• 제목/요약/키워드: Protein isolate

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국내에서 분리된 Respiratory Syncytial Virus A 아군의 항원성의 변이와 G-단백 mRNA의 RT-PCR 생산물의 제한효소 처리 및 염기 서열 결정을 통한 유전자 변이의 분석 (Analysis of Antigenic and Genetic Variability of G-protein of Respiratory Syncytial Virus Subgroup A Isolated in Korea over 8 Years(1990~1998))

  • 최은화;박기호;이환종
    • Pediatric Infection and Vaccine
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    • 제6권2호
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    • pp.219-233
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    • 1999
  • 목 적 : Respiratory syncytial virus(RSV)는 소아 하기도 감염증의 중요한 원인의 하나이다. 연구자들은 8년간 분리된 RSV A 아군의 항원상의 다양성과 G 단백 유전자의 변이를 관찰하고자 하였다. 방 법 : 서울대학교 어린이병원에서 1990년부터 1998년까지 8년 동안 분리된 RSV A 아군 179주들을 대상으로 하였다. G 단백 유전자를 역전사 중합효소 연쇄 반응으로 증폭한 후 이 증폭 산물을 AluI, HineII, MboI, PstI, RsaI 및 TagI 등의 제한효소로 처리하여 이들의 절단 양상에 따른 유전자형들의 다양성을 파악하였다. 또, RSV에 대한 단클론 항체와의 반응 여부에 따른 항원형과 유전자형의 연관성을 검정하였다. 또한, 각 유전자형의 선택된 일부 주들의 염기 서열을 결정하여 이미 보고된 표준주 및 외국의 임상 분리주들과 비교하여 계통수 분석을 시행하였다. 결 과 : 8회의 RSV 유행기 중 A 아군은 7회에서 유행하였다. A 아군 179주의 G 단백 유전자의 역전사 중합효소 연쇄 반응 증폭 산물의 제한효소에 의한 절단 양상에 따른 유전자형은 23가지였으며 이 중 12가지는 2개 이상의 바이러스주에서 나타났다. 단클론 항체와의 반응 양상에 따른 항원형은 6가지로 분류되었으며 그 중 한가지 형이 91%를 차지하였다. 항원헝과 유전형간의 상관관계는 적었다. 우리나라에서 분리된 A 아군의 G 단백의 염기 서열은 표준주틀과 91~93%의 동질성을 보였으며, 아미노산 서열은 표준주들과 85~90%의 동질성을 보였다. G 단백 염기 서열을 토대로 한 계통수에서 우리나라에서 분리된 RSV는 각기 표준주와는 다른 부위에 속하였고 A 아군은 4개의 군을 형성하면서 1988년부터 1993년까지 영국과 스페인에서 분리된 주들과 부분적으로 연관 관계를 나타냈다. 결 론 : 결론적으로 RSV A 아군의 유전자형은 항원형보다 더욱 다양한 양상을 보이며, 우리나라에서는 표준주 및 외국의 임상 분리주와는 차이가 있는 다양한 유전자형의 RSV가 유행하고 있다. 향후 RSV의 연구에는 이러한 점이 고려되어야 할 것으로 생각된다.

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토끼 항 ${\alpha}-Lactalbumin$ 항혈청에 대한 유청단백질 가수분해물의 항원성 (Antigenicity of Whey Protein Hydrolysates Against Rabbit Anti ${\alpha}-Lactalbumin$ Antiserum)

  • 하월규;전석락;김정완;이수원;이재영;손동화
    • 한국식품과학회지
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    • 제26권4호
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    • pp.436-441
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    • 1994
  • Chymotrypsin, trypsin, pancreatin, 그리고 Aspergillus oryzae 유래 단백질분해효소의 in vitro처리에 의하여 유청단백질(WPI)의 가수분해물(WPH)중 ${\alpha}-LA$ 유래의 항원성변화를 조사하기 위하여 토끼 항 ${\alpha}-LA$ 항혈청을 이용한 competitive inhibition ELISA(cELISA)와 heterologous PCA를 실시하였다. cELISA에 의하여 WPH의 monovalent항원성을 분석한 결과, pepsin전처리는 chymotrypsin, trypsin 그러고 pancreatin 가수분해물의 항원성을 더욱 감소시키는 효과가 있었으며, 열 전처리는 Asp. oryzae 유래효소 및 trypsin 가수분해물의 항원성을 더욱 감소시켰다 전체적으로 ${\alpha}-LA$유래의 monovalent 항원성은 효소처리에 의하여 $10^{-2.5}-10^{-5.5}$배 또는 그 이하로 저하되었으며, 특히 열 및 pepsin 전처리후 trypsin으로 가수분해한 경우(TDP)의 항원성은 거의 상실되었다. WPH의 가수분해도와 ${\alpha}-LA$유래의 monovalent 항원성 감소는 그다지 일치하지 않았다. Guinea pig를 이용한 PCA test에 의하여 ${\alpha}-LA$유래의 polyvalent 항원성을 분석한 결과 WPI 및 ${\alpha}-LA$는 양성으로 높게 나타났으나, WPH는 전처리유무에 관계없이 모두 음성으로 나타났다. 이는 WPI의 가수분해로 생성된 ${\alpha}-LA$유래의 peptide가 특이항체와 결합은 가능하나 생체내에서 알레르기를 유발하지 않음을 뜻하였다. 따라서, 유청단백질을 효소로 가수분해하면 유청단백질중 ${\alpha}-LA$의 allergenicity는 쉬 파괴됨을 알 수 있었다.

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Edwardsiella tarda에 대한 미꾸라지의 항체 특성과 PS-K의 면역증강효과 분석 (Characterization of Antibody and Enhanced Immune Response by PS-K against Edwardsiella tarda in Loach Misgurnus mizolepis)

  • 전려진;이영;김명석;정현도
    • 한국양식학회지
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    • 제21권4호
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    • pp.325-330
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    • 2008
  • 본 연구에서는 우리나라에서 분리된 E. tarda KFE와 일본에서 분리된 E. tarda Edk-2 두 균주의 항혈청을 만들어 생산된 항체의 특성과 방어효과를 분석하고자 하였다. 우리나라에서 많이 양식되어지고 있는 담수어인 미꾸라지를 사용하여 위의 두 가지 분리균주의 항원성에 있어서의 차이점을 조사하고자 하였다. 미꾸라지를 E. tarda 두 균주의 FKC로 각각 면역시킨 후의 혈청내 특이 항체량은 E. tarda KFE 균주로 면역시켰을 때에 비해 E. tarda Edk-2 균주로 면역시켰을 때 훨씬 높은 수치를 나타내었다. 그리고 교차반응 분석에서는 두 균주 간에 공통 항원이 미약하게 존재하는 것을 확인하였으며 미꾸라지 항혈청의 살균효과를 보았을 때에는 두 종류의 항혈청 모두에서 항체의 살균 능력이 있음을 확인하였다. 감염 예방 효과를 가지고 있는 polysaccharide-bound protein (PS-K)을 미꾸라지에 주사한 후 1주째에 E. tarda KFE 분리균주로 공격 실험을 실시하여 본 결과 누적 폐사율이 감소하였으므로, PS-K의 투여는 E. tarda를 포함한 세균성 감염에 대한 효과적인 감염 대책 방안의 하나가 될 수 있음을 확인하였다.

콩 Isoflavone의 생리활성 기능과 함량 변이 (Physiological Function of Isoflavones and Their Genetic and Environmental Variations in Soybean)

  • 김용호;김석동;홍은희;안완식
    • 한국작물학회지
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    • 제41권spc1호
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    • pp.25-45
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    • 1996
  • Soyfoods have potential roles in the prevention and treatment of chronic diseases, most notably cancer, osteoporosis, and heart disease. There is evidence that carcinogenesis are supressed by isolated soybean derived products in vivo such as a protease inhibitor, phytic acid, saponins and isoflavones. It is believed that supplementation of human diets with soybean products markedly reduces human cancer mortality rates. Especially, recent papers recognize the potential benefit of soybean isoflavone components for reducing the risk of various cancers. Isoflavones exhibit a multitude of medicinal effects that influence cell growth and regulation, which may have potential value in the prevention and treatment of cancer. In addition to potential biological effects, soybean isoflavones have the important physiological functions such as the induction of Bradyrizobium japonicum nod genes and the responses of soybean tissues to infection by Phytophthora megasperma as well as biochemical activities such as antifungal and antibacterial actions. Genistin, daidzin, glycitin and their aglycone (genistein, daidzein, glycitein) are the principal isoflavones found in soybean. Malonyl and acetyl forms have also been detected but they are thermally unstable and are usually transformed during the processing in glucoside form. Most soy products, with the exception of soy sauce, alcohol-extracted soy protein concentrate, and soy protein isolate, have total isoflavone concentrations similar to those in the whole soybean. Soybean-containing diets inhibit mammary tumorigenesis in animal models of breast cancer, therefore, it is possible that dietary isoflavones are an important factor accounting for the lower incidence and mortality from breast cancer. Of the total soybean seed isoflavones, $80\~90\%$ were located in cotyledons, with the remainder in the hypocotyls. The hypocotyls had a higher concentrations of isoflavones on a weight basis compared with cotyledons. Isoflavone contents were influenced by genetics, crop years, and growth locations. The effect of crop year had a greater impact on the isoflavone contents than that of location. The climate condition might be the attribution factor to variation in isoflavone contents. Also, while the isoflavone content of cotyledons exhibited large variations in response to high temperature during seed development, hypocotyls showed high concentration in isoflavone content. So, it is concluded that one of the factors affecting isoflavone content in soybean seeds is temperature during seed development. High temperature, especially in maturity stage, causes lower isoflavone content in soybean seed. It is also suggested that there may exist a different mechanism to maintain isoflavone contents between cotyledon and seed hypocotyls. In a conclusion, soy foods may be able to have a significant beneficial impact on public health.

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한국산 장마(Dioscorea oppasita cv. Jang-Ma)에서 분리한 Chinese yam necrotic mosaic virus (Chinese yam necrotic mosaic virus Isolated from Chinese Yam in Korea)

  • 강동균;곤도토루;신종희;신혜영;성정현;강상구;장무웅
    • 식물병연구
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    • 제9권3호
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    • pp.107-115
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    • 2003
  • 경상북도 안동, 의성, 군위, 대구의 장마 재배포장에서 모자이크와 괴저반점을 보이는 장마잎을 채집하였다. 이들 이병 잎 조직을 시료로 하여 D N 법 및 ISEM법에 의해 투과전자현미경으로 바이러스 입자를 관찰한 결과, 각각의 시료에서 ChYNMV 항혈청에 반응한 660nm의 사상형 입자가 확인되었다. 장마 잎에서 부분 정제한 바이러스에서 RNA를 추출하여 이것을 주형으로 ChYNMV 특이적 프라이머와 oligo-dT 프라이머를 이용하여 외피단백질 유전자와 3‘-말단 비전사부위를 포함하는 약 1.2kbp의 3’-말단을 증폭하였다. 외피단백질 아미노산서열은 Macluravirus로 알려진 ChYNMV (A B044386)와 97.9%의 상동성을 보여 장마에서 분리한 바이러스를 ChYNMV로 동정하였다. ChYNMV와 다른 Macluavirus의 외피 단백질 아미노산서열을 비교한 결과, M말단 영역에서 가장 많은 변이를 확인하였고 Macluravirus 속에는 잘 보존된 영역이 존재하였다.

국내 브루그만시아에서 분리한 Brugmansia mosaic virus의 특성 (Characterization of Brugmansia mosaic virus Isolated from Brugmansia spp. in Korea)

  • 박충열;김봉섭;남문;이민아;백다솜;배양수;박은혜;김정선;최종윤;임승모;문제선;이수헌
    • 식물병연구
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    • 제20권4호
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    • pp.307-313
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    • 2014
  • 2013년 5월, 경기도 수원시에서 모자이크와 기형의 병징을 보이는 천사의 나팔꽃 잎을 채집하였다. 채집한 시료는 전자현미경을 이용하여 검경한 결과 720-800 nm 길이의 사상형 입자가 관찰되었다. 전자현미경 검경 결과에 근거하여 기보고된 3종의 바이러스(Brugmansia mosaic virus, Colombian datura virus, Brugmansia suaveolens mottle virus)에 대하여 RT-PCR을 수행하였으며, BruMV에 양성반응을 보였다. 기계적 접종을 이용하여 BruMV의 병원성과 기주범위를 결정하였다. 가지과(담배, 토마토, 가지)와 비름과(땅꽈리)에서 전형적인 바이러스 병징이 나타났다. BruMV의 외피단백질을 결정하기 위하여 특이적 프라이머를 설계하였고, PCR, 클로닝, 시퀀싱을 수행하였다. 계통수 분석 결과, BruMV-SW는 BruMV SK와 가장 유사한 것으로 나타났다. 외피단백질을 이용한 뉴클레오타이드 상동성 비교에서는 BruMV 분리주와 92%와 99%의 상동성을 보였다.

Construction of a Recombinant Bacillus velezensis Strain as an Integrated Control Agent Against Plant Diseases and Insect Pests

  • Roh, Jong-Yul;Liu, Qin;Choi, Jae-Young;Wang, Yong;Shim, Hee-Jin;Xu, Hong Guang;Choi, Gyung-Ja;Kim, Jin-Cheol;Je, Yeon-Ho
    • Journal of Microbiology and Biotechnology
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    • 제19권10호
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    • pp.1223-1229
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    • 2009
  • To construct a new recombinant strain of Bacillus velezensis that has antifungal and insecticidal activity via the expression of the insecticidal Bacillus thuringiensis crystal protein, a B. thuringiensis expression vector (pHT1K-1Ac) was generated that contained the B. thuringiensis cry1Ac gene under the control of its endogenous promoter in a minimal E. coli-B. thuringiensis shuttle vector (pHT1K). This vector was introduced into a B. velezensis isolate that showed high antifungal activities against several plant diseases, including rice blast (Magnaporthe grisea), rice sheath blight (Rhizotonia solani), tomato gray mold (Botrytis cinerea), tomato late blight (Phytophthora infestans), and wheat leaf rust (Puccinia recondita), by electroporation. The recombinant B. velezensis strain was confirmed by PCR using cry1Ac-specific primers. Additionally, the recombinant strain produced a protein approximately 130 kDa in size and parasporal inclusion bodies similar to B. thuringiensis. The in vivo antifungal activity assay demonstrated that the activity of the recombinant B. velezensis strain was maintained at the same level as that of wild-type B. velezensis. Furthermore, it exhibited high insecticidal activity against a lepidopteran pest, Plutella xylostella, although its activity was lower than that of a recombinant B. thuringiensis strain, whereas wild-type B. velezensis strain did not show any insecticidal activity. These results suggest that this recombinant B. velezensis strain can be used to control harmful insect pests and fungal diseases simultaneously in one crop.

대두(大豆)(Glycine max)의 ${\gamma}-Conglycinin$의 정제(精製)와 특성(特性)에 관(關)하여 (Purification and Characterization of ${\gamma}-Conglycinin$ of Soybean (Glycine max))

  • 김인수;이춘영
    • Applied Biological Chemistry
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    • 제22권1호
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    • pp.1-9
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    • 1979
  • 대두(大豆)의 ${\gamma}-conglycinin$을 정제(精製)하고 그의 물리일(物理一) 화학적(化學的) 성질(性質)을 연구(硏究)하여 다음의 결과(結果)를 얻었다. Gamma-conglycinin은 대두(大豆)의 pH 4.5, 0.2M Nacl 추출액을 Sephadex G-150으로 분리하여 얻은 7S globulin을 DEAE-Sephadex A-50으로 column chromatography하여 정제(精製)하였다. 정제된 ${\gamma}-conglycinin$은 면역전기영동(免疫電氣泳動), polyacrylamide gel 전기영동(電氣泳動)과 gel isoelectric focusing 상으로 순수(純粹)하였다. 등전점(等電點)은 pH 5.4이었으며 질소(窒素) 16.21%, mannose 4.18, glucosamine 1.21%의 함량(含量)이었다. 아미노산 조성(組成)은 일반적(一般的)으로 lysine, dicarboxylic acid와 암모니아태(態) 질소(窒素)의 함량(含量)이 높았고 함황(含黃)아미노산과 tryptophane의 함량(含量)은 낮은 편이었다. Subunit의 등전점(等電點)은 pH $4.5{\sim}5.5$에 분희(分希)하였는데 그중 pH $4.6{\sim}5.0$에 위치(位置)한 것은 분자량(分子量) 38,000의 당(糖) peptide이었으며 pH $5.0{\sim}5.5$의 것은 분자량(分子量) 32,000의 단순(單純) peptide이었다.

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의치 구내염 환자에서 분리한 Candida albicans의 아크릴 수지에 대한 부착성과 타액 단백질과의 상호 관계 (ADHESION OF CANDIDA ALBICANS ISOLATES TO ACRYLIC RESIN IN RELATION TO SALIVARY GLYCOPROTEINS IN DENTURE STOMATITIS PATIENTS)

  • 오정환;최부병;최대균;우이형;이성복;권긍록
    • 대한치과보철학회지
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    • 제37권5호
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    • pp.698-713
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    • 1999
  • Adherence of Candida albicans(C. albicans) to the surface of a denture is believed to be an initial and essential step in the formation of denture-induced stematitis. Previous studies have provided enormous infomation on the relationship between composition of palatine gland/parotid saliva and upper denture stomatitis. Relatively little information is available on the correlation between lower denture stomatitis and sublingual-submandibular ( SLSM ) saliva. The plaque samples were collected from the two sites($100mm^2$) on the inner surface of lower partial denture corresponding to the stematitis and healthy region of the lower partial dentures of 12 denture stomatitis patients and 6 nor-mal persons who wore lower partial dentures. The samples were plated to isolate C. albicans on a selective Saboraud's dextrose agar plate and the isolates were identified by germ tube test and gram staining. The subjects were divided into group I (stomatitis with C. albican), group II (lesion without C. albicans), group III (no lesion but C. albicans), and group IV (normal and healthy denture wearer). Individual SLSM saliva($20{\mu}g$ of protein) was analyzed by SDS-PAGE (SDS -poly-acrylamide gel electrophoresis) with Coomassie brilliant blue and PAS(Periodic Acid Schinff) stain-ing. The salivary proteins separated in the polyacryamide gels were subjected to immunoblot anaysis using anti-lactoferrin, anti-sIgA, and anti-secretory component of sIgA. In this study using custom made acrylic denture resin beads(5mm in diameter) coated with stimulated individual SLSM saliva, the binding ability of individual C. albicans strains to the beads was observed. Levels of C, albicans adhered to the acrylic resin beads were determined by measuring the optical density of the bound C. albicans to the beads at 580nm. The results showed that a higher number of C. albicans was observed in the lesion site than healthy site. The saliva of group I contained more high molecular weight glycoprotein(mucin, MGI) as compared to group II, III and IV. And lactoferrin and sIgA affected to the binding ability of C. albicans to acylic resin beads. Binding ability of individual C. albicans to the acrylic resin coated with respective individual saliva was found to be greater in group I than the other 3 groups. And when bound cells of C. albicans isolated from individual subject #2 to the saliva coated beads were used binding ability of subject #2 saliva coated beads was founed to be greater than the other sutjects. These results suggested that denture induced stomatitis is related to individual patient's salivary protein composition, especially MG-1. Future studies will be directed toward saliva exam-ination of patients who have general disease and analysis of pellicles formed on prosthesis with respect to oral disease.

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파프리카 과실에 괴사반점을 일으키는 Pepper mild mottle virus의 병원형 (A Pathotype of Pepper mild mottle virus Causing Necrotic Spot Symptoms in Paprika Fruit)

  • 최국선;최승국;조점덕;조인숙
    • 식물병연구
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    • 제19권2호
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    • pp.124-127
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    • 2013
  • 시설재배단지에서 파프리카의 열매에 검은 괴저 반점 증상이 발생하였다. 이 증상주를 전자현미경, 지표식물 검정 및 RT-PCR 분석 결과, 원인 바이러스로 PMMoV로 동정되었다. 신엽에서 병징은 약한 모틀 증상, 과경과 과일에 검은 반점이 보였지만, 성숙한 잎에서는 증상이 나타나지 않았다. PMMoV의 분리주들에 대한 Tobamovirus pathotype(P)의 판별 고추계통에 접종한 결과, 모두 $P_{1.2.3}$으로 확인되었다. 분리한 PMMoV를 건전 파프리카 유묘에 기계적 접종을 통하여 이 바이러스의 병원성을 증명하였다. PMMoV 분리주들의 외피단백질 유전자의 상동성은 96-99%였다. $P_{1.2}$인 PMMoV-P2 분리주의 외피단백질 아미노산 배열 139번째가 Met인 반면, 파프리카 분리주 모두 이 위치가 Asn으로 확인되었다. 본 논문은 파프리카에서 PMMoV pathotype $P_{1.2.3}$의 동정에 관한 우리나라 최초 보고이다.