The cultivated radish (Raphanus sativus L.) is a major vegetable crop in the world wide and fast-growing species that grows inhabitats of six continents. It is very important to determine hybrid seed purity in the production of hybrid Brassica vegetable seeds to avoid unacceptable contamination with self-inbred (sib) seeds. The use of random amplified polymorphic DNA (RAPD) markers for evaluating seed purity in $F_2$-hybrid radish cultivars demonstrated. One hundred eighty seeds from the F1 male and female harvest were subsequently screened for seed purity using 13 primers. The 13 primers result in 17 cultivar-specific bands and 23 variable RAPD bands scored for cultivar. RAPD analysis of hybrid seeds from the harvest revealed 128 seeds tested except underdevelopment and decayed seeds were sibs. Especially, $F_2$ hybrids of radish, OPC13, OPD20 were presented clear hybrid bands. It maintains higher than average level of genetic diversity compared with their correspondent parents. RAPD amplification of DNA extracted from germinated individuals from the female harvest reveal that 10 of 208 seeds tested were self-inbred (4.8%). RAPD analysis of hybrid seeds from the male harvest revealed 7 of the 208 seeds tested were sibs (3.4%). The RAPD may lead to a better insight in to the hybrid seed purity.
Objectives : Due to the morphological similarity and frequent occurrence of intermediate forms as well as morphological variations of aerial part, the correct identification between Rhei Radix et Rhizoma and Rhei Undulatai Rhizoma is very difficult. To develop a reliable method for correct identification and improving the quality standards of Rhei Radix et Rhizoma and Rhei Undulatai Rhizoma, we analyzed RAPD and developed SCAR marker. Methods : To amplify target DNA at the genomic level, 32 Operon 10-mer random primers were applied with four Rheum species, R. officinale, R. palmatum, R. tanguticum and R. undulatum. The nucleotide sequences were determined and species-specific primers were prepared depending on the species-specific RAPD amplicons after subcloned into the pGEM-Teasy vector. To develop the SCAR markers, species-specific PCR amplification and multiplex-PCR were carried out using the single species-specific primer pairs and combinations of them, respectively. Results : We used RAPD analysis of four Rheum plant species to obtain several species-specific RAPD amplicons. From nucleotide sequences of these RAPD amplicons, we developed two SCAR markers that amplified 314 bp and 390 bp DNA fragments in only R. undulatum but not in R. officinale, R. palmatum, R. tanguticum and R. undulatum, for distinguishing Rhei Undulatai Rhizoma and Rhei Radix et Rhizoma. Furthermore, we established SCAR markers for the simultaneous discrimination of the three species within a single reaction by using multiplex-PCR. Conclusions : These genetic markers can be used for the efficient discrimination of plants species and commercial herbal medicines between Rhei Undulatai Rhizoma and Rhei Radix et Rhizoma, to ultimately prevent indiscriminate distribution and prescription of these herbal medicines.
This study is to generate SCARs markers for identification of Perilla species. A SCAR is a genomic DNA fragment at a single genetically defined locus that is identified by PCR amplification using a pair of specific oligonucleotide primers. We derived SCARs by sequencing and cloning the both ends of the amplified products of RAPD markers. Sixteen sequence-specific primers were synthesized from eight RAPD markers, which were completely sequenced. We developed the species-specific SCAR markers which could be used successfully in detecting genetic variation in four Perilla species. These markers could be used to verify species-origins of various forms of Perilla germplasms.
Randomly amplified polymorphic DNAs were employed to study the genetic variation and gene introgression in potato dihaploids (2n=24) which were generated after interspecific pollination of tetraploid cultivars (2n=4X=48, Solanum tuberosum cv Irish Cobbler, Superior and Dejima) by haploid inducer clones (2n=2X=24, Solanum phureja 1.22, Hes-5 and Hes-6). Genetic variation and DNA marker segregation among dihaploids were observed. Most dihaploids contain S. tuberosum specific RAPD markers but haploid inducer-specific RAPD markers were also found in some dihaploids. Of six different arbitrary 10-mer oligonucletide primers which showed polymorphism betwen tetraploid cultivars and haploid inducers used, three generated amplification products which seemed to be derived from the S. phureja parent. Our results indicate that chromosomes of dihaploids may not be pure S. tuberosum and the dihaploids may not be produced by parthenogenesis.
Ramesha, K.P.;Saravanan, T.;Rao, M.K.;Appannavar, M.M.;Obi Reddy, A.
Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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제15권3호
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pp.309-314
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2002
Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD) assay was conducted to identify polymorphic markers in Amrithmahal, Krishna Valley, Hallikar, Deoni, Khillari, Ongole and Malnad Gidda breeds of South Indian cattle using twenty six primers. Of the 93 RAPD markers obtained, 53 were present in all breeds, 22 were individual specific and 18 were polymorphic for different breeds. Dual purpose breeds viz., Krishna Valley and Ongole showed less genetic divergence between them as compared to their genetic divergence from draft breeds viz., Amrithmahal, Hallikar and Khillari. Malnad Gidda was found to be a distinctly different from others studied.
For long-term conservation of germ plasm, somatic embryos of sweet potato are important because shoot tips are not amenable to liquid nitrogen storage. Somatic embryos from different genotypes were used for induction of somatic embryogenesis in a large number of genotypes. Somatic embryogenesis was induced on 2,4-D medium in all the 11 genotypes, collected from geographically distinct locations. Genetic fidelity of the regenerated plants was confirmed by morphological and RAPD markers.
Decamer RAPD primers were tested on dioeceious and hermaphrodite plants of Commiphora wightii to identify sex-specific molecular markers. Sixty different random decamer primers were screened out of which only three primers were found to be associated with sex expression. A ~1,280-bp fragment from the primer OPN06 was found to be present in all the female individuals. Another primer OPN 16 produced a unique ~400-bp amplification product in only hermaphrodite individuals. The third marker, OPA20 amplified a ~1,140-bp fragment from female and hermaphrodite DNAs, but failed to do so from the male plant DNAs.
For rapid and secure differentiation of P. infestans from other Phytophthora species, two fragments obtained from randomly amplified polymorphic DNA (RAPD) profiles were selected as markers. Also, primers for in polymerase chain reaction (PCR) to detect P. infestans specifically were developed by analyzing the sequences of ITSII regions in rDNA of Phytophthora species. The primers, PISP-1 and ITS3 amplified a single. Fragment 450 bp of about in P. infestans, but not in other fungal or bacterial isolates. Annealing temperatures and template DNA quantities were varied for the optimization of PCR conditions. From the result of the PCR detection study, species-specific primers were selected under annealing temperatures ranging from 55$^{\circ}C$ to 61$^{\circ}C$, and template DNA levels ranging from 10 pg to 100 ng.
본 연구는 RAPD마커를 이용, 멧누에와 집누에의 분자적 유연관계를 분석하였다. 공시한 35개의 primer에서 166개의 RAPD마커를 얻었으며, 이들 마커를 UPGMA에 의해 분석한 결과, 멧누에와 분자적 유사계수가 가장 낮은 품종은 잠305였고, 가장 높은 품종은 Bibaekjam이었다. 또한, 분자적 유사계수 0.55에서 멧누에와 집누에 계통군으로 분류되고, 0.60에서 3개의 아군 그룹과 2개의 독립개체로 분류되었다. 제1아군에는 J111(일본종계),$pnd^{ps}$(일본종계), Bibaekjam(일본종계)이, 제2아군에는 Galwon(중국종계), C18(중국종계), od yujam JAM306(중국종계), C108(중국종계)이, 제3아군에는 R-hwang(중국종계)이 포함되어 있었고, zebra(유럽종계)와 JAM305(일본종게)는 독립개체로 분류되었다.
본 연구는 국내의 경우 제주도의 일부지역에서만 자생하는 흑오미자(Schisandra nigra)를 RAPD법을 이용하여 자웅동주 및 자웅이주 식물의 특이적 Marker를 탐색하고저 실시 하였다. 10-mer로 구성된 80종류의 random primer를 사용하여 흑오미자를 분석한 결과 기존의 재배되고 있는 오미자(Schisandra chinensis) 또는 남오미자(Kadsura japonica)와는 다른 band pattern을 보여 주었다. 흑오미자의 자웅동주. 암그루, 숫그루의 3품종을 상기와 동일하게 80개의 primer를 사용하여 RAPD를 분석한 결과, 5종류의 random primer(OPA-17, OPA-19, OPB-3, OPB-9, OPB-16)에 대해서는 각 품종에 대한 특이적인 band가 검출되었다. 숫그루, 암그루 식물과는 다르게 자웅동주 식물은 3개체(1호 2호, 3호)간에도 서로 다른 band pattern을 보이는 특징을 갖고있다. 숫그루 특이적인 band pattern은 OPB-3 primer을 이용할 경우 750bp에서 검출되었고, 암그루는 OPA-19 primer에서 950bp, 1690bp와 OPB-3 primer의 경우 700bp에서 자웅동주 및 숫그루에서 나타나지 않는 band가 검출되었다. 이러한 결과는 흑오미자의 숫그루 및 암그루에서 나타난 특이적인 band가 유묘시기에 암ㆍ수 개체를 조기에 구별하는 genetic marker로 사용할 수 있으리라 기대된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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