Objective: There is increasing evidence for the expression of rat in gene in several extrapituitary sites including testis and ovary. We also have demonstrated that the local LH expression in the rat epididymis and uterus, the major accessory sex organs in male and female reproductive system, respectively. Design: The present study was undertaken to elucidate whether the gene for LH receptor is expressed in rat uterus and whether the expressions of uterine LH and its receptor are differentially regulated during estrous cycle. Presence of the transcripts for rat LH receptor in the rat uterine tissue were confirmed by touchdown reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR). Results: In $LH{\beta}$ semi-quantitative RT-PCR, the highest expression level was shown in estrus stage. The level of ill receptor transcripts was also fluctuated during estrous cycle. In ovariectomized rats (OVX + Oil), the expressions of both uterine LH and LH-R were markedly reduced when compared to those from normal rats. Supplement with estradiol $17{\beta}$ to the ovariectomized rats (OVX + $E_2$) restored the expression levels of LH and its receptor to the levels in uteri from normal rats. Conclusion: Our findings indicated that 1) LH and its receptor gene are expressed in the rat uterus from cycling rats, 2) the expression of uterine LH and its receptor is mainly, if not all, under the control of ovarian sex steroid(s). These results suggested that the uterine LH may act as a local regulator with auto and/or paracrine manner, though the posibility that the pituitary LH may act directly on the regulation of uterine functions could not be discarded.
대부분의 여성은 폐경 이후 신체적 변화를 겪게 된다. 폐경의 증상으로는 홍조, 발한, 몸무게의 증가와 질 건조증 등이 있다. 본 연구에서는 여성의 폐경기 증상 완화에 효능이 있는 열 가지 종류의 생약을 조합하여 만든 혼합 추출물이 동물의 폐경 모델인 난소절제(ovariectomized, OVX) 레트에 어떠한 영향을 미치는지 알아보고자 하였다. 경구투여를 통해 각각 500 mg/kg/d, 1,000 mg/kg/d 농도의 열수 추출물(자음미단)을 8주간 섭취시켰으며, 양성대조군으로 에스트라디올($50{\mu}g/mL$)을 사용하였다. 실험을 통해 자음미단이 난소절제 레트에서 몸무게를 유의적으로 감소시켰으며, 간에서의 지방 함량 증가를 억제함을 확인하였다. 자음미단의 섭취는 페경 후 증가하는 혈액의 중성지방과 콜레스테롤 수치도 감소시켰다. 또한, 자음미단은 질의 무게를 증가시켰으며, 특히 질 내벽의 상피세포의 두께에 영향을 주었다. 자음미단의 1,000 mg/kg/d의 농도에서는 에스트로디올과 유사한 정도의 내벽 두께를 관찰할 수 있었다. 따라서 본 실험을 통해 자음미단이 폐경기 여성의 증상인 비만, 대사질환 및 질 건조증의 증상을 완화해줄 수 있으며, 이를 활용한 기능성 식품의 개발이 기대된다.
Objective : The purpose of this study was to evaluate the different patterns of bone loss between the lumbar spine and the femur after ovariectomy in rats. Methods : Twenty-four female Sprague-Dawley rats underwent a sham operation (the sham group) or bilateral ovariectomy (the ovariectomized group). Four and eight weeks after operation, six rats from each of the two groups were euthanized. Serum biochemical markers of bone turnover including osteocalcin and alkaline phosphatase (ALP), which are sensitive biochemical markers of bone formation, and the telopeptide fragment of type I collagen C-terminus (CTX), which is a sensitive biochemical marker of bone resorption, were analyzed. Bone histomorphometric parameters of the 4th lumbar vertebrae and femur were determined by micro-computed tomography. Results : Ovariectomized rats were found to have higher osteocalcin, ALP and CTX levels than sham controls. Additionally, 8 weeks after ovariectomy in the OVX group, serum levels of osteocalcin, ALP and CTX were significantly higher than those of 4 weeks after ovariectomy. Bone loss after ovariectomy was more extensive in the 4th lumbar spine compared to the femur. Bone loss in the 4th lumbar spine was mainly caused by trabecular thinning, but in the femur, it was mainly caused by trabecular elimination. Conclusion : The present study demonstrates different patterns of bone loss between the 4th lumbar spine and the femur in ovariectomized rats. Therefore, when considering animal models of osteoporosis, it is important that bone sites should be taken into account.
Ovariectomy induced hyperphagia was reported in various animal models. It was postulated that hyperphagia resulted in interstinal hypertrophy and hyperplasia. Therefore, this study was performed to compare the food intake and intestinal changes between ovariectomized rats(OVX) and sham operated rats(Sham). Results of this study showed that the food intake and body weight of OVX animal was significantly higher than those of Sham animal. This results confirmed the effect of ovarian hormone on the food intake regulation. Hyperphagia induced by ovariectomy influence the intestinal cell growth and showed hyperplasia determined by protein/DNA ratio. Maltase and alkaline phosphatase activity suggested that the intestinal cell was fully matured in body groups. There were no difference in weight of other organs, such as liver, heart and kindney between two groups.
본 연구에서는 인위적 폐경을 유발시킬 수 있는 난소 절제 쥐에서와 돌나물 에탄을 추출물과 분획물의 혈 중 지질 함량 변화에 미치는 영향을 검토하였다. 난소 절제로 인해 야기되는 혈중 콜레스테를 함량의 증가는 돌나물 추출물 및 ethyl acetate 분획물의 투여에 의해 감소하는 경향이 나타났다. 혈중 중성지방 농도에서도 돌나물 분획물 투여가 유의적 감소 효과를 나타내었다. 한편, 혈 중 HDL-콜레스테를 함량은 난소 절제군에 비해 난소 절제 후 ethyl acetate 분획물을 투여한 군에서 그 수치가 유의적으로 증가 하였고, Sham군에 비해 오히려 더 증가하는 경향을 나타내었다. 혈중 중성지방 농도에서도 돌나물 분획물 투여가 유의적 감소 효과를 나타내었다. 돌나물 추출물과 분획물이 에스트로겐 감소로 인한 혈중 지질 대사에 효과를 나타낸 본 실험 결과를 미루어 보아, 돌나물 중의 에스트로겐 유사 효과를 나타내는 phytoestrogen이 있을 것으로 추론되고 이로 인해 외인성 에스트로겐 투여로 인한 부작용을 줄여 줄 수 있을 것으로 기대된다. 이상과 같은결과는 돌나물의 섭취가 폐경기 여성에게 폐경기 증상의 호전 및 순환계질환의 위험도를 감소시킬수 있을것으로 사료되어진다.
대두 이소플라본의 보충이 어린 쥐와 성숙기 쥐의 골대사에 미치는 영향을 알아보기 위하여 각각 5주령, 25주령 암컷 쥐를 대상으로 난소를 절제하지 않은 군(SH), 난소를 절제한 군(OVX), 난소를 절제하고 이소플라본 80 mg/kg b.w.을 보충시킨 군(OVX+ISO)으로 각각 분류하고 9주 동안 실험식이를 제공한 후 골대사에 미치는 일반지표 및 생화학적지표를 비교 분석하였으며 그 결과는 다음과 같다. 어린 쥐의 체중 증가량은 난소를 절제하지 않은 군($142.6\pm23.86$)에 비해 난소 절제군($174.8\pm15.36$)에서 유의성(P<0.05) 있게 증가되었고, 난소절제군에 비해 이소플라본 보충군($159.6\pm9.93$)은 다소 감소되었다. 어린 쥐에서 혈청 osteocalcin 농도는 난소를 절제하지 않은 군($24.44\pm4.6$)에 비해 난소절제군($33.27\pm6.7$)에서 유의성 (p<0.05)있게 증가되었고, 난소절제군에 비 해 이소플라본 보충군($25.45\pm5.6$)은 유의성 (p<0.05)있게 감소되었다. 어린 쥐에서 뇨중 crosslinks value농도는 난소를 절제하지 않은 군($154.78\pm14.89$)에 비해 난소절제군 ($203.43\pm20.60$)에서 유의성 (p<0.05)있게 증가되었고, 난소절제군에 비해 이소플라본 보충군($169.43\pm20.69$)은 유의성(p<0.05)있게 감소하여, 난소를 절제하지 않은 군과 유사한 수준으로 나타났다. 어린 쥐에서 혈청 인의 농도는 난소를 절제하지 않은 군($5.46\pm0.98$)에 비해 난소절제군($5.73\pm0.44$), 이소플라본 보충군($6.87\pm1.17$)에서 유의성(p<0.05)있게 증가되었고, 혈중 칼슘농도와 뇨중 칼슘, 인의 배설량은 각 군간 유의적인 차이가 나타나지 않았다. 성숙기 쥐는 혈중 칼슘과 인의 농도, 뇨중 칼슘과 인의 배설량에서 각 군 간 유의적인 차이가 나타나지 않았다. 어린 쥐와 성숙기 쥐에서 대퇴골 골밀도는 난소절제, 이소플라본 보충 유무에 따른 각군간의 유의적인 차이가 나타나지 않았으나, 성숙기 쥐는 난소를 절제하지 않은 군($0.2010\pm0.0013$)에 비해 난소절제군($0.1853\pm0.0012$)은 감소되었고, 난소절제군에 비해 이소플라본 보충군($0.1980\pm0.0014$)은 증가하는 경향을 나타냈다. 이상의 결과를 종합해 보면 어린 쥐에서 난소절제에 의한 에스트로겐 결핍은 골대사에 영향을 주었고, 대두 이소플라본 보충은 골대사 지표인 혈중 osteocalcin과 뇨중 crosslink value 함량을 유의적으로 감소시켜 골흡수를 억제하는 것으로 나타냈다. 따라서 이소플라본 섭취가 어린 쥐의 골대사에 긍정적인 효과는 확인할 수 있었으나, 성숙기 쥐의 골대사지표에는 직접적인 영향을 나타내지 않았다.
Osteoporosis is the consequence of an imbalance between osteoclastic and osteoblastic activity, coupled with an increased rate of bone turnover observed with menopause. Estrogen is generally considered to maintain bone mass through suppression of bone resorption. The purpose of this study was to evaluate the rat femoral trabecular change not only in the deficiency of estrogen but also in the administration of estrogen following ovariectomy(OVX). 30 female Sprague-Dawley rats were subjected to bilateral OVX or sham surgery(control). Groups of OVX were divided into 4 groups. The first group was injected daily with vehicle alone for 20 days after 20 weeks following OVX. The additional groups of OVX was injected daily with low, medium, or high doses of $17{\beta}-estradiol$(10, 25 or $50{\mu}g/kg$ BW, respectively). All rats were sacrified 23 weeks after OVX, and their femur were processed for H&E, MT stain and histomorphometry. The results were as follows; 1. In the histomorphometric analysis, the trabecular bone volume/tissue volume, trabecular thickness and trabecular seperation were respectively $31.2{\pm}8.3%$, $54.3{\pm}4.8{\mu}m$ and $280.7{\pm}16.4{\mu}m$ in vehicle treated OVX group and $48.6{\pm}7.3%$, $90.4{\pm}4.5{\mu}m$ and $126.3{\pm}5{\mu}m$ in sham operation group, and they showed statistical significance compare to control group. 2. The trabecular bone volume/tissue volume, trabecular thickness and trabecular separation were respectively $44.4{\pm}4.3%$, $109.5{\pm}12.3{\mu}m$ and $94.9{\pm}8.5{\mu}m$ in low doses of $17{\beta}-estradiol$ injected group and they showed statistical significance compare to OVX group. 3. The trabecular bone volume/tissue volume, trabecular thickness and trabecular separation were respectively $44.4{\pm}4.3%$, $109.5{\pm}12.3{\mu}m$ and $94.9{\pm}8.5{\mu}m$ in medium doses of $17{\beta}-estradiol$ injected group and they showed statistical significance compare to OVX group, but they didn't show statistical significance compare to low doses of $17{\beta}-estradiol$ injected group. 4. The trabecular bone volume/tissue volume, trabecular thickness and trabecular separation were respectively $46.4{\pm}4.5%$, $154.4{\pm}13.2{\mu}m$ and $113.7{\pm}12.8{\mu}m$ in high doses of $17{\beta}-estradiol$ injected group and they also showed statistical significance compare to OVX group, but they didn't show statistical significance compare to other experimental groups. From the above results, metaphyseal bone formation was markedly reduced in OVX rate but treatment of OVX rats with $17{\beta}-estradiol$ resulted in normalization of femur trabecular bone volume. But they didn't show statistical significance the effect of bone formation according to the dose dependency.
난소 절제술을 시행한 백서에서 에스트로겐 호르몬의 결핍으로 인한 상아-치수 복합체의 변화를 관찰하였다. 30 마리의 암놈 Sprague-Dawley rats을 두 군으로 나누어 1 군은 Sham-surgery를 시행하였고, 2 군은 양측 난소 절제술을 시행하였다. 백서는 12주 뒤에 모두 희생시켜, 하악 치아와 인접한 치주조직을 포함하여 절제하였고, $10\%$ 중성 포르말린 용액에 고정하였다. 두 군의 차이점을 비교하기 위하여 방사선 사진을 촬영하고, osteonectin을 이용한 면역 화학 염색법을 시행하였다. 조직 형태학적 차이점을 측정하기 위하여 영상 분석 프로그램을 사용하였고, 분석 방법으로는 Paired t-test를 사용하였다 (p < 0.05). Osteonectin을 이용한 면역 화학 염색 결과, 두 군간에는 유의성 있는 차이점이 존재하였다. 난소 절제술을 시행한 백서군에서는 전상아질층의 두께가 현저히 증가하였고, Sham-surgery 군에서는 전상아질 층과 치수 조직에서 osteonectin이 좀 더 특이적으로 염색되어 나타났다. 이러한 결과로 결론지어보면, 백서에서 인위적으로 난소 절제술을 시행하였을 때 광화되지 않은 전상아질층의 두께가 증가하고, 치수 조직과 전상아질층내의 osteonectin 함량이 감소되며, 결국 에스트로겐 결핍은 조상아 세포의 기전을 변화시킨다고 할 수 있다.
This study evaluated the structure and quality of osteoporotic vertebral bone. To induce osteoporosis, eight rats were ovariectomized (OVX). All rats were divided into two groups (Normal group: 4, OVX group: 4). Total lumbar vertebrae for each rat were scanned by in-vivo ${\mu}CT$ at 0, 4 and 8 weeks. Morphological characteristics (BV/TV, Tb.Th, Tb.N, Tb.Sp and SMI) were calculated by in-vivo ${\mu}CT$ image analyzer. Three dimensional finite element models were analyzed to investigate bone strength of OVX and Normal groups. Moreover, the elastic modulus was quantitatively analyzed to evaluate the quality changes of osteoporotic bone. In the OVX group, BV/TV, Tb.Th and Tb.N were significantly decreased at all the lumbar over time (p<0.05). We also investigated a contrary tendency in Tb.Sp and SMI, compared to the above results in each group. A degree of alteration of mechanical characteristics in OVX group was decreased over measuring time (p<0.05). Bone quality presented by distribution of elastic modulus was improved in the Normal group more than OVX group. The findings of the present study indicated that both bone structure and quality of whole lumbar could be tracked and detected by analyzing the morphological and biomechanical characteristics of bones, based on a nondestructive method.
본 연구는 난소 적출 동물 모델을 이용하여 고흥산 석류 농축액 시험군과 함께 이란산 석류 농축액을 주성분으로 하는 시판 제품의 혈청 생화학적 지표, 골밀도 등 몇 가지 지표를 분석하여 갱년기 증상 개선 효과를 비교하였다. 고흥산 석류 농축액과 시판 제품은 난소 절제 동물 모델의 골밀도(bone mineral density, BMD) 및 percent bone volume(bone volume/tissue volume), bone surface density(bone surface/tissue volume)를 증가시켰으며, 특히 고용량의 고흥산 석류 농축액(PE3)은 통계적으로 유의하게 골밀도 및 골볼륨을 증가시켰다. 시판 제품을 투여한 군도 골밀도를 증가시키는 양상을 보였으나 통계적 유의성은 없어 고흥산 석류 농축액이 이란산 석류 제품보다 골밀도 등 뼈 건강에 관련한 갱년기 증상 개선에 더 효과적이라고 사료된다. 고흥산 석류 농축액은 난소 절제에 의한 체중 증가 및 복부/내장지방 축적을 개선하였으며, 농도 의존적으로 HDL-C(high density lipoprotein cholesterol)는 증가시키고 low density lipoprotein cholesterol은 감소시켰다. 또한 고농도 석류 농축액(PE3)의 HDL-C/total cholesterol이 통계적으로 유의하게 증가하여 고흥산 석류 농축액이 갱년기 여성의 비만 및 혈중지질을 개선할 수 있을 것으로 기대된다. 불안장애 실험에서는 고흥산 석류 농축액 투여로 인해 불안장애가 개선되는 경향을 보였으나 통계적 유의성이 없었고, 이란산 시판 제품 투여 시에는 대조군에 비해 유의하게 개선시키는 것으로 나타났다. 우울증 또한 시판 제품 투여군에서는 대조군에 비해 유의하게 개선 효과를 나타내었으나 고흥산 석류 농축액 투여군에서는 우울증 개선 효과가 확인되지 않았다. 이상과 같은 결과를 통해 고흥산 석류 농축액은 난소를 적출한 rat의 골 소실을 현저히 개선하고 복부/내장지방 및 혈중지질을 농도 의존적으로 개선하여 골다공증, 비만 및 심혈관 질환과 같은 갱년기 증상에 효과가 있음을 확인하였다. 그러나 고흥산 석류 농축액 투여군에서 대표적인 갱년기 증상인 우울증과 불안장애 개선에 유의성 있는 효과가 나타나지 않는 것은 동물실험 모델에서 사람에게 나타나는 다양한 갱년기 증상을 모두 평가하기에 한계가 있는 바, 향후 추가적인 연구를 통해 고흥산 석류 농축액이 갱년기 여성에게 나타나는 여러 가지 증상 중 특정 증상에 대해 선택적으로 효과를 나타내는지에 대해 임상시험을 통해 검증할 필요가 있겠다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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