Eukaryotic translation is initiated by either cap-dependent or cap-independent way, and the cap-independent translation can be initiated by the internal ribosomal entry site (IRES). In this study, to know whether the 5'UTR leader sequence of marine birnavirus (MABV) segment A and segment B can act as IRES, bicistronic vectors harboring a CMV promoter-driven red fluorescent gene (mCherry) and poliovirus IRES- or MABV's leader sequence-driven green fluorescent gene (eGFP) were constructed, then, transfected into a mammalian cell line (BHK-21 cells) and a fish cell line (CHSE-214 cells). The results showed that the poliovirus IRES worked well in BHK-21 cells, but did not work in CHSE-214 cells. In the evaluation of MABV's leader sequences, the reporter eGFP gene under the 5'UTR leader sequence of MABV's segment A was well-translated in CHSE-214 cells, indicating 5'UTR of MABV's segment A initiates translation in the cap-independent way and can be used as a fish-specific IRES system. However, the 5'UTR leader sequence of MABV's segment B did not initiate translation in CHSE-214 cells. As the precise mechanism of birnavirid IRES-mediated translation is not known, more elaborate investigations are needed to uncover why the leader sequence of segment B could not initiate translation in the present study. In addition, further studies on the host species range of MABV's segment A IRES and on the screening of other fish-specific IRESs are needed.
Kim Yeong Jin;Choi Won Chul;Kim Hyeung Rak;Jung Sung Ju;Jung Tae Sung;Kim Jae Ho;Yeo In Kyu;Oh Myung Joo
Fisheries and Aquatic Sciences
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v.3
no.1
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pp.49-51
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2000
This study was performed to confirm the relationship between viral propagation and apoptosis by the infection of marine birnavirus strain (MABV NF-4) on chinook salmon embryo (CHSE-214) cells. After 6 hr viral infection, MABV was detected by PCR method. Also, as a result of DNA assay on the cells, MABV infection resulted in a typical feature of apoptosis, DNA fragmentation. The results suggest that MABV replicated to high concentrations during the early stage of infection induces apoptosis.
Marine birnavirus (MABV) has wide host range in marine organisms. To clarify various infection properties of MABV in different host species, in vitro study was performed by subculture for 10 passages in several fish cell lines. In CHSE-214, RTG-2 and RSBK-2 cells, the virus produced high yield of virus. Typical CPE with high protein expression was observed in these cells. On the contrary, the virus grown in EPC, FHM and BF-2 cells exhibited no CPE appearance although virus protein was detected. In EPC and FHM cells, the virus titer increased in later passages. The plaque size was distinctly bigger in CHSE-214, RTG-2 and RSBK-2 cells than in other cell lines. The nucleotide sequence of VP2/NS junction region on genome segment A exhibited one specific nucleotide change at 195. The different infection properties in several cell types performed in the present work might reflect in vivo MABV infection in various host species occurring in natural conditions.
Proceedings of the Korean Society of Fisheries Technology Conference
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2000.05a
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pp.438-439
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2000
지금까지의 연구에서 한국산 넙치 치어에서 분리된 버나바이러스는 MABV (Marine Birnavirus)와 혈청학적으로 유사하며, VP2/NS 경계영역의 염기배열도 MABV와 높은 homology를 가지고 있음을 밝혔다. 본 연구에서는 genome segment A를 중심으로 한국의 넙치에서 분리된 버나바이러스의 유전자해석을 행했다. (중략)
Reverse transcription (RT)-PCR and nested PCR methods (2-step PCR) were tested for their ability to detect marine birnavirus (MBV) in cultured rockfish, Sebastes schlegeli. One set of primers for RT-PCR was designed, based on a gene of infectious pancreatic necrosis virus (IPNV), and another set of primers for nested PCR was designed based on the VP2/NS junction region of MBV. This 2-step PCR method was specific for MBV and sensitivity was heightened when nested PCR was combined to RT-PCR. This 2-step PCR method was useful for detecting MBV not only in diseased fish, but also in asymptomatic fish. These results indicate that this 2-step PCR method is useful for detecting MBV in rockfish.
Kim, Wi-Sik;Jang, Min-Seok;Kim, Jong-Oh;Jeon, Young-Ho;Oh, Myung-Joo
Korean Journal of Ichthyology
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v.27
no.3
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pp.183-188
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2015
Recently, mariculture of rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) has been initiated in the coast areas of Korea. In the present study, we investigated the effect of fish viruses on mariculture of rainbow trout. The pathogenicity of infectious hematopoietic necrosis virus (IHNV) and infectious pancreatic necrosis virus (IPNV) isolated from freshwater rainbow trout was tested against major cultured marine fish species, including olive flounder (Paralichtys olivaceus), rock fish (Sebastes schlegeli), rock bream (Oplegnathus fasciatus), red seabream (Pagrus major) and sevenband grouper (Epinephelus septemfasciatus). The pathogenicity of marine birnavirus (MABV), hirame rhabdovirus (HIRRV) and nervous necrosis virus (NNV) isolated from marine fish species was also tested against rainbow trout. No mortality was observed in marine fish species challenged with IHNV or IPNV. However, olive flounder and rock bream were infected by IHNV and IPNV. A mortality of 8.3% was observed in rainbow trout challenged with HIRRV. The fish was infected by both MABV and NNV. These results suggest that the mariculture of rainbow trout might be affected by fish viruses.
The causative agent for the tunic softness syndrome of the cultured ascidian Halocynthia roretzi from Jan 1999 to Feb 2009 was identified using virus isolation and polymerase chain reaction (PCR). The pathogenicity of the isolated virus MABV UR-1 strain was determined by experimental infection trials. The cytopathic effects was observed in CHSE-214 cell line at a level 5.1% (4/78) in normal ascidian and 1.8% in abnormal ascidian showing tunic softness syndrome signs. MABV gene was detected in 16.8% (18/107) of normal and 13.1% (5/38) of abnormal organisms by PCR. The ratio of MABV isolation and gene detection was similar level in normal and soft tunic diseased ascidian. Based on the VP2/NS junction region sequences, eight strains of virus isolated from ascidian, were included in the same genogroup with MABV which is originally isolated in wide ranges of marine fish and shellfish species. The UR-1 strain caused 60% mortality (36.5% mortality in control group) by immersion infection and 37% mortality (same mortality in control group) in injection infection indicating no significant differences in infected and control groups. These results suggest that ascidian can act as reservoir of the MABV, and this virus is not directly related with the ascidian mortality.
A method was developed for concentrating fish pathogenic virus from sea water using membrane ultrafiltration system and centricon. The method consists of passing large volumes (Ca. 20 liter) of sea water through ultrafiltration (PAN) filter followed by cross-flow filtration method and centrifugation use the centricon (Plus-20). This procedure permitted the processing of 20 liter of sea water which resulted in a 20,000-fold reduction in the volume of water and greater than 90% recovery of the seeded MABV.
Proceedings of the Korean Society of Fisheries Technology Conference
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2001.05a
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pp.513-514
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2001
지금까지의 연구에서 한국산 넙치 치어에서 분리된 버나바이러스인 NCI strian은 MABV(Marine Birnavirus) 와 혈청학적으로 유사하며 VP2/NS 경계영역의 염기배열에서도 MABV와 매우 높은 homology를 가지고 있음을 밝혔다. 본 연구에서는 남해안 일대의 넙치종묘배양장에서 1999년부터 2000년 사이에 분리된 5개 버나바이러스 strain들의 혈청중화시험과 VP2/NS경계영역의 염기배열을 검색하여 이들 strain들은 서로 유사한 혈청학적, 유전적 성상을 가지는 것을 밝혔다. (중략)
During 1993 and 1994, some mortalities of flounder(Paralichthy olivaceus) fry were recorded in several fish farms and viruses were isolated from 3 of the farms. Electron microscopic examination revealed that the virus particles were hexagonal and unenveloped with an average diameter of 50 to 55nm. Serological and molecular properties of these isolates were examined. The viral RNA and polypeptides patterns on electrophoresis, as well as neutralization test results, showed that these isolates were birnaviruses and two were closely related to infectious pancreatic necrosis virus(IPNV) serotype AB and one was to IPNV serotype SP. This is the first isolation of birnaviruses from marine fish in Korea.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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