• 제목/요약/키워드: PCR Device

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소유래 성분 원재료 사용 생물의약품과 의료기기 제조 공정에서 bovine adenovirus type 1 정량 검출을 위한 TaqMan probe real-time PCR (TaqMan probe real-time PCR for quantitative detection of bovine adenovirus type 1 during the manufacture of biologics and medical devices using bovine-derived raw materials)

  • 고운영;노나경;김인섭
    • 미생물학회지
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    • 제51권3호
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    • pp.199-208
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    • 2015
  • 소의 혈액, 세포, 조직, 기관 등이 생물의약품, 조직공학제제, 세포치료제, 의료기기의 원재료로 널리 사용되고 있다. 소유래 성분 원재료에 다양한 바이러스가 오염된 사례가 있기 때문에 소유래 물질을 원재료로 사용한 제제의 바이러스 안전성 검증이 필수적으로 요구된다. Bovine adenovirus type 1(BAdV-1)은 소에게 가장 흔하게 감염되는 바이러스 중의 하나이다. 소유래 물질을 원재료로 하는 생물의약품, 조직공학제제, 세포치료제, 의료기기 등에서 BAdV-1 안전성을 확보하기 위해, 세포주, 원재료, 제조공정, 완제품에서 BAdV-1을 정량적으로 검출하고, 제조공정에서 BAdV-1 제거 검증을 위한 시험법으로 활용이 가능한 TaqMan probe real-time PCR 시험법을 확립하였다. 세포배양법에 의한 감염역가와 비교한 결과, real-time PCR 검출한계는 $7.44{\times}10^1\;TCID_{50}/ml$이었다. 확립 된 시험법의 신뢰성(reliability)을 보증하기 위해 시험법 검증을 실시한 결과, 특이성(specificity)과 재현성(reproducibility), 완건성(robustness)이 우수함을 확인하였다. 확립된 real-time PCR을 생물의약품 제조공정 검증에 적용할 수 있는지 확인한 결과, 인위적으로 BAdV-1을 오염시킨 Chinese Hamster Ovary(CHO) 세포주에서 BAdV-1를 정량적으로 검출할 수 있었다. 확립된 시험법을 항체의약품 생산용 CHO 마스터 세포주와 소유래 type 1 collagen에서 BAdV-1 검출 시험에 산업적으로 적용하였다. 위와 같은 결과에서 확립된 BAdV-1 real-time PCR 시험법은 감염역가 시험법과 같은 생물학적 시험법을 대신할 수 있는 신속하고, 특이성과 민감성이 우수한 시험법임을 확인하였다.

개인용 피부미용 복합자극기 개발 (Development of a Personal Compound Stimulus Device for Skin-care)

  • 이전;김지현;정금희
    • 전자공학회논문지SC
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    • 제49권1호
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    • pp.12-19
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    • 2012
  • 국내외적으로 경제수준의 향상과 웰빙 트렌트로 인해 피부미용기기 시장이 지속적으로 성장하고 있다. 본 연구에서는 기존 대형기기 및 일부 보급된 개인용 피부미용기기와 차별화된 개인용 피부미용 복합자극기를 개발하고자 하였다. 복합자극의 종류로 한약재 추출액의 생화학 자극, 피부 신진대사를 촉진시키는 온열 자극, 다양한 피부미용 효과가 보고되고 있는 광 자극을 선택하였으며, 이들이 동시에 제공 가능하도록 복합자극부 구조를 설계하였다. 생화학 자극은 탈지면 패드에 함유된 한약재혼합추출물이 온열에 의해 기화됨으로써 피부에 공급되도록 하였으며, 온열자극은 탄소섬유 면상 발열체를 통해, 그리고 광자극은 850nm 파장을 갖는 고출력 근적외선 LED를 통해 공급되도록 하였다. 제작된 시제품의 보완 및 성능평가를 위하여 온열자극부 및 광 자극부를 테스트하였다. 온열자극의 경우 목표온도 도달시간, 제어 오차가 각 2분 이내, ${\pm}1.5^{\circ}C$ 이내로 적절히 동작하였으며, 광 자극의 경우 근적외선 LED와 발열체가 결합된 구조로 인해 정상 동작범위 이상으로 온도가 상승하는 것이 확인되어 방열체 제작 추가함으로써 이 문제를 해결하였다. 마지막으로, C2C12 mouse myoblast을 대상으로 한약재 자극을 제외한 복합자극의 유효성을 평가하는 실험을 실시하였으며, RT-PCR분석 결과 $37^{\circ}C$ 온열자극과 광 자극의 복합자극을 인가한 그룹에서 대조군에 비해 collagen I mRNA 발현량이 4.9배, collagen III mRNA 발현량이 1.3배 증가하는 것을 확인하였다.

올리고-dT 자성입자와 측면방향 자기영동을 이용한 초고속 RNA 추출 기술 (High-Speed RNA Isolation Using Magnetic Oligo(dT) Beads and Lateral Magnetophoresis)

  • 이환용;한송이;한기호
    • 대한기계학회논문집B
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    • 제35권12호
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    • pp.1309-1316
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    • 2011
  • 본 논문에서는 올리고-dT 자성입자와 측면방향 자기영동 기술을 기반으로 하는 초고속 RNA 추출칩을 소개한다. 센자성 와이어에 유도된 고구배자장에 의해 RNA가 결합된 올리고-dT 자성입자를 분리함으로써 용해된 혈액으로부터 고속으로 RNA를 추출하였다. 유속이 20 ml/h까지 자성입자를 80% 이상의 효율로 분리할 수 있었으며, 분리시간은 총 1분 이내였다. 추출된 시료로부터 단백질에 대한 RNA 흡광비율(absorbance ratio of RNA to protein: A260/A280)이 1.7 이상임을 확인하였고, 따라서 추출된 RNA가 매우 순수함을 보였다. 추출된 RNA를 사용하여 cDNA 합성과 PCR을 수행하였으며, 이로부터 개발된 초고속 RNA 추출칩이 적은 양의 시료만으로 간편하며 빠르고 정교한 RT-PCR을 수행하는데 실용적임을 확인하였다.

Qraycam을 이용한 치면세균막 검사의 타당도와 신뢰도 (Validity and Reliability of the Plaque Score Using Qraycam)

  • 김미;이수영;조영식
    • 치위생과학회지
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    • 제15권3호
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    • pp.377-382
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    • 2015
  • 본 연구는 노인 64명을 대상으로 Qraycam을 이용한 이미지로 치면세균막 지수를 측정하여 착색 검사와의 신뢰도를 평가하고자 하였으며, 수집된 자료를 분석하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 측정 방법, 측정 부위, 지수유형별에 따른 치면세균막 지수의 각 측정값 사이에 높은 일치도가 나타났다. 측정 방법에 따른 전치부 순면의 Quigley-Hein index와 PCR의 평균은 유의한 차이가 없었으며, 측정 부위에 따른 Quigley-Hein index와 PCR의 평균은 통계적으로 유의한 차이가 있었다(p<0.001). Qraycam 검사와 착색 검사의 지수유형별 kappa계수를 확인한 결과 kappa값의 평균은 Quigley-Hein index 0.90, PCR 0.84로 전체적으로 높은 일치도를 보였다. Qraycam과 착색 검사의 전치부 순면 및 전체 치아를 Quigley-Hein index와 PCR로 측정하였을 때, 변수 간 ICC는 1에 가까운 결과를 보였다. 본 연구 결과 측정방법, 측정 부위, 지수유형별에 따른 치면세균막 지수의 일치도 평가에서 모든 측정값의 일치도가 높게 나타났다. 따라서 Qraycam은 치면세균막 검사 시 screening 도구로서 충분한 신뢰도가 있음을 확인하였다.

Fast High-throughput Screening of the H1N1 Virus by Parallel Detection with Multi-channel Microchip Electrophoresis

  • Zhang, Peng;Park, Guenyoung;Kang, Seong Ho
    • Bulletin of the Korean Chemical Society
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    • 제35권4호
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    • pp.1082-1086
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    • 2014
  • A multi-channel microchip electrophoresis (MCME) method with parallel laser-induced fluorescence (LIF) detection was developed for rapid screening of H1N1 virus. The hemagglutinin (HA) and nucleocapsid protein (NP) gene of H1N1 virus were amplified using polymerase chain reaction (PCR). The amplified PCR products of the H1N1 virus DNA (HA, 116 bp and NP, 195 bp) were simultaneously detected within 25 s in three parallel channels using an expanded laser beam and a charge-coupled device camera. The parallel separations were demonstrated using a sieving gel matrix of 0.3% poly(ethylene oxide) ($M_r$ = 8,000,000) in $1{\times}$ TBE buffer (pH 8.4) with a programmed step electric field strength (PSEFS). The method was ~20 times faster than conventional slab gel electrophoresis, without any loss of resolving power or reproducibility. The proposed MCME/PSEFS assay technique provides a simple and accurate method for fast high-throughput screening of infectious virus DNA molecules under 400 bp.

반주기내 한류성능을 위한 진공차단기의 아크소호 (Arc Extinguishing of a Vacuum Interrupter for an HTS First Peak Current Limiter)

  • 김우석;박충렬;현옥배;김혜림;임성우;유승덕;양성은
    • Progress in Superconductivity
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    • 제12권1호
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    • pp.23-26
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    • 2010
  • A double line commutation (DLC) type SFCL with first peak limiting function has been proposed for ideal fault current limiting operation. Very fast switching (commutation) without any arc or high voltage problems for any kind of switching device is needed for the first peak current limiting. We've tried to find suitable conditions for a successful switching of a Vacuum Interrupter (VI) with HTS elements as a Peak Current limiting Resistance (PCR).

Concanavalin A가 코팅 된 자성 입자를 이용한 미생물 농축 및 유전자 추출 칩 개발 (Development of Microfluidic Chip for Enrichment and DNA Extraction of Bacteria Using Concanavalin A Coated Magnetic Particles)

  • 권기록;곽호경;현경아;정효일
    • 센서학회지
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    • 제27권4호
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    • pp.237-241
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    • 2018
  • The real-time enrichment and detection of pathogens are serious issues and rapidly evolving field of research because of the ability of these pathogens to cause infectious diseases. In general, bacterial detection is accomplished by conventional colony counting or by polymerase chain reaction (PCR) after DNA extraction. As colony counting requires considerable time to cultivate, PCR is an attractive method for rapid detection. A small number of pathogens can cause diseases. Hence, a pretreatment process, such as enrichment is essential for detecting bacteria in an actual environment. Thus, in this study, we developed a microfluidic chip capable of performing rapid enrichment of bacteria and the extraction of their genes. A lectin, i.e., Concanavalin A (ConA), which shows binding affinity to the surface of most bacteria, was coated on the surface of magnetic particles to nonspecifically capture bacteria. It was subsequently concentrated through magnetic forces in a microfluidic channel. To lyse the captured bacteria, magnetic particles were irradiated by a wavelength of 532nm. The photo-thermal effect on the particles was sufficient for extracting DNA, which was consequently utilized for the identification of bacteria. Our device will help monitor the existence of bacteria in various environmental situations such as water, air, and soil.

Rapid Detection of Clostridium tetani by Recombinase Polymerase Amplification Using an Exo Probe

  • Guo, Mingjing;Feng, Pan;Zhang, Liqun;Feng, Chunfeng;Fu, Jie;Pu, Xiaoyun;Liu, Fei
    • Journal of Microbiology and Biotechnology
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    • 제32권1호
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    • pp.91-98
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    • 2022
  • Tetanus is a potentially fatal public health illness resulted from the neurotoxins generated by Clostridium tetani. C. tetani is not easily culturable and culturing the relevant bacteria from infected wounds has rarely been useful in diagnosis; PCR-based assays can only be conducted at highly sophisticated laboratories. Therefore, a real-time recombinase polymerase amplification assay (Exo-RPA) was constructed to identify the fragments of the neurotoxin gene of C. tetani. Primers and the exo probe targeting the conserved region were designed, and the resulting amplicons could be detected in less than 20 min, with a detection limit of 20 copies/reaction. The RPA assay displayed good selectivity, and there were no cross-reactions with other infectious bacteria common in penetrating wounds. Tests of target-spiked serum and pus extract revealed that RPA is robust to interfering factors and has great potential for further development for biological sample analysis. This method has been confirmed to be reliable for discriminating between toxic and nontoxic C. tetani strains. The RPA assay dramatically improves the diagnostic efficacy with simplified device architecture and is a promising alternative to real-time PCR for tetanus detection.

스마트 기기 신호 간섭에 의한 수동형 UHF 대역 RFID 태그의 인식 거리 감소에 관한 연구 (Read Range Reduction in Passive UHF RFID Tag by Smart Device Signal Interference)

  • 권종원;송태승;조원서
    • 한국전자파학회논문지
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    • 제25권1호
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    • pp.83-91
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    • 2014
  • 현재 단품 단위 태깅(Item-level tagging)을 위한 UHF 대역 RFID Tag는 원거리 인식 거리와 저가 등의 장점들 때문에 유통산업 현장에서 폭발적으로 확대 보급되고 있다. 그러나 스마트폰과 태블릿 시장의 확대에 따라 실제 현장에서는 RFID 태그와 스마트 기기 간의 신호 간섭 문제가 예상된다. 이로 인해 RFID 태그는 인식률 및 인식 거리 감소 등 성능 저하가 발생하고 있다. 특히 KT에서는 최근 900 MHz 대역의 LTE 주파수와 구형 RFID 기술의 심각한 간섭 문제를 시연회를 통해 강조하였다. 이에 따라 본 논문에서는 스마트 기기로부터 송신되는 신호로 부터 수동형 UHF 대역 RFID 태그의 간섭 내성 측정 방법을 제안한다. 또한, 시중에 유통 중인 3개의 RFID 태그용 인레이(Inlay)를 선정하여 신호 간섭에 따른 인식 거리 감소 결과를 PCR 지수를 이용하여 정량적으로 비교 평가하였다. 그 결과, 신호 간섭 영향 측면에서 WCDMA 시스템에 비해 LTE 시스템이 약 3배 정도 강하며, 일부 태그의 인식 거리 성능은 약 60 % 저하되었다.

In Vitro Development of Porcine Parthenogenetic Embryos under the Oil-free Culture System

  • Park, Sang-Kyu;Choi, Young-Ju;Roh, Sang-Ho
    • 한국수정란이식학회지
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    • 제25권4호
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    • pp.259-262
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    • 2010
  • Optimization of the preimplantation mammalian embryo culture condition was widely focused on refining medium composition under the name of chemically defined media. However, recent research revealed that the alteration of physical environment can be a crucial factor to a successful embryo development. In this study, under the same embryo density, a novel culture device named oil-free micro tube culture (MTC) system was evaluated using porcine parthenogenetic embryos. The activated oocytes were placed into the 0.2 ml thin-wall flat cap PCR tube and cultured to the blastocyst stage. As a preliminary step, embryo density and culture medium volume were optimized under a standard drop culture system. The optimal embryo density range for in vitro culture was 0.5 embryos per ${\mu}l$ in $20\;{\mu}l$ drop (20.5%) and 1.0 embryos per ${\mu}l$ in $10\;{\mu}l$ drop (20.6%). Based on these results, we compared drop culture system and 'MTC' system in terms of the developmental rate to the blastocyst stage. In $20\;{\mu}l$ medium volume, the 'MTC' system showed similar blastocyst formation rate when compared with drop culture system (20.2% versus 20.5%, respectively) while the 'MTC' system showed lower blastocyst formation rate than drop culture system in $10\;{\mu}l$ one (12.7% versus 20.0%, respectively). Therefore the $20\;{\mu}l$ MTC system may be an alternative incubation system for short-distance embryo transport without carrying the $CO_2$ incubator and this provides novel embryo culture device to clinical veterinary embryologists.