Objectives : Sihosogan-tang (SST) is one of the traditional herbal formula and also one of the Korean medical insurance medicines. It commonly used in the treatment of hepatitis, chronic gastritis, intercostal neuralgia, pleurisy, and depression in East Asia. In the present study, we have demonstrated the anti-inflammatory effects of SST in macrophage cell line. Methods : To investigate mechanism of the anti-inflammatory effect of SST, we examined the productions of nitric oxide (NO) and pro-inflammatory cytokines, and the expressions of inducible NO synthase (iNOS), nuclear factor-κ B (NF-κB) and mitogen-activated protein kinase (MAPK) on RAW 264.7 cells activated by LPS. Results : SST significantly inhibited the expression of iNOS increased by LPS, and also significantly inhibited the production of NO. In addition, SST significantly inhibited pro-inflammatory cytokines such as TNF- α and interleukines. SST inhibited the expression of NF-κB and MAPK activation. Conclusions : These results suggest that SST ameliorates inflammatory response in LPS-activated RAW 264.7 cells through the inhibition of the NF-κB and MAPK pathway. Therefore, this study supplies objective evidence for the anti-inflammatory effect of SST.
본 연구는 누은분홍잎(Acrosorium yendoi Yamada) 80% 에탄올를 가지고 추출한 후 추출물을 극성에 따라 순차적으로 용매분획을 실시하여, 80% 에탄올 추출물 및 그 분획물들의 염증반응의 주체가 되는 대식세포 계열인 RAW 264.7 세포에서 LPS로 유도된 NO의 생성억제 효과, 그리고 iNOS와 COX-2의 단백질 발현 억제효과, PGE2 생성 억제 효과 및 TNF-α와 IL-6등과 같은 pro-inflammatory cytokines 생성 억제효과 등을 알아보았다. 대식세포 계열인 RAW 264.7 세포에 LPS로 자극을 주고 누은분홍잎 80% 에탄올 추출물 및 분획물을 처리하여 확인해본 결과, 에틸아세테이트 분획물에서 NO와 PGE2 생성 억제 활성이 가장강하게 나타났으며, 농도 의존적으로 NO 및 PGE2 생성억제 활성을 보임을 확인할 수 있었고, 세포독성평가(LDH)에서는 누은분홍잎 80% 에탄올 추출물 및 분획물에 50㎍/㎖ 이하의 농도에서는 세포독성이 나타나지 않았다. 또한, 누은분홍잎의 80% 에탄올 추출물, 헥산 및 에틸아세테이트 분획물에서 iNOS 및 COX-2 발현 억제 활성을 보이고 있음을 확인할 수 있었으며, 에틸아세테이트 분획물의 경우는 뚜렷하게 농도 의존적으로 iNOS 및 COX-2 발현 억제 활성을 보임을 알 수 있었다. 이상의 결과는 누은분홍잎에 대한 효능, 이화학적 성분 및 유효성분등에 대한 연구가 전무하여 본 결과를 통해 누은분홍잎 추출물 및 활성 분회물을 이용한 항염증 효능을 갖는 유효성분 분리 및 이를 통한 작용기전 연구에 중요한 기초자료가 될 것이라 사료되고, 또한 안전하고 효과적인 항염증 관련 의약품, 의약외품 및 기능성 식품소재 개발에 대한 가능성을 제시하였다.
Gryllus bimaculatus extract (GbE) have reported that anti-inflammatory activity by suppression of pro-inflammatory cytokines. However, the effects of fermented Gryllus bimaculatus extract (FGbE) have not yet been investigated. In this study, we evaluated the anti-inflammatory and anti-wrinkle effect of the fermented Gryllus bimaculatus extracts using Bacillus subtilis (JB PMB-18) in RAW264.7 cells. Both GbE and FGbE exerted no cytotoxic effects until 1000 ㎍/mL concentration. FGbE decreased NO production and decreased iNOS and COX-2 mRNA levels in a concentration-dependent manner. In addition, the protein production of inflammatory cytokines TNF-α, IL-1β and IL-6 was effectively reduced compared to the GbE. Inhibitory activities of elastase and collagenase associated with skin wrinkle improvement were measured to be 45% and 69%, respectively, at a concentration of 500 ㎍/mL in FGbE. From these results, FGbE can be used as a health functional food and skin functional cosmetic materials for preventing inflammatory diseases because it has excellent anti-inflammatory and anti-wrinkle effects.
Gentisic acid (GA), a benzoic acid derivative present in various food ingredients, has been shown to have diverse pharmaceutical activities such as anti-carcinogenic, antioxidant, and hepatoprotective effects. In this study, we used a co-culture system to investigate the mechanisms of the anti-inflammatory and anti-adipogenic effects of GA on macrophages and adipocytes, respectively, as well as its effect on obesity-related chronic inflammation. We found that GA effectively suppressed lipopolysaccharide-stimulated inflammatory responses by controlling the production of nitric oxide and pro-inflammatory cytokines and modulating inflammation-related protein pathways. GA treatment also inhibited lipid accumulation in adipocytes by modulating the expression of major adipogenic transcription factors and their upstream protein pathways. Furthermore, in the macrophage-adipocyte co-culture system, GA decreased the production of obesity-related cytokines. These results indicate that GA possesses effective anti-inflammatory and anti-adipogenic activities and may be used in developing treatments for the management of obesity-related chronic inflammatory diseases.
IL-10 is an important anti-inflammatory cytokine that can inhibit the production of many pro-inflammatory cytokines. Both human and animal studies have shown that pro-inflammatory cytokines play an important role in pneumonia and other inflammatory lung diseases. In the present study, IL-10 knockout(KO) and wild-type mice were infected with Corynebacterium kutscheri to determine whether the severity of pathogenesis and whether protective immunity could be altered in the absence of IL-10. The survival rate was significantly lower in IL-10 KO mice than wild-type mice. The number of neutrophils in bronchoalveolar lavage fluid and blood were found to be higher in IL-10 KO mice than wild-type mice. IL-10 KO mice showed greater neutrophil infiltration, excessive inflammation, and weight-loss compared with wild-type mice. Furthermore, upregulation of IFN-$\gamma$ in bronchoalveolar lavage fluid, and upregulation of MIP-$1{\alpha}$ and IP-10 mRNA in the lungs of IL-10 KO mice compared with wild-type mice after C. kutscheri infection were observed. These results suggest that IL-10 plays an important role in the anti-inflammatory properties against C. kutscheri infection, and that lack of IL-10 leads to a more severe pulmonary inflammatory response. This increased susceptibility to C. kutscheri pneumonia is at least in part caused by IL-10 deficiency and severe recruitment of neutrophils.
An ethanolic extract of Undaria pinnatifida was fractionated using several solvents. Of the fractions, the ethyl acetate fraction had the greatest inhibitory effect on lipopolysaccharide (LPS)-induced nitric oxide (NO) production in RAW 264.7 macrophage cells. Using this fraction (U. pinnatifida ethyl acetate extract, UPE), we investigated the molecular mechanism underlying its inhibitory effect on LPS-stimulated RAW 264.7 cells. Pretreatment of the cells with up to $100{\mu}g/mL$ UPE significantly inhibited NO production and inducible nitric oxide synthase (iNOS) expression, in a dose-dependent manner. Similarly, UPE treatment markedly reduced the production of pro-inflammatory cytokines, such as interleukin (IL)-1, IL-6 and tumor necrosis factor-${\alpha}$ (TNF-${\alpha}$), while it strongly suppressed the nuclear translocation of nuclear factor-kappa B (NF-${\kappa}B$) by preventing proteolytic degradation of inhibitor of nuclear factor ${\kappa}B$$(I{\kappa}B)-{\alpha}$. Moreover, UPE treatment significantly reduced the phosphorylation of phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K)/Akt and mitogen-activated protein kinase (MAPK) in LPS-stimulated cells. These results indicate that UPE contains anti-inflammatory compounds and suggest that it might be used as a functional food material that assists in prevention of inflammatory diseases.
Oxidative stress and inflammation are important events in the development of chronic inflammatory diseases including arthritis, atherosclerosis, diabetes, hypertension. Cynomorium songaricum (CS) has been used as a traditional Korean herbal medicine, and it is currently used in traditional clinics to treat frequent urination, spermatorrhea, weakness of the sinews and constipation in the folk medicine. The aim of this study was to determine whether fractionated extracts of CS inhibit free radical generation such as DPPH radical, superoxide radical, nitric oxide and peroxynitrite, production of nitrite an index of NO, $PGE_2$, iNOS, COX-2 and pro-inflammatory cytokines in lipopolysaccharide (LPS)-treated RAW 264.7 macrophages. Cytotoxic activity of extracts on RAW 264.7 cells was measured using 5-(3-caroboxymeth-oxyphenyl)-2H-tetra-zolium inner salt (MTS) assay. Our results indicated that the most superior extract which scavenged DPPH radical, reactive oxygen species (ROS) and RNS was CS ethyl acetate extract (CSEA). Moreover, CSEA significantly inhibited the LPS-induced NO, $PGE_2$ production and iNOS, COX-2 expression accompanied by an attenuation of TNF-$\alpha$, IL-$1{\beta}$ and IL-6 formation in macrophages. Furthermore, CSEA treatment also blocked LPS-induced intracellular ROS production and the activation of NF-${\kappa}B$. These findings indicate that CSEA inhibits the production of pro-inflammatory mediators and cytokines via the suppression of ROS production and NF-${\kappa}B$ activation. Take together, these results indicate that CSEA has the potential for use as an natural anti-oxidant and an agent of anti-chronic inflammatory diseases.
This study has investigated the effect of a potent bioflavonoid, troxerutin, on diabetes-induced changes in pro-inflammatory mediators and expression of microRNA-146a and nuclear factor-kappa-B (NF-κB) signaling pathway in aortic tissue of type-I diabetic rats. Male Wistar rats were randomly divided into four groups (n = 6/each): healthy, healthy-troxerutin, diabetic, and diabetic-troxerutin. Diabetes was induced by streptozotocin injection (60 mg/kg; intraperitoneally) and lasted 10 weeks. Troxerutin (150 mg/kg/day) was administered orally for last month of experiment. Inflammatory cytokines IL-1β, IL-6, and TNF-α, as well as intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1), vascular cell adhesion molecule (VCAM), cyclooxygenase-II (COX-II), and inducible-nitric oxide synthase (iNOS) were measured on aortic samples by enzyme-linked immunosorbent assay. Gene expressions for transcription factor NF-κB, interleukin-1 receptor-associated kinase-1 (IRAK-1), TNF receptor-associated factor-6 (TRAF-6), and microRNA-146a were determined using real-time polymerase chain reaction. Ten-week diabetes significantly increased mRNA levels of IRAK-1, TRAF-6, NF-κB, and protein levels of cytokines IL-1β, IL-6, TNF-α, adhesion molecules ICAM-1, VCAM, and iNOS, COX-II, and decreased expression of microRNA-146a as compared with healthy rats (p < 0.05 to p < 0.01). However, one month treatment of diabetic rats with troxerutin restored glucose and insulin levels, significantly decreased expression of inflammatory genes and pro-inflammatory mediators and increased microRNA level in comparison to diabetic group (p < 0.05 to p < 0.01). In healthy rats, troxerutin had significant reducing effect only on NF-κB, TNF-α and COX-II levels (p < 0.05). Beside slight improvement of hyperglycemia, troxerutin prevented the activation of NF-κB-dependent inflammatory signaling in the aorta of diabetic rats, and this response may be regulated by microRNA-146a.
Objectives : Hemistepta lyrata Bunge (Bunge) has been used for treating wound, hemorrhage, fever in Korean traditional medicine. Present study investigated anti-inflammatory effect of H. lyrata chloroform extract (HLE) and its molecular mechanism involved. Methods : To assess anti-inflammatory effect of HLE, production of nitric oxide (NO) and expressions of inducible nitric oxide synthase (iNOS), cyclooxygenase-2 (COX-2), and pro-inflammatory cytokines were measured on lipopolysaccharide (LPS)-stimulated RAW 264.7 cells. Moreover, nuclear factor-${\kappa}B$ (NF-${\kappa}B$) signaling pathway was examined to elucidate its molecular mechanism. Results : Pretreatment of HLE inhibited NO production in a concentration dependent manner. HLE also decreased expression of iNOS and COX-2, and alleviated expressions of pro-inflammatory cytokines in LPS-stimulated RAW 264.7 cells. Moreover, HLE pretreatment inhibited phosphorylation of inhibitory-${\kappa}B{\alpha}$ and p65. Conclusions : These results suggest that HLE exhibits anti-inflammatory effect via inhibition of NF-${\kappa}B$.
This study investigated major constituents and anti-inflammatory effects of an ethanol extract of Platycodon grandiflorum leaves. Through HPLC analysis, chlorogenic acid and luteolin-7-O-glucoside were identified as predominant constituents in the ethanol extract. Their anti-inflammatory effects were evaluated using murine macrophage (RAW 264.7 cells) and human lung carcinoma cells (NCI-H292 & A549). The ethanol extract significantly (p<0.01) inhibited the production of nitrite, interleukin-6 (IL-6), and prostaglandin E2 (PGE2) induced by lipopolysaccharide (LPS) in RAW 264.7 cells. Furthermore, the ethanol extract suppressed the expression of cyclooxygenase-2 (COX-2) and inducible NO synthase (iNOS) proteins in RAW 264.7 cells stimulated with LPS. In NCI-H292 and A549 cells, treatment with the ethanol extract significantly (p<0.05) decreased levels of pro-inflammatory cytokines IL-6 and IL-8 induced by IL-1β. The phosphorylation of ERK rather than JNK in the mitogen-activated protein kinase signaling pathway was observed to be a more important mediator in the down-regulation of pro-inflammatory cytokines in NCI-H292 cells. These findings suggest that the ethanol extract of Platycodon grandiflorum leaves containing luteolin-7-O-glucoside exhibits promising anti-inflammatory properties.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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