We published that bacterial heme was over-produced in a recombinant Corynebacterium glutamicum expressing 5-aminolevulinic acid synthase ($hemA^+$) under control of a constitutive promoter ($P_{180}$) and the heme-producing C. glutamicum had commercial potentials; as an iron feed additive for swine and as a preservative for lactic acid bacteria. To enhance the heme production, the $hemA^+$ gene was expressed under controls of various promoters in the recombinant C. glutamicum. The $hemA^+$ expression by $P_{gapA}$ (a constitutive glycolytic promoter of glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase) led 75% increase of heme production while the expression by $P_{H36}$ (a constitutive, very strong synthetic promoter) resulted in 50% decrease compared with the control ($hemA^+$ expression by $P_{180}$ constitutive promoter). The $hemA^+$ expression by a late log-phase activating $P_{sod}$ (an oxidative-stress responding promoter of superoxide dismutase) led 50% greater heme production than the control. The $hemA^+$ expression led by a heat-shock responding chaperone promoter ($P_{dnaK}$) resulted in 121% increase of heme production at the optimized heat-shock conditions. The promoter strength and induction phase are discussed based on the results for the heme production at an industrial scale.
Objective: Sarcoplasmic proteins include proteins that play critical roles in biological processes of living organisms. How seasons influence biological processes and meat quality of postmortem muscles through the regulation of protein phosphorylation remain to be investigated. In this study, the phosphorylation of sarcoplasmic proteins in pork longissimus muscle was investigated in four seasons. Methods: Sarcoplasmic proteins were extracted from 40 pork carcasses (10 for each season) and analyzed through ProQ Diamond staining for phosphorylation labeling and Sypro Ruby staining for total protein labeling. The pH of muscle, contents of glycogen and ATP were measured at 45 min, 3 h, and 9 h postmortem and the water (P2b, P21, and P22) was measured at 3 h and 9 h. Results: A total of 21 bands were detected. Band 8 (heat shock cognate 71 kDa protein; heat shock 70 kDa protein 1B) had higher phosphorylation level in summer than that in other seasons at 45 min postmortem. The phosphorylation levels of 3 Bands were significantly different between fast and normal pH decline groups (p<0.05). The phosphorylation levels of 4 bands showed negative associations with immobilized water (P21) and positive association with free water (P22). Conclusion: The phosphorylation levels of sarcoplasmic proteins involved in energy metabolism and heat stress response at early postmortem time differed depending on the seasons. These proteins include heat shock protein 70, pyruvate kinase, phosphoglucomutase-1, glucose-6-phosphate isomerase, and carbonic anhydrase 3. High temperatures in summer might result in the phosphorylation of those proteins, leading to pH decline and low water holding capacity.
Attada Tharun;Potnuru Jagadeesh;B Srinivasa Kumar;Kota Thirumala Prasad;Venkateswara Rao Anna
분석과학
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제36권4호
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pp.180-190
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2023
The presence of process related impurities in any drug or the drug product was associated with its safety, stability and efficacy. The overall literature survey proved that there is no method published on the assessment of process related impurities in brigatinib. In this study, a simple, reliable and stable HPLC qualitative method was reported for quantification of process related impurities with easy and quick extraction procedure. The impurities along with standard brigatinib was resolved on Lichrospher® C18 (250 mm × 4.6 mm; 5 ㎛ particle size) column in room temperature using methanol, acetonitrile, pH 4.5 phosphate buffer in 55:25:20 (v/v) at 1.0 mL/min as mobile phase and UV detection at 261 nm. The method produces well resolved peaks at retention time of 4.60 min, 12.28 min, 3.37 min, 7.34 min and 8.39 min respectively for brigatinib, impurity A, B, C and D. The method produces a very sensitive detection limit of 0.0065 ㎍/mL, 0.0068 ㎍/mL, 0.0053 ㎍/mL and 0.0058 ㎍/mL for impurity A, B, C and D respectively with calibration curve linear in the concentration range of 22.5-135 ㎍/mL for brigatinib and 0.0225-0.135 ㎍/mL for impurities. The method produces all the validation parameters under the acceptable level and doesn't produces any considerable changes in peak area response while minor changes in the developed method conditions. The method can effectively resolve the unknown stress degradation products along with known impurities with less % degradation. The method can efficiently resolve and quantify the impurities in formulation and hence can suitable for the routine quality analysis of brigatinib in raw material and formulation.
This study reports for the first time about a stability indicating RP-HPLC method for qualitative and quantitative determination of acalabrutinib in bulk and dosage form and in presence its impurities 1, 2 and 3. The chromatographic separation was carried on Zorbax XDB-C18 (250×4.6 mm; 5 µ id) as stationary phase, Phosphate buffer pH 6.4 and methanol 80:20 (v/v) as mobile phase at a flow rate of 1.0 mL/min, UV detection was carried at wavelength of 238 nm and the analysis was completed with a run time of 15 min. In these conditions the retention time of acalabrutinib and its impurities 1, 2 and 3 was observed to be 3.50, 4.83, 8.40 and 9.93 min respectively. The method was validated for system suitability, range of analysis, precision, specificity, stability and robustness. Spiked recovery at 50 %, 100 % and 150 % was carried for both standard and impurities and the acceptable % recovery of 98-102 was observed for acalabrutinib and both impurities studied and the % RSD in each spiked level was found to be less than 2. Stability tests were done through exposure of the analyte solution to five different stress conditions i.e expose to 1N hydrochloric acid, 1 N sodium hydroxide, 3 % peroxide, 80 ℃ temperature and UV radiation at 254 nm. In all the degradation condition, standard drug acalabrutinib was detected along with both the impurities studied and the degradation products were successfully separated. In the formulation analysis there is no other chromatographic detection of other impurities and formulation excipients. Hence the developed method was found to be suitable for the quantification of acalabrutinib and can separate and analyse impurities 1 and 2.
Polycarbonate/Acrylonitrile-Butadiene-Styrene(PC/ABS) 블렌드의 분해효과를 조사하기 위해 고전단 압출 성형기의 스크류 회전속도와 전단시간의 함수로 PC/ABS의 물성변화에 영향을 미치는 산화방지제의 효과를 연구하였다. 인산계 산화방지제로 Tris-(2,4-di-tert-butyl-phenyl phosphate) (이후 A1로 명명) and Bis(2,4-dicumylphenyl) pentaerythritol diphosphite(이후 A3로 명명)가 사용되었고, 페놀계 산화방지제는 Octadecyl 3-(3,5-di-tert-butyl-4-hydroxyphenyl) propionate(이후 A2로 명명)가 사용되었다. 열적 물성은 TGA를 통해 측정되었고 고속 전단 가공 후 크게 감소하였다. 산화방지제 A3가 포함된 PC/ABS 블렌드는 다른 산화방지제에 비해 스트레스로 유발된 degradation과, 열적 degradation이 지연되었다. 고속 전단 가공 후 UTM을 사용한 기계적 물성 또한 산화방지제 종류에 따라 각각 감소하였고, 특히, 신율의 경우 크게 감소하는 거동이 나타난 것에 비해 인장강도의 변화는 매우 적었다. 스크류 회전속도 1000 rpm, 전단부하 시간 20초 조건에서의 신율로 예를 들면, 고속 전단 가공하기 전 신율인 148%에서 A1은 91.6%, A2는 63%, A3은 131%로 감소하였다. 형태학적 물성을 알기 위해 SEM을 사용하여 PC/ABS의 분산상을 조사하였고, 스크류 회전속도와 하중이 작용한 기간이 증가함에 따라 그 크기 분포가 감소하였다. 따라서, 세 종류 산화방지제 모두 고속 전단 가공에서 스트레스로 유발되는 PC/ABS 블렌드의 degradation을 억제하고, 그 효과는 A3가 가장 뛰어난 것을 확인하였다.
내화처리(耐火處理)된 합판(合板)의 내부(內部)에 잔존(殘存)하고 있는 내화약제(耐火藥劑)의 종류(種類) 및 그 양(量)이 합판(合板) 특유(特有)의 장점(長點)인 휨 강도(强度)에 어떠한 영향(影響)을 미치는 가를 조사(調査)하기 위(爲)해 황산(黃酸) 암모늄(Ammonium sulfate), 제1인산(第一燐酸) 암모늄(Ammonium phosphate, mono basic), 제2인산(第二燐酸) 암모늄(Ammonium phosphate, di basic), 그리고 복합약제(複合藥劑)인 붕사(硼砂) 붕산(硼酸)(Borax-Boric acid) 및 미나리스(Minalith) 등(等) 5종(種)의 내화제(耐火劑)를 20% 수용액(水溶液)으로 조제(調劑)한 다음 3.5mm 메란티 합판(合板)을 3시간(時間)부터 12시간(時間) 동안 3시간(時間) 간격(間隔)으로 침지처리(浸漬處理)를 한 후(後) $120^{\circ}C$의 열판(熱板)으로 재건조(再乾燥)하여 휨 강도시험(强度試驗)을 행(行)하였다. 비례한계(比例限界)에서의 응력(應力), 탄성계수(彈性係數), 파괴계수(破壞係數) 및 비례한계(比例限界)까지의 단위체적(單位體積) 당(當) 일등(等)을 조사(調査)한 바, 약제처리(藥劑處理)한 합판(合板)의 경우가 수분처리합판(水分處理合板)(대희구(對熙區))에 비(比)해 대부분(大部分) 높게 나타났으며 붕사(硼砂) 붕산(硼酸) 처리합판(處理合板)의 경우가 4부간(部間)에서 공(共)히 가장 높은 치(値)를 보여주었다. 그리고 처리시간(處理時間)이 연장(延長)됨에 따라, 즉 약액(藥液)의 흡수량(吸收量)(약제(藥劑) 잔존량(殘存量))이 증가(增加)함에 따라 휨 강도(强度)는 대체적(大體的)으로 향상(向上)하는 것으로 나타났다. 강도적(强度的) 측면(側面)이나 침지처리시(浸漬處理時) 발생(發生)하는 결함(缺陷) 등을 고려(考慮)할 때 복합약제(複合藥劑)인 붕사(硼砂) 붕산(硼酸)이 가장 바람직한 합판용(合板用) 내화처리약제(耐火處理藥劑)로 사료되는 바이다.
The present study was conducted to evaluate the effects of fermented soybean meal (FSBM) on the level of cortisol hormone and immune-related serum proteins in weaned calves after experimentally induced lipopolysaccharide (LPS) challenge. Holstein neonatal calves (n = 21; 8 males and 13 females, BW = $42.2{\pm}6.15$ kg) were randomly allocated to one of two dietary treatments: SBM (control calf starter having soybean meal (SBM) as a main protein source) and FSBM (substitute SBM in control diet with FSBM) groups. All calves were fed milk replacer using an automatic milk-feeder according to step-down milking method and weaned at 7 weeks old. Experimental diets were given to calves ad libitum throughout the experimental period. For LPS challenge, all calves except negative control animals given phosphate buffered saline (PBS), were injected subcutaneously with Salmonella typhimurium LPS on day 7 (D7) after weaning (D0). No significant difference in growth performance and milk intake was observed between SBM and FSBM calves. Feeding FSBM diet resulted in significantly (p<0.05) higher LPS-specific IgG at D12 and D19 and LPS-specific IgA at D19 in peripheral blood. Calves fed with FSBM diet also had significantly (p<0.05) higher concentration of serum haptoglobin (Hp) at D8. Overall concentration of cortisol in FSBM group was considerably lower than that of SBM group. Results from current study indicate that FSBM may provide beneficial effects in alleviating weaning stress and enhance immune status of weaned calves.
DMSO는 배양포유류세포 동결보존의 동결보호제로써 일반적으로 사용 되어져 왔지만, DNA 메틸화 및 히스톤의 수식에 의해 일부 세포에서는 분화를 일으키는 것으로도 알려져 있다. 동결보존시의 배양세포의 안정된 분화형질유지에는 메틸화를 일으키는 DMSO 이외의 동결보호제의 사용이 필요하다. 세포독성이 낮고, 동물정자동결보존에 효과적인 것으로 알려진 아미도 화합물이 동일하게 포유류의 배양세포의 동결보존에서 동결보호작용이 있는지를(8종류의 아미드 화합물) 배양 마우스 혈관내피세포를 이용해 조사했다. 조사한 아미드 화합물 중에 아세트아미드와 락트아미드의 2종류가 배양세포에 대해서 동결보호작용이 있고, 가장 효과적인 것은 농도가 1.5 M의 락트아미드이다. 배양세포의 동결보존에 관해서는 삼투압 스트레스를 받지 않을 필요가 있기 때문에, 1.5 M 락트아미드 용액을 제작 시, 용매를 각 희석율의 PBS로 하고, 삼투압을 바꾼 동결 보존액에 동결세포의 생존율을 조사했다. 그 결과, 0.4배 농도의 PBS가 삼투압 스트레스를 가장 낮고 생존율이 가장 높음을 확인했다. 동결보존배지에 고 분자량재료를 첨가하면 세포생존율이 개선되는 것이 알려져 있기 때문에 BSA, HES, 데키스트란의 효과를 조사했다. 그 결과, 락트아미드를 이용한 동결보존배지는 $0.4{\times}PBS$를 이용한 1.5 M 락트아미드용액에 1%의 BSA를 첨가한 경우, DMSO의 동결보호작용에 필적하는 동결보호작용을 나타내는 것을 확인했다.
밭토양에 돈분액비를 기비로 전량시용하고 고추 및 배추에 대한 수량, polyamine 생합성량 및 잎의 무기성분 함량을 경시적으로 조사하였다. 고추의 적과 수량은 액비 시용량이 증가할수록 많아졌고 배추수량은 액비 시용량이 증가할수록 감소하였지만 화학비료 대비 액비 시용량간에 유의적인 수량차이는 보이지 않았다. 작물의 stress 발현물질인 polyamine의 경시적인 생합성량을 보면 두 작물 모두 액비시용구가 화학비료 시용구보다 낮아 액비에 의한 생리적인 질소stress는 발생하지 않았다. 생육시기별로 보면 생육초기에는 bound polyamine과 monoamine의 생합성량이 많았으나 생육기간의 경과에 따라 conjugated polyamine과 polyamine의 생합성량이 증가하였다. 또한 고추는 액비시용으로 화학비료에 비하여 잎의 인산 및 칼리 함량은 증가하였고 질소, 칼슘 및 마그네슘 함량은 감소하였지만, 배추 잎의 무기성분 함량은 화학비료구와 큰 차이가 없었다.
집약적인 시설재배 농업에서 화학비료와 퇴비의 연용과 과다한 사용은 용탈현상이 제한되어 있는 시설재배 토양의 염류집적현상을 쉽게 유발시키고 있다. 토양중의 염류집적에 따른 수분 흡수의 어려움을 극복하기 위하여 식물은 여러 가지의 무기 및 유기용질을 체내에 축적하는데, 특히 토양 중에 그 함량이 높아 쉽게 이용할 수 있는 $NO_3$를 삼투압 조절물질로 흡수 축적하는 것으로 결론지을 수 있다. 안전농산물의 생산 측면에서 특히 시설재배 신선야채류의 $NO_3$ 축적을 줄이기 위한 노력이 요구되고 있으며, 이를 이해서는 과다한 시비의 지양과 광조건의 개선이 필요하며 이에 더하여 토양 염류집적을 줄일 수 있는 토양 관리 및 시비 방법들이 심각하게 고려되어야 할 것이다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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