The complement system is a part of the natural immune regulation mechanism against invading pathogens. Complement activation from three different pathways (classical, lectin, and alternative) leads to the formation of C5-convertase, an enzyme for cleavage of C5 into C5a and C5b, followed by C6, C7, C8, and C9 in membrane attack complex. The C9 is the last complement component of the terminal lytic pathway, which plays an important role in lysis of the target cells depending on its self-polymerization to form transmembrane channels. To address the association of C9 with traits related to disease resistance, the complete porcine C9 cDNA was comparatively sequenced to detect single nucleotide polymorphisms (SNPs) in pigs of the breeds Hampshire (HS), Duroc (DU), Berlin miniature pig (BMP), German Landrace (LR), Pietrain (PIE), and Muong Khuong (Vietnamese potbelly pig). Genotyping was performed in 417 $F_2$ animals of a resource population (DUMI: $DU{\times}BMP$) that were vaccinated with Mycoplasma hyopneumoniae, Aujeszky diseases virus and porcine respiratory and reproductive syndrome virus at 6, 14 and 16 weeks of age, respectively. Two SNPs were detected within the third exon. One of them has an amino acid substitution. The European porcine breeds (LR and PIE) show higher allele frequency of these SNPs than Vietnamese porcine breed (MK). Association of the substitution SNP with hemolytic complement activity indicated statistically significant differences between genotypes in the classical pathway but not in the alternative pathway. The interactions between eight time points of measurement of complement activity before and after vaccinations and genotypes were significantly different. The difference in hemolytic complement activity in the both pathways depends on genotype, kind of vaccine, age and the interaction to the other complement components. These results promote the porcine C9 (pC9) as a candidate gene to improve general animal health in the future.
This experiment was carried out to study the determination of survival of vitrified and thawed mammal follicular oocytes by FDA-test. Oocytes were divided into 3 groups according to attachment of cumulus cell. Group A oocytes were tightly surrounded by cumulus cell, group B oocytes were partially surrounded by cumulus cell, and group C oocytes were poorly surrounded by cumulus cell. Vitrification solution developed by our previous study (Kim et al, 1992) which consisted of permeable agent (20 % glycerol + 10 % ethylene glycol) and nonpermeable agent (30 % Ficoll + 10 % sucrose). Oocytes (7~10) loaded into 0.25 ml straw after 10 min equilibration were plunged into liquid nitrogen (- 196$^{\circ}C$) directly. The FDA-score of vitrified and thawed group A oocytes was higher in rat (4.2) than in rabbit (3.9), cow (3.8), mouse (3.4) and porcine (2.4), however that of cumulus cell was higher in rabbit (4.7) than in rat (4.1), cow (2.9), porcine (2.6) and mouse (1.4). The FDA-score of vitrified and thawed group B oocytes were 3.1 (cow), 2.9 (rabbit), 2.9 (mouse), 2.6 (rat) and 2.5 (porcine), respectively. However that of cumulus cell was higher in rabbit (3.7) than in porcine (2.6), rat (2.3), cow (1.7) and mouse (0.3). The FDA-score of vitrified and thawed group C oocytes was higher in mouse (4.1) than in cow (2.9), rabbit (2.6), rat (1.3) and porcine (1.1). As shown in the above results, The survival rates of oocytes were higher in group A than in group B and C except in mouse and cow. These results suggest that the survival of cumulus cell as well as follicular oocytes can be reliably judged by their fluorescence with FDA-test.
Kim, Ju-hyang;Chung, Chung-soo;Lee, Chul-young;Yang, Mhan-pyo
한국임상수의학회지
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제20권1호
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pp.1-6
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2003
돼지 말초혈액 다형핵 백혈구(polymorphonuclear cell; PMN)의 유주성에 있어서 conjugated linoleic acid(CLA) 이성체(CLA mixture, 10t-12c CLA, 9c-11t CLA, 9c-11c CLA 및 9t-11t CLA)의 면역증강 효과를 검토하였다. PMN에 대한 유주성은 Boyden chamber 변법으로 측정하였다. CLA 이성체들을 고농도(50∼200μM)로 사용하였을 경우 말초혈액 단핵구 세포(mononuclear cell; MNC) 및 PMN의 cell viability가 감소되거나 세포가 사멸하였다. 따라서 cell viability가 높고 세포독성을 나타내지 않는 20μM 농도로 유주활성 실험을 하였다. CLA 이성체들은 돼지 말초혈액 PMN의 유주활성에 직접적인 효과는 없었다. CLA 이성체로 배양한 MNC의 배양상층액 중 CLA mixture, 10t-12c CLA 및 9c-11t CLA 처리군에서는 PMN의 유주활성이 현저하게 증강되었으나 9c-11c CLA 및 9t-11t CLA로 배양한 MNC 배양상층액에서는 PMN의 유주활성이 나타나지 않았다. 이러한 유주성 증강효과는 checkerboard assay를 실시한 결과 진성의 유주활성이었다. 유주성 인자인 porcine recombinant (pr) interleukin(IL)-8을 이용하여 돼지 PMN에 대한 유주성을 검토한 결과, pr IL-8에 의한 PMN의 유주활성은 CLA로 배양한 MNC 배양상층액에 의한 것과 동등한 활성을 보였다. 또한 CLA로 배양한 MNC 배양상층액의 PMN에 대한 유주성을 anti-pr IL-8pAb를 사용하여 중화반응을 실시한 결과, CLA mixture로 배양한 MNC 배양상층액에 의해 증가된 PMN의 유주활성은 anti-pr IL-8 pAb 첨가에 의해 억제되어, 본 유주활성은 MNC에서 분비되는 IL-8으로 인한 것임을 강하게 시사하였다. 이상의 결과로부터 CLA 중 CLA mixture, 10t-12c CLA 및 9c-11t CLA 이성체가 돼지 말초혈액 다형핵 백혈구의 유주활성에 증강효과를 가지고 있으며, 이러한 증강효과는 CLA로 자극된 MNC에 의해 생성되는 IL-8 인자에 의한 것임을 알 수 있었다.
This Study was carried out ot investigate the effects of concentration and equilibration time of cryoprotective aagents on survival rate of slowly and ultrarapidly frozen porcine embryos. The porcine embryos following dehydration by cryoprotective agents and 0.25M sucrose were slowly freezed(from 2$0^{\circ}C$ to -7$^{\circ}C$/-1$^{\circ}C$/min., from -7$^{\circ}C$ to -35$^{\circ}C$/-0.2$^{\circ}C$/min., from -35$^{\circ}C$ to -38$^{\circ}C$/-0.3$^{\circ}C$/min.) by Cell Freezer and directly plunged into liquid nitrogen and thawed in 38$^{\circ}C$ water bath. Survival rate was defined as development rate to the morula and blastocyst stage after in vitro culture or by FDA test. The results are summarized as follows : 1. The survival rates of porcine embryos after slow frozen-thawing in the freezing medium of 0.25M sucrose added 2.0M glycerol, 3.0M DMSO, 2.0M propanediol or 2.0M glycerol+2.0M propanediol was 80.6, 84.7, 75.0 or 78.8%, respectively. 2. The survival rates of porcine embryos after slow frozen-thawing in the freezing medium of 0.50M sucrose added 2.0M glycerol, 3.0M DMSO, 2.0M propanediol or 2.0M glycerol+2.0M propanediol was 80.9, 82.4, 73.1 or 77.1%, respectively. 3. The survival rates of porcine embryos after ultrarapid frozen-thawing in the freezing medium of 0.25M sucroese added 2.0M glycerol, 3.0M DMSO, 2.0M propanediol or 2.0M glycerol+2.0M propanediol was 65.3, 68.6, 63.2 or 59.9%, respectively. 4. The survival rates of porcine embryos after ultrapid frozen-thawing in the freezing medium of 0.50M sucrose added 2.0M glycerol, 3.0M DMSO, 2.0 propanediol or 2.0M glycerol+2.0M propanediol was 67.5, 62.9, 56.9, or 62.8%, respectively. 5. The higher survival rate of porcine embryos was attained at the short period ofequilibration time(5min.) in the freezing medium added 0.25M sucrose and 3.0 DMSO compared to those of 10 or 20min. equilibration time in the same condition.
This study was carried out to investigate the effects of concentration, kinds of cryoprotectants, equilibration time, optimum thawing temperature on the survival rate of rapidly frozen porcine embryos. The porcine embryos following dehydration by cryoprotectants containing sucrose were directly plunged into liquid nitrogen and thawed in 30, 35 or 37$^{\circ}C$ water bath, Survival rate was defined as development rate on in vitro culture or FDA-test. The results are summarized as follows : 1. The high survival rate of porcine frozen embryos after rapidly thawed in freezing medium was attained 2.0M DMSO, 2.0M glycerol, 2.0M propanediol, 1.5M ethyleneglycol. 2. The high survival rate of porcine frozen embryos after rapidly thawed in freezing medium was obtained using single cryoprotectant(16.6~40.0%) than mixed cryoprotectants(12.5~33.3%). 3. The eqilibration time on the survival rate of rapidly thawed porcine frozen embryos was attained after short period of time(15.0~33.3%) in the freezing medium higher than long period of time(9.10~30.0%). 4. The thawing temperature on the survival rate of rapidly thawed porcine frozen embryos was attained at 3$0^{\circ}C$ of thawing temperature(33.3~40.6%) in the freezing medium higher than 25 or 37$^{\circ}C$ of thawing temperature.
This study was conducted to find out the recovery rate of oocyte according to the different size of follicles from porcine ovaries, and the effect of in vitro maturation of porcine immature oocyte at the different transportation temperature of ovaries from slaughter house. The results obtained were summarized as follows : 1. The number of follicles per ovary was 22.5. The number of A-and B-typed oocytes(type A: cumulus-enclosed oocyte, type-B : corona-enclosed oocyte) per ovary was 2.4. The proportion of A-and B-typed oocytes was 29.6% of the total recovery oocytes. 2. When the immature oocytes were cultured for 36, 40, 44 and 48 h at 5$^{\circ}C$ transportation temperature of ovary, the germinal vesicle breakdown(GVBD) rates of porcine oocytes were 32.5, 28.2, 22.6 and 25.9% respectively. There were no significant differences between all the culture time for GVBD. Especially, most of oocytes were observed to arrest the development beyond germinal vesicle(GV) stage. 3. When the immature oocytes were cultured for 36, 40, 44 and 48 h at $25^{\circ}C$ transportation temperature of ovary, the GVBD rates were 81.0, 90.0, 91.7 and 92.9%, and the maturation (Met-II) rates were 51.2, 78.8, 76.2 and 78.6%, respectively. 4. When the immature oocytes were cultured for 36, 40, 44 and 48 h at 38$^{\circ}C$ transportation temperature of ovary, the GVBD rates were 93.9, 96.5, 96.5 and 95.3%, and the maturation rates were 62.2, 88.4, 84.7 and 86.0%, respectively. 5. The above results showed that the maturation rates of immature oocytes between $25^{\circ}C$ and 38$^{\circ}C$ transportation temperature of ovary did not differ significantly.
Optimum drying conditions to utilize porcine blood from slaughter house for blood meals, and the effects of blood meals on growth in broiler chicks were investigated. Moisture and protein con-tents of slaughter porcine blood were 79.8 and 16.4%, respectively. The protein contents of the flash dried blood meals at 80˚C were not different from those of the spray dried blood meals at 160 and 190˚C, but higher by 17% relative to those of the spray dried blood meals at 80 and 120˚C. Results from protein analysis by SDS-polyacrylamide electrophoresis showed that flash dried blood meals at 80˚C and spray dried blood meals at 160˚C were better than spray dried blood meals at 80, 120 and 190˚C in terms of protein quality. In Feeding Trial I with broiler chicks, body weights of chicks fed 2, 4 and 6% flash dried blood meal diets at 80˚C were increased at 35 days by 5.6, 7.9 and 4.0%, respectively, compared to control group(P<0.05). In Feeding Trial II, body weights of chicks fed 4 and 6% flash dried blood meal diets at 80˚C were increased at 42 days by 4.9 and 5.3%, respectively, compared to control group(P<0.05). Feed conversion ratios of chicks fed diets 4 and 6% flash dried blood meal diets at 80˚C were significantly improved at 42 days by 7.0 and 3.7%, respectively, compared to that of control group(P<0.05). The optimum drying condition of slaughter porcine blood seemed to be the flash drying method at 80˚C
동물유래성분을 원재료로 사용하는 의료기기는 원료물질 유래 바이러스가 오염될 가능성이 있기 때문에 생산과정 중 바이러스가 오염되지 않도록 하여야 한다. 또한 생산공정은 오염될 가능성이 있는 바이러스들을 불활화하거나 제거하는 공정을 포함하여야 한다. 본 연구를 통해 돼지유래 이종골을 원재료로 사용한 바이러스 안전성이 보증된 치과용 골이식재(THE Graft$^{(R)}$) 제조공정을 개발하였다. THE Graft$^{(R)}$ 제조공정은 30% 과산화수소수와 80% 에탄올을 각각 처리하여 지방을 제거하는 공정과 $1,300^{\circ}C$ 열처리 공정을 통해 콜라겐과 유기물을 제거하는 공정을 포함한다. 또한 최종적으로 생산된 hydroxyapatite 성분의 골이식재에 25 kGy의 감마선을 조사하여 감염성 위해인자를 불활화하는 공정을 포함한다. THE Graft$^{(R)}$의 형태학적 특성을 소유래 hydroxyapatite 성분의 골이식재인 Bio-Oss와 SEM과 TEM을 이용하여 비교한 결과 구조적 특성이 유사함을 확인하였다. $1,300^{\circ}C$ 열처리 공정과 25 kGy 감마선 조사 공정의 바이러스 불활화 효과를 평가하기 위해 transmissible gastroenteritis virus (TGEV), pseudorabies virus (PRV), porcine rotavirus (PRoV), porcine parvovirus (PPV)를 모델 바이러스로 선정하였다. $1,300^{\circ}C$ 열처리 공정에서 TGEV, PRV, PRoV, PPV 모두 검출한계 이하로 불활화되었으며, 바이러스 로그 감소 값은 각각 ${\geq}4.65$, ${\geq}5.81$, ${\geq}6.28$, ${\geq}5.21$이었다. 또한 감마선 조사 공정에서도 TGEV, PRV, PRoV, PPV 모두 검출한계 이하로 불활화되었으며, 바이러스 로그 감소 값은 각각 ${\geq}4.65$, ${\geq}5.87$, ${\geq}6.05$, ${\geq}4.89$이었다. 두 공정에서 TGEV, PRV, PRoV, PPV의 누적 바이러스 로그 감소 값은 각각 ${\geq}9.30$, ${\geq}11.68$, ${\geq}12.33$, ${\geq}10.10$이었다. 이상의 결과에 의하면, THE Graft$^{(R)}$ 제조공정은 바이러스 안전성 보증을 위한 충분한 바이러스 불활화 능력을 가지고 있는 것으로 판단된다.
본 연구에서는 도축장에서 폐수 처리되는 돈혈을 활용하여 단백질 분해 효소 처리를 하여 철분함량 및 용해도가 높은 철분분말을 제조하고자 하였다. 철분함량을 높이기 위하여 효소처리 및 혈액 분리 정도에 따른 돈혈 분말의 품질특성을 분석하였고, 그 결과 수급 받은 돈혈의 전혈에 Thermoase 0.2%를 첨가한 후 $60^{\circ}C$에서 4시간 처리하여 여과, 열풍건조처리를 하였을 때 철분함량이 110.00 mg/100 g 으로 가장 높은 것으로 확인되었으며, 재수화성 역시 높은 것을 확인하였다. 또 철분 보조제로써 활용 가능 여부를 확인하기 위하여 최종조건에 따라 제조 된 돈혈분말의 생체이용률을 측정하였으며, 대표적인 시중 판매 제품 보다 2.9배 높은 것으로 확인 되었다. 따라서 영양학적 가치가 있는 돈혈을 활용하여 철분분말을 제조한다면, 수입에 의존하고 있는 철분시장에 국내산 천연재료 공급이 가능할 뿐만 아니라 이의 폐기처리로 인한 비용처리 및 환경오염을 줄일 수 있을 것으로 기대된다.
Kim, N. H.;Cui, X. S;Kim, B. K .;S. H. Jun;D. I. Jin;Lee, S. H.;Park, C. S.
한국가축번식학회지
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제26권4호
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pp.361-368
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2002
The onset of pronucleus formation and DNA synthesis in porcine oocytes following the injection of porcine or murine sperm was determined in order to obtain insights into species-specific paternal factors that contribute to fertilization. After 44h in vitro maturation, spermatozoa was injected into the cytoplasm of oocytes. After injection, all oocytes were transferred to NCSU23 medium and cultured at 39'E under 5% CO2 in air. Similar frequencies of oocytes with female pronuclei were observed after injection with porcine sperm or with murine sperm. In contrast, male pronuclei formed 8 to 9 h following the injection of porcine sperm, and 6 to 8 h following the injection of murine sperm. After pronucleus formation maternally derived microtubules were assembled and appeared to move both male and female pronuclei to the oocyte center. A few porcine oocytes entered metaphase 22 h after the injection of murine sperm, but normal cell division was not observed. The mean time of onset of S-phase in male pronuclei was 9.7 h following porcine sperm injection and 7.4 h following mouse sperm injection. These results suggested that DNA synthesis was delayed in both pronuclei until the sperm chromatin fully decondensed, and the sperm nuclear decondensing activity and microtubule nucleation abilities of the male centrosome are cell cycle dependent.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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