• 대한본초학회지
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• 제25권3호
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• pp.65-71
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• 2010

Objectives：To develop and validate HPLC-PDA methods for simultaneous determination of seven constituents in Samchulkunbi-tang (SKT). Additionally, we investigated the cytotoxicity against BEAS-2B cell line and splenocytes of SKT. Methods：Reverse-phase chromatography using a Gemini $C_{18}$ column operating at $40^{\circ}C$, and photodiode array (PDA) detection at 230, 254 and 280 nm, were used for quantification of the three marker components of SKT. The mobile phase using a gradient flow consisted of two solvent systems. Solvent A was 1.0% (v/v) aqueous acetic acid and solvent B was acetonitrile with 1.0% (v/v) acetic acid. The cytotoxicity of SKT were measured by the CCK-8 assay method. Results：Calibration curves were acquired with $r^2$>0.9999, and the relative standard deviation (RSD) values (%) for intra- and inter-day precision were less than 6.0%. The recovery rate of each compound was in the range of 86.89-109.78%, with an RSD less than 4.0%. The contents of seven compounds in SKT were 1.39-6.84 mg/g. SKT had no cytotoxicity effect at 50-200 ${\mu}g$/mL concentrations. Conclusions：The established method will be helpful to improve quality control and in vitro efficacy study of SKT.

• 한국식품위생안전성학회지
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• 제34권1호
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• pp.52-57
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• 2019

본 연구에서는 건강기능성 식품 소재 개발을 목적으로 참당귀 지상부 추출물의 표준화를 위하여 decursin을 지표성분으로 선정하고 HPLC분석을 통하여 decursin의 분석법을 확립하고 유효성 검정을 수행하였다. 유효성 검정 결과, decorsin 표준용액과 참당귀 지상부 추출물의 retention time 및 spectrum이 일치하는 특이성을 확인하였다. 표준 검량선의 상관계수($R^2$)는 0.9994로 매우 우수한 직선성을 나타내었으며 정량한계(LOQ)는 $0.034{\mu}g/mL$이었고 검출한계(LOD)는 $0.011{\mu}g/mL$이었다. Decursin의 intra-day 분석에서 정확성 및 상대표준편차는 각각 96.49 ~ 104.35%, 0.53 ~ 1.10%, inter-day 분석에서 정확성 및 상대표준편차는 각각 97.23 ~ 100.14%, 0.26 ~ 1.15%인 것으로 나타나 본 시험법의 정확성 및 정밀성을 확인 할 수 있었다. 표준품 농도별 지표성분의 회수율은 92.38 ~ 104.11%의 범위였으며 분석오차 10% 이내로 측정되었다. 이는 본 연구에서 수행된 HPLC 분석법이 참당귀 지상부 추출물의 지표성분인 decursin을 분석하고 표준화하는데 적합한 시험법임을 의미한다.

• Natural Product Sciences
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• 제22권4호
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• pp.238-245
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• 2016

Gumiganghwal-tang has been used for the treatment of common cold for a long-time. We developed an accurate and sensitive high performance liquid chromatography-diode array detection (HPLC-DAD) and electrospray ionization mass spectrometry method for the simultaneous determination of ferulic acid, baicalin, bergapten, methyl eugenol, glycyrrhizin, oxypeucedanin, wogonin, nodakenin, atractylenolide III, imperatorin, and atractylenolide I in Gumiganghwal-tang samples. The analytes were separated on a Shiseido C18 column ($5{\mu}m$, $4.6mm\;I.D.{\times}250mm$) with gradient elution with acetonitrile and 0.1% trifluoroacetic acid. Eleven compounds were quantitatively determined by HPLC-DAD and identified by LC-MS data. We also validated this method. The calibration curves of all the compounds showed good linear regression. The limits of detection and the limits of quantification ranged from 0.04 to 0.63 and from 0.12 to $1.92{\mu}g/mL$, respectively. The relative standard deviation values of intra- and inter-days of this method represented less than 2.9%. The recoveries were found to be in the range of 90.06 - 107.66%. The developed method has been successfully applied to the analysis of Gumiganghwaltang samples. The established HPLC method could be used to quality control of Gumiganghwal-tang.

• 약학회지
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• 제57권3호
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• pp.187-193
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• 2013

Bojungikgi-tang has been widely used for enhancement of physical fitness in Korea. The convenient, simple, and accurate high-performance liquid chromatography (HPLC) method was established for simultaneous determination of four marker compounds, liquiritin, nodakenin, hesperidin, and glycyrrhizin in Bojungikgi-tang (Buzhongyiqi-tang in Chinese, Hochuekkito in Japanese), a traditional Korean herbal prescription. The column for optimizing HPLC separation was used a Gemini $C_{18}$ column at column oven temperature of $40^{\circ}C$ with 1.0% (v/v) aqueous acetic acid (A) and 1.0% (v/v) acetic acid in acetonitirle (B) by gradient flow. The flow rate was 1.0 ml/min and the detector was a photodiode array (PDA) set at 254 nm, 280 nm, and 335 nm. Calibration curves of four components were acquired with $r^2$ values ${\geq}0.9999$. The recoveries were found to range 92.11~105.68% with relative standard deviations (RSDs, %) value less than 2.50%. The RSD values of intraand inter-day precision were 0.07~2.50% and 0.16~1.99%, respectively. The contents of liquiritin, nodakenin, hesperidin and glycyrrhizin in Bojungikgi-tang were 3.85~3.92 mg/g, 2.27~2.32 mg/g, 4.14~4.19 mg/g, and 3.39~3.45 mg/g, respectively. The established simultaneous analysis method will be effective for quality control of Bojungikgi-tang.

• Bulletin of the Korean Chemical Society
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• 제32권8호
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• pp.2666-2670
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• 2011

High-performance liquid chromatography (HPLC) and capillary electrophoresis (CE) were used to identify five active components in the modified herbal decoction Bo-Yang-Hwan-O-Tang (mBHT), i.e., amygdalin, decursin, paeoniflorin, salvianolic acid B, and calycosin-7-O-${\beta}$-D-glycoside. These components were identified by comparing their retention times and mass spectra with those of reference compounds. The conditions of both analytical methods were optimized and validated. Sufficient separation of target analytes was achieved using a buffer consisting of 40 mM sodium borate and 60 mM sodium dodecylsulfate (SDS) containing 10% methanol (pH 9.5) at 250 nm for CE analysis and gradient elution with a water-methanol mobile phase and ultraviolet (UV) photodiode array detector (DAD) at 250 nm for HPLC analysis. The mBHT components were determined within 65 min by HPLC and 16 min by CE. All calibration curves showed high linearity (R > 0.999) within the ranges tested. Intra-day and inter-day precision were less than 1.6% and 1.8% for HPLC and 2.5% and 4.8% for CE, respectively. The accuracy of the methods ranged from 98.8% to 102.3% for HPLC and from 95.9% to 108.2% for CE.

• 약학회지
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• 제55권1호
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• pp.64-68
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• 2011

In this study, a high performance liquid chromatography-diode array detector method was established, for simultaneous determination of three compounds, berberine, palmatine and geniposide in Hwangryunhaedok-tang, To develop and validate method, $C_{18}$ column (5 ${\mu}M$, 4.6 mm${\times}$250 mm) was used with gradient mobile phase, water containing 0.1% trifluoroacetic acid (TFA) and MeOH at the column temperature of $30^{\circ}C$. UV wavelength was set at 230 and 280 nm. Validation of the chromatography method was evaluated by linearity, precision and accuracy test. Calibration curve of standard components showed good linearity ($R^2$ > 0.9999). The limits of detection (LOD) and limits of quantification (LOQ) varied from 0.05 to 0.17 ${\mu}g/ml$ and 0.15 to 0.53 ${\mu}g/ml$, respectively. The relative standard deviations (RSDs) data of intra-day and inter-day test were in less than 2.99% and 1.90%, respectively. The results of the accuracy test were in the range of 98.36 to 102.52% with RSDs values 0.32 to 1.98%. The results of validation indicated that this method was a very accurate and sensitive assay.

• 한국식품영양과학회지
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• 제41권11호
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• pp.1554-1558
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• 2012

고창 복분자의 개별인정형 건강기능식품 기능성 원료로 개발하기 위하여 지표성분 표준화를 위한 ellagic acid의 분석법 설정과 분석법에 대한 밸리데이션을 실시하였다. 1% formic acid가 첨가된 water와 acetonitrile을 이동상으로 하고 Symmetry$^{(R)}$ (C18, $4.6{\times}250mm$, $5.0{\mu}m$) 칼럼을 사용하여 기울기용리(gradient elution) 방법으로 분석하였다. 본 연구에서는 분석법을 확립하고 분석법에 대하여 특이성, 직선성, 정확성과 정밀성 그리고 회수율에 대하여 확인하였다. Ellagic acid의 검량선은 $R^2=0.9996$으로 좋은 선형성을 보였으며 LLOQ와 LOD는 각각 $1{\mu}g/mL$와 $0.3{\mu}g/mL$였다. 일내와 일간 분석에서 상대표준편차(RSD)는 각각 2.28%와 2.84%미만으로 나왔다. 회수율 측정결과에서는 89.17~97.92%로 나왔고, RSD는 0.05~0.14%였다. 그러므로 HPLC를 이용한 ellagic acid의 분석법이 고창 복분자 추출물의 기능성원료 표준화를 위한 지표성분 분석을 위한 적합한 시험법임이 검증되었다. 본 시험법에 따라 분석한 고창 미숙과 복분자 추출물 내의 ellagic acid의 함량은 세 lot를 3번씩 분석하였을 때 약 $1.92{\mu}g/mg$(0.192%)이 나왔으며 RSD값은 2.36% 이하였다. 따라서 본 연구를 통하여 확립된 ellagic acid의 분석법이 고창 복분자의 개별인정형 건강기능식품 기능성 원료 개발을 위한 기초자료로 활용될 것으로 본다.

• 한국식품영양과학회지
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• 제44권1호
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• pp.85-88
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• 2015

차조기 열수 추출물을 개별인정형 건강기능식품 기능성 원료로 개발하기 위하여 지표성분 표준화를 위한 rosmarinic acid의 분석법 설정과 분석법에 대한 밸리데이션을 실시하였다. 1% acetic acid가 첨가된 water와 methanol을 이동상으로 하고 Zorbax extended-C18($4.6{\times}150mm$, $5{\mu}m$) 칼럼을 사용하여 기울기 용리(gradient elution) 방법으로 분석하였다. 본 연구에서는 분석법을 확립하고 분석법에 대하여 특이성, 직선성, 정확성과 정밀성 그리고 회수율에 대하여 확인하였다. Rosmarinic acid의 검량선은 $R^2$=0.9995로 좋은 선형성을 보였으며 정량한계와 검출한계는 각각 $1.2{\mu}g/mL$와 $0.36{\mu}g/mL$였다. 일내와 일간 분석에서 상대표준편차(RSD)는 각각 3.21%와 1.43% 미만으로 나왔다. 정밀성 측정 결과에서는 97.04~98.98%로 나왔고, RSD는 0.25~1.97%였다. 그러므로 HPLC를 이용한 rosmarinic acid의 분석법이 차조기 열수 추출물 기능성원료 표준화를 위한 적합한 시험법임이 검증되었다. 본 시험법에 따라 분석한 차조기 열수 추출물 내의 rosmarinic acid의 함량은 세 lot를 3회 분석하였을 때 평균 0.03%로 나왔다. 따라서 본 연구를 통하여 확립된 rosmarinic acid의 분석법이 차조기열수 추출물 개별인정형 건강기능식품 기능성 원료 개발을 위한 기초자료로 활용될 것으로 사료된다.

• 한국식품영양과학회지
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• 제46권8호
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• pp.952-956
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• 2017

본 연구는 HPLC를 이용하여 율무근 추출물을 기능성 화장품 원료로 개발하기 위하여 지표성분인 coixol의 분석법 설정과 분석법에 대한 검증을 실시하고자 하였다. 표준액과 율무근 추출물은 다른 물질의 간섭 없이 분리되었으며, 표준액과 추출물의 피크 유지시간이 일치한 spectrum을 나타내었다. 또한, blank에서 표준액과 겹치는 피크가 없는 것으로 특이성을 확인하였다. 검량선의 상관계수($R^2$)는 0.9995로 모두 양호한 직선성을 보였으며, 직선상의 검출한계는 0.07~0.08 mg/mL였고 정량한계는 0.23~0.25 mg/mL로 나타났다. 율무근 추출물 2.25, 4.5 및 6.75 mg/mL 세 농도의 회수율은 98.36~100.30%였으며 RSD는 0.26~0.29%로 나타나 RSD 2.0% 이하로서 정확성이 있음을 알 수 있었다. 정밀성은 0.05~0.29%의 정밀도(RSD)를, 실험실 내 정밀성에서는 0.03~0.29%의 정밀도(RSD)를 나타내었고, intra-day에서의 정밀도(RSD)는 0.37~1.64%, inter-day에서는 0.36~0.81%의 정밀도를 나타내어 율무근 추출물의 지표성분 coixol의 분석법은 적합한 시험법임이 검증되었다. 본 분석법은 율무근 추출물의 기능성화장품 원료 개발을 위한 기초자료로 활용될 것으로 생각된다.

• 한국식품과학회지
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• 제50권4호
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• pp.377-382
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• 2018

상지추출물을 식약처 개별인정형 건강기능식품 기능성원료로 개발하기 위한 연구의 일환으로 상지추출물의 표준화를 위한 기능성지표성분 ORT 분석법 설정과 분석법에 대한 확인을 실시한 결과는 다음과 같다. 먼저 HPLC를 이용하여 0.05% 인산이 첨가된 물과 아세토나이트릴을 이동상으로 하고 YMC-Pack Pro $C_{18}$ column ($5{\mu}m$, $4.6{\times}250mm$)을 사용하여 기울기용출(gradient elution)으로 ORT 분석법을 확립한 후 분석법에 대하여 특이성, 직선성, 정확성, 회수율과 정밀성을 각각 측정하였다. ORT 검량선의 상관계수($R^2=1$)은 좋은 선형성을 보였으며 LOQ와 LOD는 각각 1.0와 $0.3{\mu}g/mL$ 나타났다. 정확도는 일내분석과 일간분석에서 각각 99.44-103.47%, 97.60-105.81%로 나타내었으며, 상대표준편차(RSD)는 각각 3.52, 4.70% 이었다. 회수율은 97.64-103.69% 이었으며, RSD는 0.89-1.14%으로 나타나서 RSD 2.00% 이하로 정밀성이 있음을 확인할 수 있었다. 위의 결과로부터 HPLC를 이용한 ORT의 분석법은 상지추출물의 기능성원료 표준화를 위한 지표성분 분석법으로 적합함을 확인하였다. 본 시험법에 따라 3회 제조한 상지추출물의 ORT 함량은 평균 3.74%로 나타내었다. 따라서 본 연구를 통하여 확립된 ORT의 분석법이 향후 상지추출물의 기능성원료 표준화와 규격화를 위한 기초자료로서 크게 활용될 것으로 기대된다.