Objectives This study was performed to observe the genotoxic effect of the ChondroT. Methods To evaluate the genotoxicity of ChondroT, an experiment of bacterial reverse mutation test, in vitro mammalian chromosomal aberration test and mammalian erythrocyte micronucleus test in mouse was conducted. Results TA98, TA100 and TA1537 strains in the absence of metabolic activation system (S9 mix), the number of revertant colonies being greater than 2-fold of the respective negative control value. Both in -S9 mix and +S9 mix, the frequencies of aberration cells with structural aberration and numerical aberrations of chromosome were less than 5%. There was no increase of polychromatic erythrocyte with one or more micronuclei at any dose of test substance compared to the negative control group (p<0.05). Conclusions In TA98, TA100 and TA1537 strains in the absence of metabolic activation system (S9 mix), the number of revertant colonies was greater than 2-fold of the respective negative control value, showing positive results. ChondroT was considered to be non-clastogenic to Chinese hamster lung (CHL/IU) cells under the present experimental condition. and ChondroT was determined not to induce an increased frequency of micronuclei in the bone marrow cells of male ICR mice under the present experimental condition.
Objectives : Amyloid ${\beta}(A{\beta})$ could induce cognitive deficits through oxidative stress, inflammation, and neuron death in Alzheimer's disease (AD). This study was investigated the effect of Angelica keiskei KOIDZUMI (AK) on memory in $A{\beta}$-induced an AD model. Methods : AK was extracted uses 70% ethanol solvent. Total polyphenol and flavonoids content were obtained by the Folin-Ciocalteu and the Ethylene glycol colorimetric methods, respectively. The antioxidant activities were assessed through free radical scavenging assays using 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) and 2,2'-azino-bis (3-ethylbenzothiazolin-6-sulfonic acid) (ABTS) methods. Intracerebroventrical (i.c.v) injection of $A{\beta}$ 1-42 was used to induce AD in male ICR mice, followed by administrations of 5, 10 or 20 mg/kg AK on a daily. Animals were subjected to short and long term memory behavior in Y-maze and passive avoidance test. Results : The total polyphenol and flavonoids contents of the AK extract were $88.73{\pm}6.36mg$ gallic acid equivalent/g, $84.21{\pm}5.04mg$ rutin equivalent/g, respectively. The assays of DPPH and ABTS revealed that AK extract in treated concentrations (31.25, 62.5, 125, 250, 500, $1000{\mu}g/m{\ell}$) increased antioxidant activity in a dose-dependent manner. Oral administration of AK extract significantly reversed the $A{\beta}$ 1-42-induced decreasing of the spontaneous alternation in the Y-maze test and $A{\beta}$ 1-42-induced shorting of the step-through latency in the passive avoidance test. Conclusions : The findings suggest that AK indicated the antioxidant protective effects against $A{\beta}$-induced memory deficits, and therefore a potential lead natural therapeutic drug or agent for AD.
ICR mice(Takeda et al., 1981)계 수컷 쥐 (무게 $20{\sim}30g$)를 균등한 조사야 $20\;cm{\times}20\;cm$ (선량율 200 cGy/min)로 Linac 6Mev X선 치료 장치(NEC model)를 이용하여 각각 5 Gy씩 실온에서 전신조사 하였다. 6 Mev X선이 조사된 간에 대한 방사선 방어효과를 연구하기 위해서 실험동물 생쥐 5마리를 1군으로 하여 대조군(Co), 방사선조사군(Rad), 방사선 조사전 백삼투여군(WG+Rad투여군), 방사선 조사전 발효인삼투여군(FG+Rad투여군) 등 총 4개 군으로 실험군을 분류하였다. 또한, 대조군(Co), 방사선조사군(Rad)은 생리적식염수 0.1 ml/day를 경구투여 하였고, FG+Rad투여군은 방사선조사 전 7일 동안 발효인삼을 500 mg/kg/day로 생쥐에 경구 투여하였다. 그리고, WG+Rad투여군은 방사선조사 전 7일 동안 백삼을 50 mg/kg/day로 생쥐에 경구 투여하고 생쥐를 도살 16시간 전에 절식시킨 후 각 실험군을 경추탈구로 희생시키고 분석시료로 사용하였다. 생쥐 간에서의 황산화 효소(SOD, catalase) 활성도 변화, 과산화수소 함량변화를 생쥐의 인삼 전 처리 효과를 통해서 방사선 장해에 대한 발효인삼 및 백삼성분이 방어효과에 미치는 영향을 예측하기 위해 전신 X선 조사 후 2주간 연구한 결론은 다음과 같다. 1.방사선조사군(Rad)에서는 대조군(Co)에 비해 SOD, CAT의 효소활성이 감소하였다. 반면에 백삼(50 mg/kg/day)과 발효인삼 추출물(500 mg/kg/day)을 방사선 조사전 투여한 실험군에서 각각 방사선 조사군(Rad)에 비해 효소 활성도가 증가하는 경향을 보였다. 2. 방사선조사군(Rad)에서 과산화수소의 함량은 대조군(Co)에 비해 유의성 있게 증가하였다. 반면에 백삼과 발효인삼 추출물을 방사선 조사전 투여한 실험군에서는 방사선조사군(Rad)에 비해 과산화수소의 함량 생성이 유의성 있게 억제되였다. 3. 본 연구 결과로 볼 때 백삼과 발효인삼추출물은 방사선조사에 의해서 생긴 간세포의 장해에 대한 방어효과가 있었다. 이는 인삼추출물의 성분이 항산화효소(SOD, catalase)의 활성도증가와 과산화수소함량의 감소를 가져와 결과적으로 방사선 방어효과가 나타냄을 알 수가 있었다.
본 연구는 고지방 (열량의 37%를 지방으로 대체)을 급여한 마우스의 체중과 체내 지질함량에 미치는 보리순의 영향을 규명하고자 하였다. 4주령의 ICR 마우스 (n = 32)를 1주일간 적응시킨 후 정상식이를 급여한 정상군, 고지방을 급여한 고지방대조군, 고지방-보리순분말군과 고지방-보리순열수추출물군으로 나누어 8주간 사육하였다. 보리순은 사람이 하루에 3잔의 차를 마시는 양을 고려하여 보리순 1%수준이 섭취되도록 분말과 열수추출물을 각각 식이에 첨가 조제하여 8주간 급여하였다. 식이섭취량은 보리순분말군이 고지방대조군에 비하여 유의적으로 낮았으나 보리순열수추출물은 식이섭취량에 영향을 미치지 않았다. 보리순분말과 보리순열수추출물은 고지방식이로 유도된 비만마우스의 체중을 효과적으로 낮추었으며 특히, 내장지방무게의 대표적 지표인 부고환지방조직 무게를 유적으로 낮추었다. 이는 보리순이 식이섭취 억제에 의존적으로 체중감소 효과를 나타내지 않음을 제시한다. 혈장의 총 콜레스테롤 함량은 보리순분말과 열수추출물 급여시 고지방 대조군에 비해 각각 25%와 20%의 감소효과를 보였으며 중성지질 함량은 보리순분말군과 열수추출물군 모두 28%와 43%의 유의적인 감소를 보였다. 또한 보리순분말과 보리순열수추출물은 혈장 중의 총 콜레스테롤에 대한 HDL-콜레스테롤 비(HTR)를 고지방대조군에 비하여 유의적으로 높였다. 간조직과 지방조직의 트리글리세리드 함량은 정상군에 비해 고지방대조군이 각각 1.3배, 1.2배의 증가를 보였으나 보리순분말과 열수추출물 급여시 모두 간조직과 지방조직의 트리글리세리드 함량이 정상군과 유사한 수준으로 개선되었다. 신장에서의 트리글리세리드 함량은 고지방식이로 증가하는 경향을 보였고 심장에서는 1.4배의 유의적인 증가를 나타내었으며, 보리순열수추출군에서만 유의적인 개선효과를 볼 수 있었다. 간조직과 신장의 콜레스테롤 함량은 실험군간에 차이가 없었으나, 심장 중의 콜레스테롤 함량은 고지방대조군이 정상군보다 유의적으로 높았다. 보리순열수추출물의 경우 심장의 콜레스테롤 함량을 유의적으로 낮추었다. 변중의 콜레스테롤 함량은 고지방 대조군이 정상군에 비하여 낮은 반면, 트리글리세리드 함량은 약 6배 높았다. 한편, 보리순말과 열수추출물 급여는 고지방 대조군에 비하여 변으로의 트리글리세리드 배설을 유의적으로 증가시켰으나 콜레스테롤 함량에는 영향을 미치지 않았다. 간조직 중 FAS활성은 정상군에 비해 고지방대조군에서 1.7배 높아진 반면, ${\beta}$-oxidation은 유의적으로 낮았다. 보리순분말과 열수추출물은 지방산 합성효소의 활성을 정상군 수준으로 개선하였으나 지방산 산화에는 영향을 미치지 않았다. 콜레스테롤 합성에 관련하는 HMG-CoA reductase와 ACAT 활성은 각각 정상군보다 고지방대조군에서 각각 2.1배, 1.5배씩 높았으나 보리순분말과 열수추출물 급여시 유의적으로 낮았다. 이와 같이 보리순분말과 열수추출물은 고지방 식이로 비만을 유도한 마우스의 간조직에서 지방산과 콜레스테롤 합성을 저해함으로써 지질개선에 효과적인 것으로 나타났다.
제초제저항성단백질인 phosphinotricin acetyltransferase(PAT)에 대한 유전독성 영향을 평가하기 위하여 in vitro 시험으로 복귀돌연변이시험과 염색체이상시험을, 그리고 in vivo 시험으로 소핵시험을 수행하였다. Salmonella typhimurium 균주 TA98, TA100, TA1535 및 TA1537를 이용한 복귀돌연변이시험에서 직접법과 대사활성법 (S9 mixture) 모두 $5000{\mu}g/plate$에서 돌연변이 수는 음성대조군과 유의차가 없었다. Chinese hamster lung(CHL) 세포를 이용한 염색체이상시험 결과 직접법과 대사활성법의 경우 PAT를 처리한 모든 군(100, 10, $1{\mu}g/mL$) 의 세포에서 구조적, 숫적 염색체이상은 관찰되지 않았다. PAT를 복강 투여한 ICR계 숫컷 mouse의 골수세포에서 다염성 적혈구 (polychromatic erythrocytes) 및 소핵 (micronucleus)을 가진 다염성 적혈구의 출현율을 조사하기위하여 mouse를 이용한 소핵시험을 수행한 결과, 모든 농도(1250, 625, 313 mg/kg)에서 음성대조군과 유의차가 관찰되지 않아, PAT는 소핵을 유발하는 독성은 없는 것으로 판단된다. 이상의 결과로 제초제저항성단백질 PAT는 미생물, 배양세포, 및 생체내에서 유전독성을 유발하지 않는 물질로 사료된다.
본 연구에서는 혈당강하 소재로서 가능성이 확인된 GFPC와 잎새버섯 및 흰목이 추출 혼합물의 안전성을 평가하기 위하여 수행되었었다. 마우스에 대한 급성경구독성을 평가하기 위해 체중 kg 당 최고 5g의 각 시험물질을 마우스 위에 직접 투여하여 48시간 동안 관찰 한 결과 모든 실험군에서 사망예가 관찰되지 않아 LD50 은 5g/kg B.W. 이상으로 계산되었으며, 임상 증상이나 체중에서도 유의할만한 소견이 관찰되지 않았다. 따라서 본 실험의 GFPC와 잎새버섯 및 흰목이 추출 혼합물은 마우스에 있어서 단기 급성 경구독성이나 부작용을 유발하지 않는 안전한 식품소재로 평가되었다. 결론적으로 GFPC와 잎새버섯 및 흰목이 추출 혼합물은 급성 독성이나 부작용을 유발하지 않아 임상사용의 가능성을 제시하여 주었다.
가시오가피의 면역활성 증진 효과를 알아보기 위하여 선발된 수컷 마우스를 대상으로 하여 발효유에 가시오가피와 더덕 열수추출건조물(가시오가피 :더덕 =8:2)을 혼합하여 투여한 그룹 1 mg/mL(A), 3 mg/mL(B), 9 mg/mL(C)의 3그룹으로 나누어 임상적용 경로인 경구투여를 선택하여 발효유을 각각 3 mL/kg씩 위내로 직접 투여하였다. 대조군은 발효유만 먹인 그룹(D)과 식염수만 먹인 그룹(E)을 두었다. 오가피의 함량이 ICR계 수컷 마우스의 면역기능에 미치는 영향에 대해 알아본 결과 모든 군에서 마우스의 증체량과 체중 증가는 유의성 있는 차이를 보이지 않았고, 7주와 10주령에 안락사 시킨 마우스의 각 장기의 무게에서도 유의성 있는 차이를 보이지 않았다. 비장계수는 7주령에서는 B군이, 10주령에는 C군이 유의성 있는 증가가 관찰되었다(p<0.05). 항체생산세포수는 식이급여 7주에 B와 C군이, 10주에 C군이 각각 대조군에 비해 통계적인 유의성이 있었다(p<0.05). 양적혈구에 대한 응집소가는 식이의 급여기간이 길어질수록 감소하였는데, 7주차에는 A, B, C 군에서, 10주차에서는 B와 C군에서 유의성이 있었다(p<0.05). 혈중 면역글로불린(IgG)의 수치는 7주에서는 C군이, 10주에서는 B와 C군이 유의성이 있었다. 림프구는 B와 C군이 대조군보다 증가하였고, 비장 및 흉선조직에서도 B와 C군이 활발한 면역반응을 보였다. 이상의 결과 가시오가피와 더덕 열수추출건조물이 생체 내에서 면역력을 증강시킬 수 있을 것으로 사료되었다.
Objective: Zona pellucida (ZP) has been thought to be the barrier of egg to sperm penetration before and after fertilization. The phenomenon of ZP hardening has been considered as a post-fertilization event until now, and it is generally accepted that it is caused by the secretory products of cortical granules released during the cortical reaction. Hardening of ZP could occur "spontaneously" in mammalian oocytes in standard culture conditions, and that it is probably not a consequence of cortical reaction. The purpose of our study was to investigate the effect of human amniotic fluid (HAF) on nuclear maturation (NM) and fertilization ability of mouse immature oocytes. Methods: HAF was obtained from patients undergoing amniocentesis at $16{\sim}20$ weeks of gestation. HAF from five to ten patients was centrifuged and the supernatants was pooled. Cumulusenclosed mouse immature oocytes were incubated in the medium containing HAF, and examined to confirm NM and fertilization. Female ICR mice (about 3 weeks old) were stimulated with 7.5 IU PMSG. Immature oocytes were isolated at $48{\sim}52$ hrs post PMSG injection and cultured in TCM-199 supplemented with 20% HAF for 18 hrs. FBS was used as a control for the examination. Matured oocytes (MII) were fertilized with sperms collected from the epididymis of male mice (over 10 weeks old). Fertilization was in conducted T6 medium containing 15 mg/ml BSA, and confirmed at 6 hrs post-insemination. Fertilization rate was assessed in zona-intact or zona-free oocytes (denuded by trypsin). Evaluation of NM and fertilization was carried out by rapid staining method. ZP hardening was evaluated by incubating cumulus cell-free mature oocytes in 0.001% chymotrypsin at $37^{\circ}C$ for 10 min. Results: There was no significant difference between the effects of HAF (86.6%) and FBS (87.7%) supplements on NM of immature oocytes. When maturation medium was supplemented with HAF, total fertilization rates (7%) were significantly lower (p<0.01) than that of FBS (85.1%). In HAF group, fertilization rate was increased (p<0.01) in zona-free oocytes (7% versus 100%). The resistance of mouse oocyte ZP to digestion by chymotrypsin after maturation in vitro was significantly higher (p<0.01) in HAF group (86.7%) than in FBS (6.7%). To culture oocytes in FBS were very effective in preventing ZP hardening. However cultured oocytes in HAF showed high rate of ZP hardening (p<0.01). Conclusions: These results suggest that HAF can be used as a supplement for the NM of mouse immature oocytes in vitro. However, HAF induces spontaneous hardening of ZP of mouse immaure oocytes during maturation in vitro.
Purpose of the present study was to find the optimal culture conditions for the maturation and fertilization of immature oocytes by the use human body fluids and gonadotropins (Gn) in the mouse model. Cumulus-enclosed mouse immature oocytes were incubated in the medium containing various human body fluids with or without Gn in vitro, and examined to confirm nuclear maturation (NM) and fertilization. Female ICR mice were stimulated with 7.5 IU pregnant mares' serum gonadotropin (PMSG). Cumulus-enclosed immature oocytes were isolated at 48-52 hr post PMSG injection and cultured in TCM 199 supplemented with various concentrations (20, 50, and 70%) of human body fluids such as fetal cord serum (hCS), follicular fluid (hFF), peritoneal fluid (hPF) and amniotic fluid (hAF) in the presence or absence of 10 IU/ml PMSG and 10 IU/ml human chorionic gonadotropin (hCG) for 18 hr. Fetal calf serum (FCS) was used as a control for the supplements. Matured oocytes were fertilized with sperm collected from the epididymis of male mice. Fertilization was conducted in T6 medium containing 15 mgl ml bovine serum albumin, and confirmed at 6 hr post-insemination. Evaluation of nucler maturation and fertilization was carried out by rapid staining using fuchin. There was no significant difference between the effects of human body fluids and FCS supplements on nuclear maturation of cumulus enclosed mouse immature oocytes. When maturation medium was supplemented with 20% hPF or 20% hAF, fertilization rates were significantly (P<0.01) lower than that of 20% FCS, hCS and hFF groups. However, higher concentrations of body fluids during IVM were not more beneficial on fertilizability of oocytes. The addition of Gn significantly increased the fertilization rates in hPF and hAF groups (hPF without Gn; 51.5%, compared with 85.1% for addition of Gn, and hAF without Gn; 30.1% compared with 85.8% for addition of Gn) at 20% concentration. These results suggest that human body fluids at 20% concentration and gonadotropins can be used as supplements for the maturation of mouse immature oocytes in vitro. When gonadotropins supplemented with the human body fluids in the maturation medium, fertilizability of mouse immature oocytes was increased in hPF and hAF groups. These results can be applied to maturation of human immature oocytes in vitro.
목 적: $^{60}Co\;{\gamma}$선을 생쥐에 전신조사로 유도된 생쥐 간의 장해에 대한 발효인삼의 방사선방호효과를 방호제인 glutathione(GSH) 함량 변화를 통하여 실험적 연구를 하였다. 대상 및 방법: ICR종 수컷 생쥐를 발효인삼 투여군, 백삼 투여군, 방사선 조사군, 대조군으로 각각 분류하여 발효인삼 투여군(FG+Rad), 백삼 투여군(WG+Rad)은 $^{60}Co\;{\gamma}$선 조사 전에 백삼과 발효인삼을 7일간(150 mg/kg/day) 경구 투여하였고, 방사선 조사군(Rad)은 $^{60}Co\;{\gamma}$선을 5 Gy(1.01 Gy/min) 선량으로 조사하였으며, 대조군(Co)은 0.1 mL의 생리적 식염수를 투여하였다. 각각의 실험군을 통하여 생쥐 간 조직에서의 환원형 glutathione와 산화형 glutathione(GSSG)의 함량 변화를 조사한 결과 아래와 같다. 결 과: 1. 발효인삼 투여군과 백삼 투여군에서 방사선 조사군보다 유의성 있게 glutathione함량이 증가하였고 산화형 glutathione(GSSG)의 함량은 유의성 있게 감소하였다. 2. 발효인삼투여군과 백삼투여군에서 방사선 조사군보다 산화형 glutathione(GSSG)의 함량과 총 glutathione함량 비율은 유의성 있게 감소하였다. 결 론: 발효인삼투여군이 백삼투여군보다 glutathione함량을 증가시킴으로서 효율적으로 생쥐간의 방사선 방호효과를 증진시킴을 알 수가 있었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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