants. Thus, our study provides the evidence that Spry2 does not directly regulate Raf-1 kinase activity, but instead acts as a scaffolding protein that assists interactions between Raf-1 kinase and its direct regulators.

• 생명과학회지
• /
• 제9권1호
• /
• pp.50-57
• /
• 1999

STAT들은 다양한 cytokine이나 성장호르몬 등에 의해 활성화되어 핵으로 빠르게 이동되어 유전자 발현을 조절한다. 우리는 D-raf 유전자의 5' 발현조절영역에서 STAT결합부위 염기서열을 발견하였다. 본 연구는 D-raf 유전자발현조절에 있어서 STAT결합부위의 역할을 형질전환 초파리를 사용하여 조사하였다. STAT결합부위에 염기치환돌연변이를 도입시킨 D-raf promoter부분을 P인자 벡터의 IacZ유전자에 융합시킴으로써 리포터 플라스미드 pDraf-STATmut-lacZ를 제작하였다. 이 리포터 플라스미드를 이용하여 얻은 Draf-STATmut-lacZ형질전환 초파리의 lacZ발현을 발생단계별, 조직별로 조사한 결과, 거의 모든 발생단계에서 정상형 Draf-lacZ 형질전환 초파리의 lacZ발현에 비해 크게 감소하였다. 본 연구결과들은 STAT결합배열 부위가 D-raf유전자발현조절에 있어서 중요한 역할을 함을 개체수준에서 증명하고 있다.

• 생명과학회지
• /
• 제19권7호
• /
• pp.866-870
• /
• 2009

Fascin은 액틴결합 단백질로 형성을 포함한 많은 발생과정에 있어서 중요한 역할을 한다. Fascin은 암세포에 대한 생체표지인자로도 잘 알려져 있다. 그러나 이러한 fascin 유전자의 발현조절기전은 현재까지 잘 알려져있다. 그러나 이러한 fascin 유전자의 발현조절기전은 현재까지 잘 알려져 있지 않다. 본 연구에서는 Raf 돌연변이 초파리에서 이미 보고 되어있는 초파리 fascin 돌연변이 초파리의 휘어진 등털 표현형을 관찰함으로써 초파리 fascin 유전자의 발현이 Raf신호체계에 의해 조절되는 가를 조사하였다. RT-PCR과 Western blot의 실험 방법으로 Raf 유전자 돌연변이 초파리에서 fascin의 발현이 감소되어 있는 것을 확인하였으며, GAL4-UAS계로 Raf를 과발현시킨 초파리에서 fascin 발현이 증가하는 것을 확인할 수 있었다. 또한 세포의 증식과 이동 연구모델계로 잘 알려져 있는 초파리의 혈액세포에서 이러한 조절기전을 확인하였다. 이러한 결과들은 fascin유전자의 발현이 Raf 신호체계에 의해 조절된다는 것을 나타낸다.