Malassezia pachydermatis 추출물의 피내접종시 과민반응을 알아보고자 본 실험을 수행하였다. 정상적인 개와 M. pachydermatis 외이염에 이환된 개를 대상으로 M. pachydermatis 추출물의 피내접종을 실시하였다. 전기영동을 통해 M. pachydermatis 분자량 조사를 통해 $43{\sim}63kDa$을 포함하고 있는 추출물을 사용하였다. Malassezia 외이염에 감염된 군에서의 평균 팽진의 직경은 20, 2, 0.2, and $0.02{\mu}g/ml$을 피내로 접종했을 때, 각각 $13.36{\pm}0.67,\;5.33{\pm}0.67,\;5.47{\pm}0.82$와 $5.07{\pm}0.64$을 나타내었으며, 팽진의 두께는 각각 20, 2, 0.2, and $0.02{\mu}g/ml$에서 $6.44{\pm}0.40,\;3.86{\pm}0.35,\;2.64{\pm}0.36$와 $2.60{\pm}0.44$를 나타내었다. 통계학적으로 건강한 군과 외이염에 이환된 군에 있어서 유의한 차이가 인정되었다. (p<0.01). 더구나$20{\mu}g/ml$ 을 주입한 군에서 이 차이는 더욱 두드러져 농도 의존성을 나타내었다. 따라서 M. pachydermatis 유래 항원을 개의 피내에 접종했을 때, 즉시 팽진반응을 유발한다는 것이 확인되었으며 효모균에 대한 과민증은 즉시형 피부과민반응을 보이는 개, 특히 Malassezia otitis에 감염된 개에서 임상증상의 발현에 관여하는 것으로 사료된다. 또한 2, 0.2, $0.02{\mu}g/ml$의 농도에서는 큰 차이를 보이지 않는 것으로 보아 즉시형 과민반응을 나타내기 위해서는 일정한 역치가 있을 것으로 생각되며 이에 대한 추가적인 연구가 필요할 것으로 사료된다.
2002년 1월부터 2003년 12월까지 전북지역의 동물병원에 외이염으로 내원한 환자의 Malassezia pachydermatis 이환율을 조사하였다. 외이염으로 진단된 총 589두의 개에서 243두(37.6%)가 M pachydermatis에 감염되어 있었다. 외이염에 감염된 개의 품종, 나이, 계절, 귀의 형태 등과 M. pachydermatis의 이환율과의 상호 관계를 조사하였다. 연령별로는 1-2년, 계절은 여름철, 귀는 pendulous 형태의 귀가 이환율이 높게 나타났다. 특히 귀의 형태와 계절적인 요인이 M. pachydermatis 이환율과 가장 관계가 깊은 것으로 나타났다.
The inhibitory effect of pooled canine serum on the growth of ten strains of Malassezia pachydermatis in vitro was investigated. Studies were also carried out to observe the effect of different concentrations of unsaturated bovine transferrin on Malassezia growth in vitro. Ten strains of Malassezia pachygedrmatis in normal canine serum (11.1%, 44.4%) were found to significantly inhibit the growth (p<0.0005) not only in a dose dependent but also in a time dependent manner. The same strains of yeast treated with 1, 2, 4 and 8 times the normal value of serum transferrin (3.0 mg/ml, 6.0 mg/ml, 12.0 mg/ml, 24.0 mg/fl), were shown to have significantly lower OD readings (p<0.05) when compared to yeast treated in lower concentrations of transferrin (1.5 mg/ml). The optical density (OD) of the ten strains of yeast were significantly lower (p<0.005) when treated with various concentrations of transferrin than with the saline control except at 72 hours post incubation. These results indicate that serum has inhibitory effects on Malassezia pachydermatis growth in vitro, and transfferin is one of the components that contribute towards this inhibitory role. The inhibitions are dose and time dependent.
Kim, Minchul;Cho, Yong-Joon;Park, Minji;Choi, Yoojeong;Hwang, Sun Young;Jung, Won Hee
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제28권11호
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pp.1937-1945
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2018
Malassezia pachydermatis is a commensal yeast found on the skin of dogs. However, M. pachydermatis is also considered an opportunistic pathogen and is associated with various canine skin diseases including otitis externa and atopic dermatitis, which usually require treatment using an azole antifungal drug, such as ketoconazole. In this study, we isolated a ketoconazole-resistant strain of M. pachydermatis, designated "KCTC 27587," from the external ear canal of a dog with otitis externa and analyzed its resistance mechanism. To understand the mechanism underlying ketoconazole resistance of the clinical isolate M. pachydermatis KCTC 27587, the whole genome of the yeast was sequenced using the PacBio platform and was compared with M. pachydermatis type strain CBS 1879. We found that a ~84-kb region in chromosome 4 of M. pachydermatis KCTC 27587 was tandemly quadruplicated. The quadruplicated region contains 52 protein coding genes, including the homologs of ERG4 and ERG11, whose overexpression is known to be associated with azole resistance. Our data suggest that the quadruplication of the ~84-kb region may be the cause of the ketoconazole resistance in M. pachydermatis KCTC 27587.
Effect of the plant essential oils on the growth of Malassezia pachydermatis was evaluated and the essential oils of Ocimum basilicum L., Melaleuca alternifolia (Maid. & Bet.) Cheel, and Rosa damascene Mill. were the most active against M. pachydermatis and their activity were high than that of itraconazole at 2 mg/mL. The major constituents of the three oils by GC-MS analysis were linalool (21.83%) and estragole (74.29%) for O. basilicum, a-terpinolene (17.96%) and terpinen-4-01 (45.54%) for M. alternifolia, and a-citronellol (59.98%) and geraniol (27.58%) for R. damascene. Results showed that these selected three oils could be effective toward controlling M. pachydermatis opportunistic infections.
이 연구는 개의 귀 속에서 분리한 $Malassezia$$pachydermatis$의 특성과 이들 효모에 대한 essential oil들의 항진균효과를 측정한 결과로서 일반적인 $M.$$pachydermatis$를 분리하기위한 Sabouraud dextrose agar (SDA), olive oil이 첨가된 SDA (SDAO) 배지 및 지방 친화성 효모를 검출하기 위한 Leeming's medium (LM)으로 구성된 세종류의 분리배지가 사용되었다. $Malassezia$ spp는 77.8%의 개로부터 분리되었으며 분리배지에 따라 분리율에 큰 차이를 나타내었으며 지방성분이 포함된 배지에서의 분리율이 일반적으로 사용하는 SDA에서 보다 높았다. 분리된 모든 $Malassezia$ spp는 $M.$$pachydermatis$로 동정되었지만 육안적으로 보이는 집락의 모양과 SDA에서의 증식속도를 고려했을 때 4개의 아종으로 관찰되었다. 배양 72시간 후 집락의 직경이 3 mm 이상인 큰 집락(LC)과 2 mm 정도인 중간 집락(MC) 및 배양 5일 후에도 1 mm 이상으로 크지지 않는 작은 집락(SC), 그리고 SDA에서 증식하지 않는 지방의존 집락(Lipo)으로 분류되었다. SDA, SDAO 및 LM 배지에서 각 type의 효모가 분리된 정도를 보면, LC type 효모는 각각 4, 11, 11개 시료에서, MC type 효모는 각각 2, 3, 1개 시료에서, SC type 효모는 각각 1, 2, 1개시료에서 분리되었으며 Lipo type은 SDAO과 LM 배지 중 3 곳에서 분리되었다. $M.$$pachydermatis$에 대한 essential oil의 항진균효과 측정은 디스크 확산법과 well 확산법에 의해 이루어졌으며, 대부분의 essential oil은 0.5에서 1.0%의 농도에서 $M.$$pachydermatis$ 의 증식을 억제하였다. MIC90과 MIC50은 essential oil의 성분에 따라 다양하였으나, Thyme oil이 가장 억제 효과가 좋았으며 marjoram과 tea tree oil은 비교적 낮은 억제 능력을 나타내었다.
오타리아 물개의 탈모성 피부염에서 Malassezia spp. 를 분리하였다. Sabouraud dextrose agar에서 성장한 집락형태는 유백색에서 황색조로 변연부는 매끄러웠다. 현미경 검경시 형태는 원형에서 실린더형이었고 증식을 지시하는 budding 형이 관찰되었다. 개의 외이염에서 분리한 Malassezia pachydermatis와 비교하기 위해 26s rRNA 염기서열 분석을 실시하여 99.9% 의 일치도를 보였다. Itraconazole pulse therapy는 매우 효과적이었고 재발하지 않았다. 본 증례는 국내 물개에서 발생한 Malassezia 피부염 최초 보고로 판단된다.
우리의 이전의 연구에서 Citrus auranifoli 오일은 Malassezia furfur와 Malassezia pachydermatis에 대해 항곰팡이 활성을 나타낸다는 것을 보여주었다. 본 연구에서 Citrus auranifoli 오일의 주요 성분인 리모넨(limonene)의 M. furfur와 M. pachydermatis에 대한 저해효과를 디크스 확산 방법(disk diffusion method)에 의해 측정하였고, Beas-2B 세포에 대한 세포독성을 cytopathic effect reduction 방법에 의해 측정하였다. Limonene의 최소곰팡이저해농도(minimum fungicidal concentration)는 양성대조구인 itraconazole보다 더 낮았고, 100 ${\mu}g$/mL의 농도에서 Beas-2B cells에 대한 세포독성을 나타내지 않았다. 그러나 itraconazole은 같은 농도에서 약한 세포독성을 나타내었다. 그러므로, 우리의 결과에서 limonene는 비세포독성과 함께 M. furfur and M. pachydermatis의 성장저해를 하는데 효과적이라는 것을 보여준다.
To produce a novel antihypertensive angiotensin I-converting enzyme (ACE) inhibitor from yeast, a yeast isolate, designated G-14 showing the highest ACE inhibitory activity was obtained and identified as Malassezia pachydermatis based on morphological, biochemical and cultural characteristics. The maximal extracellular ACE inhibitor production was obtained from M. pachydermatis G-14 when the strain was cultured in YEPD medium containing 0.5% yeast extract, 3.0% peptone and 2.0% glucose at $30^{\circ}C$ for 24 h and the final ACE inhibitory activity was 48.9% under the above condition.
The effect of pH of chitosan solution (w/v) on antifungal activity against Malassezia pachydermatis isolated from a dog with otitis externa was evaluated. This study was investigated to find out the optimal pH of chitosan solution that could be able to eliminate yeast cells. For comparison of antifungal activity of chitosan solution 2% chlorhexidine that have been already proved the antifungal effect against M. pachydermatis was used as positive control. The chitosan solution at different pH (2.5, 3.0, 3.5, 4.0, 4.5, 5.0) were involved this experiment. The chitosan solutions at each pH could eliminate a number of yeast cells when they were compared to other antifungal agents. In chitosan solution's antifungal effect of varying degrees according to the pH M. pachydermatis was inhibited at pH of < 5.0. Especially it has been proved an effective antifungal effect at pH 3.5. Therefore, the pH of chitosan solution had a effect on antifungal activity and the optimal pH was 3.5 in vitro. The possibility of topical therapy with acidific solution of chitosan has a potential in skin infection against M. pachydermatis.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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