Isolation and identification of Mycoplasma were performed to clarify Mycoplasma infection of mice fed by conventional feeding at two ($K_1$, $K_2$) institutes in Korea. The twenty mice to be tested were randomly sampled from each of 10 breeding colonies in respective institute. Identification of the Mycoplasma strains isolated from the nasal cavity, lung and synovia of mice was made according to the morphology of colonies, biological and biochemical properties with special reference to M. pulmonis, M. arthrotodis and M. neurolyticum. In addition, growth inhibition test was performed using hyperimmune rabbit antisera to the strain PG-22 of M. pulmonis, the strain PG-6 of M, arthritidis and the strain PG-28 of M. neurolyticum and also differentiation of isolates from L-form bacteria was dont by Dieses staining and culture method with passage of the isolates on liquid media eliminated antibacterial drug. On the other hand, a total of 13 strains out of the 44 isolated M. pulmonis from mice was investigated for their susceptibility against 16 antibiotics in vitro. The antibiotic sensitivity test was made using $3{\times}10^4$ organisms/0.3ml on each plate(90mm diameter) with antibiotic mono-or tri-disk. The results obtained are summarized as follows: 1. Out of 20 mice from 10 breeding colonies in Kl institute, mycoplasma-like strains from the nasal cavity of 16 mice(80%) and from the lung of 8 mice(40%) were isolated, while out of 20 mice in K2 institute, M-like strains were isolated from the nasal cavity of 14 mice(70%) and from the lung of 6 mice(30%). However, no mycoplasma-like organisms were isolated from the synovia of the 40 mice examined. All the 44 strains isolated were identified as the organisms of M. pulmonis. 2. Out of the 16 antibiotics tested, penicillin, oleandomycin and bacitracin showed no activity against all the 13 M. pulmonis strains. On the contrary, lincomycin, clindamycin, chloramphenicol, tetracycline, minocycline, kanamycin, gentamycin and tobramycin showed high activity with three different antibiotic concentration of tridisk, but amikasin and spiramycin showed intermediate activity. Other antibiotics such as polymyxin B and colistin showed low activity, while erythromycin showed lower activity than others.
마이코플라스마에 감염된 대추나무, 뽕나무 및 일일초의 조직절편을 형광염색소인 DAPI(4'-6-diamidino-2-phenylindole$\cdot$2HCl), aniline blue 그리고 quinacrine(quinacrine mustard dihydrochloride)으로 염색하여 형광현미경하에서 관찰함으로서 이들 형광염색소의 마이코프라스마 감염진단에의 효용가치를 비교 조사하였다. 이병식물의 줄기절편의 절부에서 특이형광반응이 나타났으나 건전식물의 조직절편에서는 특이형광반응이 관찰되지 않음으로써, DAPI, anilinc blue 및 quinacrine 등의 형광염색소에 의한 조직염색법은 대추나무, 뽕나무 및 일일초의 마이코플라스마 감염을 식속 정확하게 진단하는 데 매우 유용한 방법임을 보여주었다. 한펀, 이들 형광염색소 중에서는 DAPI가 가장 효과적이었다.
형광색소(蛍光色素) DAPI(4'-6-diamidino-2-phenylindole, 2HCI)와 형광원미경(蛍光願微鏡)을 이용(利用)한 조직화학적(組織化學的) 기법(技法)으로 빗자루병(病)에 걸린 대추나무 조직내(組織內)의 마이코플라스마 분포(分布)를 조사(調査)한 결과(結果), 빗자루병징(病徵)이 나타나 있는 가지에서는 외관상(外觀上) 건전엽(健全葉)을 포함(包含)하여 모든 잎과 줄기에서 마이코 플라스마가 검출(檢出)되었으나 병징(病徵)이 나타나 있지 않은 가지의 잎과 줄기에서는 마이코플라스마가 검출(檢出)되지 않았다. 또한 감염(感染)된 나무의 뿌리조직(組織)에서도 뚜렷한 형광반응(蛍光反應)이 나타남으로써 마이코플라스마가 뿌리조직(組織)에도 많이 존재하고 있음을 알 수 있다.
뽕나무 오갈병 마이코플라스마가 매개곤충인 마름무늬매미충에 의하여 5가지 초본식물(일일초, 화이트클로우버, 라디노클로우버, 레드클로우버, 자운영)에 전염되었음이 병징발현과 광학 및 전자현미경적 방법에 의하여 확인되었다. 전염된 식물에서는 마름무늬매미충이 적어도 25일 이상 생존하였고, 산란이 확인되었다. 이 병의 잠복기간은 일일초에서 $25\~30$일, 클로우버류와 자운영에서는 $35\~40$일로 나타났다. 감염된 식물의 공통된 병징은 잎의 변색으로, 일일초는 엽맥투화 및 황화, 화이트 및 라디노클로우버는 갈색, 레드클로우버는 적색, 자운영의 잎은 광색으로 각각 나타났다. 한편 클로우버류와 자운영에서는 상기한 잎의 변색과 함께 식물체에 위축병상이 나타났다. Dienes 염색에 의한 광학현미경적 진단방법은, 모든 이병식물의 줄기 사부가 특이하게 염색디어 뽕나무 오갈병 마이코플라스마의 검출에 신빙성이 있고, 사용하기에 간편한 것으로 나타났다. Toluidine blue 염색에 의한 광학현미경적 방법과 전자현미경 관찰로, 이병식물조직내에서 마이코플라스마의 존재가 확인됨으로써 이 병의 전염이 입증되었다.
Mycoplasma pneumoniae의 형태적(形態的) 분화과정(分化過程)을 광학(光學) 및 Carbon replication과 critical point drying 전자현미경 기술(技術)을 이용하여 관찰(觀察)하였다. 단세포(單細胞)로 부터 시작하는 전분화(全分化) 과정에서 이 세균(細菌)은 구형(球形)과 방추형(紡錘形)의 세포형태(細胞形態)로 특유(特有)한 분화(分化)를 하며 이 과정은 배양액(培養液)의 pH변화(變化)와 일치(一致)하여 진행(進行)되었다. 본(本) 연구(硏究) 결과(結果)로 부터 M. pneumoniae의 단세포(單細胞)에서 시작되는 새로운 생활회로(生活回路)를 다음과 같이 제기(提起)하였다. 단세포기(單細胞期)를 지나 제1분열기(第1分裂期)에는 구형세포(球形細胞)가 주로 대수증식기(對數增殖期)의 초기에 이분법(二分法)에 의하여 분열하고 그 후에 방추형 세포(細胞)가 분절법(分節法)에 의하여 분열하는 제2분열기(第2分裂期)가 뒤 따른다. 방추형(紡錘形)의 긴 세포(細胞)는 극성(極性)을 갖고 세포 한쪽 끝으로 부터 성장(成長)하여 수 많은 방추형세포에 의한 망상기(網狀期)가 된다. 이와 같은 생장회로(生長回路)는 좋은 생장(生長) 환경에서는 반복되지만 pH가 6.8 이하로 떨어지거나 다른 조건(條件)들이 나빠지면 세포표면(細胞表面)이 조악(粗惡)한 구형(球形)으로 변형(變形)되어 사멸기(死滅期)에 들어가 모든 세포(細胞)는 생명력(生命力)을 상실하게 된다.
붉나무빗자루병은 국내외적(國內外的)으로 처음으로 발견된 병(病)으로서 그 병원체(病原體), 병징(病徵), 전염경로(傳染經路) 항생물질반응(抗生物質反應) 등을 조사(調査)하였다. 1. 붉나무빗자루병의 병징(病徵)은 지엽(枝葉)의 총생(叢生), 기관(器官)의 위축(萎縮), 위황(萎黃), 화기(花器)의 엽화(葉化) 등 빗자루병 특유(特有)의 양상을 나타내고 있다. 2. 이병주(罹病株)의 총엽병(總葉柄) 및 주맥조직(主脈組織)을 전자현미경(電子顯微鏡)에 의해서 관찰한 결과 사관세포(篩管細胞) 및 사부유세포(篩部柔細胞)에서 mycoplasma-like organism 이 관찰되었다. 3. 본(本) 병원체(病原體)는 unit membrane에 싸여 있고 이분(二分), 출아(出芽)에 의하여 증식(增殖)하며 사공(篩孔)을 통해서 식물체내(植物体內) 이동(移動)을 하는 것이다. 4. 이병엽(罹病葉) 주맥(主脈)의 사관세포(歸管細胞)는 위축(萎縮)되었고 각(各) 유관속(維管束)의 사부(篩部)는 분리(分離)되어 있는데 반하여 목부(木部)는 서로 연결되어 있다. 이병주(罹病株)의 엽내조직(葉內組織)은 선상표피(腺狀表皮)가 나타나지 않았다. 5. 전자현미경관찰결과(電子顯微鏡觀察結果) 도관세포(導管細胞)에는 이상결정물질(異常結晶物質), 호(好) osmium성(性) 과립(顆粒)들이 관찰되었고 엽록체(葉綠體)의 grana 구조(構造)가 미발달(未發達)되어 있었다. 6. 접목전염(接木傳染)이 용이(容易)하며 아접(芽接)이 절접(切接)보다 전염성이 높았고 접아(接芽)나 접수(接穗)가 활착되지 않았어도 전염은 가능했다. 그러나 즙액전염(汁液傳染), 충매전염(虫媒傳染)은 부정적이었다. 7. Teracyclin과 terramycin을 처리(處理)한 효과(効果)는 일시적이었으며 영구치료(永久治療)는 되지 않았다. 또한 근부침지(根部浸漬)가 엽면살포(葉面撒布)보다 반응(反應)이 좋았으며 농도(濃度)는 근부침지(根部浸漬)에서 1,000 ppm이 가장 효과적(効果的) 이었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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