Acridine은 fungal laccase의 기질이 아님에도 불구하고 acridine을 Pycnoporus cinnabarinus SCH-3 배양액에 첨가했을 때 acridone으로 산화되었다. P. cinnabarinus SCH-3균주는 배양 중에 다량의 laccase와 3-hydroxyanthranilic acid (3-HAA)와 cinnabarinic acid (CA)를 생성했다. 정제된 laccase와 acridine을 완충용액에서 직접 반응시켰을 때 acridine은 변화되지 않았다. 그러나 laccase의 기질인 2,2'-azino-bis-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid) (ABTS)나 3-HAA를 laccase와 acridine 혼합액에 첨가했을 경우에는 acridine이 acridone으로 산화되었다. 특히 ABTS 첨가구는 3-HAA 첨가구보다 acridine 산화율이 2배 이상 높았다. 한편 정제된 laccase와 3-HAA를 완충액에서 반응시켰을 때 3-HAA는 CA로 전환되었다. 이와 같은 실험결과들은 P. cinnabarinus SCH-3의 laccase가 배양중에 생산된 3-HAA를 매개체로 사용하여 acridine을 acridone으로 산화하고 CA는 laccase에 의하여 3-HAA로부터 합성됨을 나타낸다.
To evaluate effects of ligninolytic enzyme type on the mycelial response and ligninolytic enzyme production during interspecific interactions among wood-rotting fungi, 4 fungal strains, Trichophyton rubrum LKY-7, Trichophyton rubrum LSK-27, Pycnoporus cinnabarinus, and Trichoderma viride, were selected. Regarding ligninolytic enzyme production, LKY-7 secreted laccase and manganese peroxidase (MnP), P. cinnabarinus secreted only laccase, and LSK-27 secreted only MnP in glucose-peptone medium, while T. viride did not produce any ligninolytic enzymes. In the co-culture of LKY-7 with P. cinnabarinus, the formation of aerial mycelium was observed and the enhancement of laccase activity owing to interspecific interaction appeared to be very low. In the co-culture of LKY-7 and P. cinnabarinus with LSK-27, a hypha-free clear zone was observed, which resulted in deadlock, and increased laccase or MnP activity was detected at the interaction zone. The interaction responses of LKY-7, P. cinnabarinus, and LSK-27 with T. viride were characterized by the formation of mycelial barrages along the interface. As mycelial barrages were observed at the T. viride territory and no brownish pigment was observed in the mycelial barrages, it is suggested that laccase and MnP are released as part of an offensive response, not as a defensive response. The co-culture of P. cinnabarinus with T. viride lead to the highest enhancement in laccase activity, yielding more than 14-fold increase in laccase activity with respect to the mono-culture of P. cinnabarinus. MnP activities secreted by LKY-7 or LSK-27 was generally low in interspecific interactions.
Degradations of pine, yellow poplar and sweet gum by two fungi, Pycnoporus cinnabarinus and Trichophyton rubrum LSK-27 were investigated. P. cinabarinus degraded pine block samples much faster than T rub rum LSK-27, whereas P. cinnabarinus and T rubrum LSK-27 degraded yellow poplar and sweet gum at almost the same rate. In an effort to get a better understanding of how fungi degrade lignin in wood, contents of various functional groups were analyzed. After three-months of degradation of pine flour by these fungi, the following changes were observed: an increase in condensed phenolic OH group and carboxylic acid group content, a decrease in the guaiacyl phenolic OH content, and little change of aliphatic OH group content. Further studies in the degradation of pine flour by P. cinnabarinus indicated that the increase in condensed phenolic OH group content and the decrease in guaiacyl phenolic OH group content occurred in the first month of the degradation. The changes of functional group contents in the degradation of unbleached softwood kraft pulp by P. cinnabarinus had the same trends as those in the degradation of pine flour. That is, structural alteration of lignin due to the kraft pulping process had little effect on how P. cinnabarinus degraded lignin.
This study was conducted to evaluate the degradation of aromatic dyes and the production of ligninolytic enzymes by 10 white rot fungi. The results of this study revealed that Pycnoporus cinnabarinus, Pleurotus pulmonarius, Ganoderma lucidum, Trametes suaveolens, Stereum ostrea and Fomes fomentarius have the ability to efficiently degrade congo red on solid media. However, malachite green inhibited the mycelial growth of these organisms. Therefore, they did not effectively decolorize malachite green on solid media. However, P. cinnabarinus and P. pulmonarius were able to effectively decolorize malachite green on solid media. T. suaveolens and F. rosea decolorized methylene blue more effectively than any of the other fungi evaluated in this study. In liquid culture, G. lucidum, P. cinnabarinus, Naematoloma fasciculare and Pycnoporus coccineus were found to have a greater ability to decolorize congo red. In addition, P. cinnabarinus, G lucidum and T. suaveolens decolorized methylene blue in liquid media more effectively than any of the other organisms evaluated in this study. Only F. fomentarius was able to decolorize malachite green in liquid media, and its ability to do so was limited. To investigate the production of ligninolytic enzymes in media containing aromatic compounds, fungi were cultured in naphthalene supple mented liquid media. P. coccineus, Coriolus versicolor and P. cinnabarinus were found to produce a large amount of laccase when grown in medium that contained napthalene.
한국산 주걱송편버섯(Pycnoporus cinnabarinus) SCH-3로부터 배지 내로 분비된 laccase를 ultrafiltration과 anion exchange chromatography, adsorption chromatography를 이용하여 분리 정제하고 정제된 호소의 특성을 조사하였다. Laccase는 균주의 일차 대사 과정에서 주로 생산되는 세포외 페놀 산화효소였다. 주걱송편버섯을 기본 배지에서 배양하였을 때 생장은 배양 9일에 최대였고, laccase의 활성은 배양 7일에 최대활성을 나타냈으며 배양액에서 LiP, MnP 그리고 AAO의 활성은 측정되지 않았다. Laccase의 생산에 미치는 유도원의 영향을 조사하기 위하여 배양 중인 주걱 송편버섯에 몇몇 유도원을 첨가한결과, 2,5-xylidine은 대조구에 비하여 laccase의 생산을 25배 증가 시켰다. 정제된 laccase는 SDS 젤 전기영동에서 대략 66 kDa의 분자량을 가지는 단일 폴리펩타이드(single polypeptide)였고, 탄수화물 함량은 9%였다. ABTS [2,2-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid)]를 기질로 사용하며 정제된 laccase의 $K_{m}}$과$V_{max}$를 조사한 결과 각각 $44.4{\mu}M\;and\;56.0{\mu}mole$로 측정되었다. Laccase 활성의 최적 pH는 3.0이며, 이 효소는 $60{\circ}C$에서 1시간 동안 처리하였을 때 매우 안정적이었고 $80{\circ}C$에서 10분간 처리하였을 때 효소의 활성이 반감되었다. Laccase의 분광학적 특성을 조사한 결과 구리를 포함하는 단백질로 나타났다. 일반적으로 알려진 laccase의 기질들에 대한 특이성을 조사한 결과 5mM ABTS와 5mM hydroquinone에서 높은 활성을 나타내었으며 tyrosine에서는 laccase의 활성이 나타나지 않았다. 저해제의 영향을 조사한 결과, 일반적으로 구리를 포함하는 단백질의 저해제인 $NaN_{3}$, TGA, DDC를 일정농도로 처리한 실험구에서는 효소의 활성이 완전하게 억제되었으며, p-coumaric acid와 EDTA 처리구에서는 효소의 활성이 억제되지 않았다. 한국산 주걱송편버섯 SCH-3 균주로부터 생산되는 laccase의 N-말단의 아미노산의 서열은 P. coccineus의 laccase와 호주에서 분리 동정된 P.cinnabarinus PB의 laccase와 94%가 같았다.
32종의 한국산 버섯을 석유에테르, 80% 에탄올 및 증류수로 각각 추출하여 항진균 활성을 검색한 결과, 수원그물버섯, 거친껄껄이그물버섯, 나팔버섯, 해면버섯, 주걱간버섯 및 석이버섯의 에탄올 추출물 그리고 큰낙엽버섯의 석유에테르 추출물이 효모에 대하여 활성을 보였다. 특히 석이버섯의 에탄올 추출물은 C. neoformans균에 큰 활성을 보였으며, 그 MIC 값은 $600\;{\mu}g/ml$ 이었다. 애광대버섯, 거친껄껄이그물버섯, 나팔버섯, 해면버섯, 주걱간버섯, 큰낙엽버섯 및 석이버섯의 에탄올 추출물과 석유에테르 추출물은 곰팡이에 대하여 각각 항균활성을 보였다. 또한 나팔버섯의 에탄올 추출물은 M. gypseum균에 대하여 $1,000\;{\mu}g/ml$ 이었고, 석이버섯의 에탄올 추출물은 T. mentagrophytes, M. gypseum 및 P. oryzae균에 대하여 각각 $300\;{\mu}g/ml,\;600\;{\mu}g/ml$ 및 $600\;{\mu}g/ml$ 였으며, 이 버섯의 석유에테르 추출물은 M. gypseum균에 대하여 $300\;{\mu}g/ml$의 MIC 값을 보였다.
Laccase는 여러개의 Cu를 포함하는 효소로서 분자상 산소를 환원시키면서 패놀성 및 비페놀성화합물의 산화를 촉매하는 작용을 한다. 이들 효소들은 미생물 고유의 혹은 유도상의 동위효소의 형태로 목질화된 세포벽을 침투하게 된다. 백색부후균은 많은 종류의 고유의 혹은 유도상의 동위효소를 생산한다. 이들 균체 laccase효소들은 통상 $Cu^{2+}$, $Cd^{2+}$$Ca^{2+}$, $Li^+$, $Mn^{2+}$, $Ag^+$, $Hg^{2+}$, Mn 및 $Fe^{3+}$이온과 같은 금속이온들, 페놀성 화합물, ethanol, isopropanol, cAMP, caffeine, p-anisidine, viscosinamide 및 paraquat 등과 같은 유기화합물, 질소 및 열충격 등에 의하여 유도될 수 있다. Cu 및 pHB (p-hydroxybenzoic acid)의 조합으로 laccase 활성을 30배이상 유도시킬 수 있었다. 여러 가지 inducer 가운데, 2,5-xylidine이 담자균 및 기타 다른 고등균류로부터 160배이상의 가장 효과적인 laccase의 유도효과를 나타냈다. 한편 laccase효소는 Pycnoporus cinnabarinus의 gene family로부터 자주 code로 표시되었는데, lcc3-1 혹은 lac1 및 lac3-2의 페어 gene으로 클론 및 시퀀싱되었다. 유도형 laccase의 경우 mRNA의 합성에 의존하여 laccase가 생성되며, 이러한 유도효과는 결국 새로운 단백질의 합성으로부터 기인된다.
국내 자생하는 야생버섯 추출물의 생리활성 성분을 평가하기 위하여 각 수집된 야생버섯 70% 에탄올추출물에 대한 DPPH 라디컬 소거능, 철 환원 항산화능, 환원력, 아질산염 소거능, 총 폴리페놀 및 총 플라보노이드 함량의 항산화 활성과 야생버섯의 건조시료를 이용하여 베타글루칸 함량 및 아미노산 성분 함량을 분석하였다. 본 연구의 수집된 야생버섯류 중에서 해면버섯(OK1165) 에탄올추출물의 DPPH 라디컬 소거능(60.3%), 철 환원 항산화능(3.84), 환원력(1.05), 아질산염 소거능(96.4%), 총 폴리페놀 함량(54.7 mg GAE/g) 및 총 플라보노이드 함량(19.98 mg QE/g)이 다른 버섯류에 비하여 월등히 높은 것으로 나타났다. 수집된 야생버섯류 중에서 베타글루칸 함량은 51.19%의 주걱간버섯(OK1172)이 가장 높은 것으로 나타났으며, 총 아미노산 및 총 필수아미노산 함량은 해면버섯(OK1165)에서 가장 높게 겸출되었다. 위와 같이 야생버섯들 중에서 항산화 활성 등이 우수한 버섯자원들이 존재하는 것을 확인하였으며, 천연물 유래의 강력한 항산화제로서의 활용가능성이 높을 것으로 기대한다.
본 연구에서는 냉동반죽의 제조시 발생하는 효모 및 글루텐 조직의 물리 화학적 손실로 인한 제품의 품질손실을 효과적으로 억제 예방 할 수 있는 첨가물로서 ascorbic acid, L-cysteine, SSL을 선택하고, 이 첨가물들의 최적 배합비율을 반응표면 분석법을 통하여 도출해 냈다. 그 결과로 ascorbic acid 160.4ppm, L-cysteine 63.1ppm, SSL 0.6%를 첨가하여 냉동반죽을 제조하였을 때 빵의 경도와 관능검사결과 대조구와 매우 유사한 물성을 보여주었다. 선정된 최적배합비율에 xanthan gum 0.3%(formula A)과 Ultra tex-3 5%(formula B)를 첨가한 반죽의 물성을 Farinograph를 통해 측정하였다. 두 처리구 모두 대조구에 비해 안정도가 떨어지는 경향이 나타났으나, development time이 대조구에 비해 짧고 수분흡수율이 높아 이를 이용하여 냉동반죽을 제조할 경우 빵의 부피와 조직에 유익한 효과를 줄것이라고 예상되었다. 냉동반죽을 $-20^{\circ}C$에서 냉동저장시 2주가 경과하면서 대조구의 pH와 총산도가 급격히 변화하기 시작하여 4주 경과 후부터 반죽의 품질특성과 빵의 품질특성모두 급격히 저하되기 시작하였다. 이와는 대조적으로 선정된 formula A와 B는 10주간의 냉동저장기간 동안 반죽 및 빵의 품질 변화가 적고 일정한 품질을 유지할 수 있는 것을 보여주었다. 이상과 같이 연구결과 선정된 ascorbic acid, L-cysteine, SSL, xanthan gum 및 Ultra tex-3 등의 최적배합 비율은 냉동반죽의 저장과정에서 발생할 수 있는 본질적인 문제점들을 효과적으로 극복함으로서 제빵제조시 우수한 품질특성을 갖는 냉동반죽을 제조할 수 있을 것이라 사료된다.이었다. 관능검사 결과 $10^{\circ}C$에서 30일 저장한 초고압처리구가 신맛과 쓴맛이 적고 단맛과 종합적인 기호도가 높아 가장 우수한 품질을 나타내었다.accase의 활성이 나타나지 않았다. 저해제의 영향을 조사한 결과, 일반적으로 구리를 포함하는 단백질의 저해제인 $NaN_{3}$, TGA, DDC를 일정농도로 처리한 실험구에서는 효소의 활성이 완전하게 억제되었으며, p-coumaric acid와 EDTA 처리구에서는 효소의 활성이 억제되지 않았다. 한국산 주걱송편버섯 SCH-3 균주로부터 생산되는 laccase의 N-말단의 아미노산의 서열은 P. coccineus의 laccase와 호주에서 분리 동정된 P.cinnabarinus PB의 laccase와 94%가 같았다.적 특성치 중에서 경도와 씹힘성은 염도와 양의 상관을, 관능적 특성치중에서 전반적인 수용도는 감칠맛과 전반적인 맛에 대한 수용도와 양의 상관을 나타내었다(p<0.05). 적었고 자당(蔗糖)은 칠복(七福)이 가장 많고 원기(元氣)가 가장 낮았으며 가용성전당(可溶性全糖)은 유심(琉心)이 가장 많고 천미(千美)가 가장 적었다. 3. 전단백질함량(全蛋白質含量)은 수원(水原) 147호(號)가 가장 높고 유심(琉心)이 가장 낮았으며 가용성단백질함량(可溶性蛋白質含量)은 칠복(七福)이 가장 높고 유심(琉心)이 가장 낮았으며 전단백질함량(全蛋白質含量)과 수용성단백질함량(水溶性蛋白質含量) 간(間)의 차이(差異)도 각각(各各) 상이(相異)하였다.& Inner part)의 순서등 5품종을 선정하였다. B. 숙성온도별 영향으로서 실온 $24{\sim}25^{\circ}C,\;30^{\circ}C,\;45^{\circ}C$ 별로 각 fine spirit에 oak chip을 넣고 숙성시킨
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[게시일 2004년 10월 1일]
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