Antibacterial substances produced by Lactobacillus casei subsp. and Streptococcus faecium were examined for its antibacterial effects against some pathogenic bacteria. They were partially purified with ammonium sulfate precipitation, methanol-acetone extraction, G-50 gel filtration and examined its characteristics. When L casei subsp. and Str faecium were cultivated in MRS broth, stationary phase of L casei is until 24 hours and Str faecium is 20 hours. pH change of the cultured medium was both decreased after 12 hours and then constant at pH 4.5~4.6 after 28 hours. MRS broth culture fluids of L casei subsp. and Str faecium appeared the antibacterial effects by the spot-on-the-lawn method against ETEC, Sal pullorum and Sta aureus. Culture filtrates of L casei subsp. and Str faecium also appeared the antibacterial effects by the disc diffusion method. Culture filtrates of L casei sub. rhamnosus 7469 produced 0.032M of lactic acid and 0.01M of acetic acid. Str faecium 27273 also produced 0.027M of lactic acid and 0.01M of acetic acid. Protein concentrations of culture filtrates produced by L casei sub rhamnosus 7469 and Str faecium 27273 was $495{\mu}g/m{\ell}$ and $594{\mu}g/m{\ell}$, respectively. Antibacterial substances which are partially purified by ammonum sulfate precipitation, methanol-acetone extraction and G-50 gel filtration inhibit the growth of ETEC, Sal pullorum and Sta aureus. Characteristics of purified antibacterial substances was examined. Its molecular weight was about 31Kd, stabilized at $100^{\circ}C/20min.$ and some of proteolytic enzyme treatment.
Yun Ji Kang;Tae Jin Kim;Min Jae Kim;Ji Yeon Yoo;Jeong Hwan Kim
한국미생물·생명공학회지
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제51권2호
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pp.157-166
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2023
Three lactic acid bacteria (LAB) producing exopolysaccharides (EPSs) were isolated from Pa (green onion)-kimchi, and identified as Weissella confusa (SKP 173), Weissella cibaria (SKP 182), and Leuconostoc citreum (SKP 281), respectively by 16S rRNA gene sequencing. The yields of EPS were 21.27, 18.53, and 15.4 g/l for EPS from SKP 173, 182, and 281, respectively when grown in MRS broth containing sucrose (5%, w/v). Total sugar contents were 64.39, 62.84, and 65.16% (w/w) for EPS from SKP 173, 182, and 281, respectively while the protein contents were 0.33, 0.31, and 0.25% (w/w), respectively. EPSs from W. confusa SKP 173 and W. cibaria SKP 182 contained glucose only but EPS from L. citreum SKP 281 contained glucose and glucitol. Viscosities of the 2% (w/w) freeze-dried EPS solution were 9.60, 8.00, and 8.20 centipoise (cP) for EPS from SKP 173, 182, and 281, respectively. Viscosities of culture grown in MRS broth with 5% sucrose (no glucose) were 92.98, 57.19, and 18.8 cP, respectively. The average molecular weights of EPSs were larger than 2 × 107 Da. Fourier transform infrared spectroscopy (FT-IR) analyses of EPSs showed typical carbohydrate peaks, suggesting that the EPSs consisted of pyranose saccharides with α-(1,6) and α-(1,3) glycosidic linkages. L. citreim SKP 281 was used as the starter for yogurt fermentation, and EPS production was confirmed.
홍삼 추출물이 유산간균 3종(L. acidophilus, L. casei 및 L. salivarius ssp. salivarius)과 병원성 균으로서 E. coli 및 L. monocytogenes에 대한 성장 촉진과 억제 효과를 홍삼 추출물 0, 1, 2, 5와 $10\%$ 농도로 조사하였으며, 홍삼 추출물에 의한 pH 저하를 buffer제를 사용하여 조정하고 미생물의 성장을 대조구와 비교하여 조사하였다. 유산간균 3종의 경우 홍삼 추출물 $1\%$ 농도까지는 무처리구와 유사한 성장을 보였으나, $2\%$이상의 홍삼 추출물 첨가 시 농도가 높아질수록 유산균의 성장도 둔화되었다. E. coli의 경우 홍삼 추출물이 $1\%$부터 높아질수록 성장이 억제되었고, L. monocytogenes의 경우 $5\%$ 이상의 처리구에서 억제 효과가 있었다. Buffer제를 사용하여 pH를 조정하고 홍삼 추출물을 $10\%$ 첨가한 구와 pH를 조정하지 않은 구를 비교하여 보면 유산간균과 병원성 균의 성장이 두 구간에 모두 억제되므로 미생물의 억제 효과가 홍삼 추출물 중의 유기산에 의한 pH 저하가 원인이 아님을 알 수 있었으며, 이와 같은 미생물의 성장억제 효과는 홍삼 추출물 중 다른 유효성분에 의한 것으로 생각되어진다.
Staphylococcus aureus에 대한 젖산균과 그 대사산물의 항균효과와 그 항균물질의 특성을 조사하였다. MRS broth에서 S. aureus와 젖산균을 혼합배양시켰을 때 모든 젖산균은 배양 12시간째부터 S. aureus의 생육을 억제하기 시작했으며, L. lactic는 24시간만에, L. casei, Sc. thermophilus 그리고 L. acidophilus는 48시간 만에 모든 균을 사멸하였다. S. aureus가 사멸하기 시작한 12시간째 혼합배양액의 pH는 4.50이었으며 완전히 사멸한 24, 48시간의 pH는 3.50이었다. TS broth에 젖산균의 대사산물을 첨가하고 S. aureus을 배양하였을 때 4종의 젖산균 대사산물 모두가 향균활성을 나타내었으며, 대사산물을 열처리하였을 때 L. casei, L. acidophilus 및 L. lactis는 그 항균활성이 소실되었으나, Sc. thermophilus의 경우는 어느 정도 그 활성을 유지하였다. $H_{2}O_{2}$의 영향을 확인하기 위해 catalase를 처리하였을 때는 L. lactis만 그 항균활성이 소실되었다. 유기산(acetate, lactate)이 무기산(HCl)보다 pH3.5, 4.5에서 S. aureus에 대한 살균활성이 더 높았으며, pH5.5, 6.5에서는 큰 차이가 없었다.
우리의 전통 발효식품인 동치미로부터 E. coli O157에 대한 항균 활성을 나타내는 L. plantarum K11 균주가 생산하는 박테리오신의 활성에 영향을 미치는 배양 조건에 관하여 살펴보았다. 본 균주가 생산하는 박테리오신은 MRS 배지 상에서 가장 높은 활성을 나타내었고 M17, BHI 및 TSB 보다 균의 증식속도도 빠르게 나타났다. 대수기 초기부터 활성이 점점 증가하기 시작하여 정지기 때 최대에 이르렀고 이후에는 급격히 감소하였다 배양온도의 영향으로는 온도가 상승함에 따라 박테리오신의 활성도 증가하여 최대 활성은 $37^{\circ}C$상에서 나타났고 $45^{\circ}C$에서는 오히려 활성이 감소하였다. 배지의 초기 pH 영향을 살펴본 결과 배양 8시간부터 pH 7.0과 8.0에서 활성이 나타나기 시작하여 배양이 진행될수록 pH 7.0에서 최대로 나타났으나, pH 5.0과 9.0에서는 활성이 매우 약하게 나타났다 Glucose 0.5, 1.0%와 lactose $0.5{\sim}1.5%$를 첨가한 경우 대조구에 비해 박테리오신 활성이 2배 이상 증가하였으나, galactose 1.0%, fructose 1.0% 및 maltose 1.5% 이상 첨가 시에는 대조구 보다 오히려 활성이 감소되었다. 질소원은 0.5%의 beef extract나 tryptone 혹은 0.5와 1.0%의 peptone이나 yeast extract에 의해 대조구와 동일한 활성을 나타내었으나, 그 이상의 농도로 첨가했을 때에는 활성이 감소되었다. 또한 NaCl 0.5%와 $K_2HPO_4$ 0.5% 첨가한 경우 박테리오신의 활성이 대조구보다 2배 증가한 반면, NaCl 2.0%, $K_2HPO_4$ 2.0% 이상, $MgSO_4{\cdot}7H_2O$ 1.5% 이상 및 $MnSO_4{\cdot}H_2O$ 1.0% 이상을 첨가했을 때에는 대조구 활성의 50% 이하로 감소하였다.
Seul-Gi Jeong;Ho Myeong Kim;Moeun Lee ;Jung Eun Yang;Hae Woong Park
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제33권1호
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pp.75-82
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2023
Lactic acid bacteria (LAB) isolated from kimchi (a traditional Korean dish typically made of fermented cabbage) can provide various health benefits, including anti-obesity, antioxidant, antiinflammatory, anticancer, and antimicrobial effects. In this study, we examined the antimicrobial and immunomodulatory effects of Lactiplantibacillus plantarum WiKim0125 cultured in de Man, Rogosa, and Sharpe (MRS) medium containing vegetable waste. Live bacterial cells were eliminated via supernatant filtration or heat treatment. The cell-free supernatant (CFS) obtained from culture broth containing kimchi cabbage waste (KCW), cabbage waste (CW), or onion waste (OW) showed significantly higher antimicrobial activity against skin pathogens (Propionibacterium acnes and Staphylococcus aureus) and foodborne pathogens (Escherichia coli and Salmonella typhimurium), with inhibition zones ranging between 4.4 and 8.5 mm, compared to that in conventional MRS medium (4.0-7.3 mm). In lipopolysaccharide-stimulated RAW264.7 cells, both supernatant and heat-inactivated Lb. plantarum WiKim0125 from culture media containing KCW and CW suppressed the production of inflammatory cytokines (72.8% and 49.6%, respectively) and nitric oxide (62.2% and 66.7%, respectively) without affecting cell viability. These results indicate that vegetable waste can potentially increase the antimicrobial and immunoregulatory potency of LAB while presenting a molecular basis for applying postbiotics to health products.
The pathogenicity and acute toxicity of Lactobacillus (L.) pentosus PL11 from eel (Anguilla japonica) were investigated using male and female Sprague-Dawley rats. The pathogenicity of L. pentosus PL11 was examined after treating the rats with $10^{11}$ CFU/mL, $10^9$ CFU/mL or $10^7$ CFU/mL doses of L. pentosus PL11 culture or 0.85% NaCl (Control) intragastrically. For acute toxicity studies, rats were treated with dried culture broth of L. pentosus PL11 at doses of 5,000 mg/mL, 2,500 mg/mL, 1,250 mg/mL or 625 mg/mL or Lactobacilli MRS broth (Control), and clinical signs or mortalities were monitored for two weeks. The results of the present investigation revealed no mortalities or obvious clinical signs in rats administered with the live bacterial cultures or dried culture broth at any investigated dose level. Also, no significant differences were observed in net body weight gain, gross pathological findings, feed and water consumption and body temperature among the different treatment groups and between the treated and control rats. It can be concluded from the above findings that L. pentosus PL11 is a safe probiotic strain with potential as feed additive to increase the feed efficiency or health of fish.
본 연구는 김치로부터 비만 억제능력이 있는 젖산균을 분리 및 동정하고, 이 균주의 생리적 특성을 규명하여 상업적으로의 이용가능성을 검토하고자 실시하였다. 이를 위해 Modified MRS 분별배지를 사용하여 노란색 집락을 형성하는 균주를 대상으로 각각 α-amylase inhibitory activity, α-glucosidase inhibitory activity와 단쇄지방산 생산이 우수한 균주를 선발한 결과, KI69 균주가 최종 선발되었다. KI69 균주는 α-amylase억제활성 91.17±2.23%, α-glucosidase 억제활성 98.71±4.23%, 단쇄지방산인 프로피온산, 에세트산, 브티르산이 MRS broth에서 각각 8.78±1.12 ppm, 1.34±0.07%(w/v), 0.876±0.003 g/kg이 나타났으며, 동정결과 L. plantarum으로 판명되었고, L. plantarum KI69로 명명하였다. L. plantarum KI69는 답즙산과 산성의 pH에서 모두 우수한 생존력을 나타내었고, 효소활성은 β-galactosidase, β-glucosidase와 N-acetyl-β-glucosaminidase에 대해 높은 효소 활성을 나타내었다. 항생제 내성 실험 결과 vancomycin에 내성이 있는 반면 penicillin-G와rifampicin에 감수성을 나타냈으며, Escherichia coli, Salmonella Typhimurium, Listeria monocytogenes와 Staphyloccous aureus에 대해 각각 15.44%, 50.79%, 58.62%와 37.85%의 억제 효과를 지니고 있는 것으로 나타났다. 장 부착성은 대조구인 L. rhamnosus GG보다 우수하였다.
김치에서 분리한 유산균 Lactobacillus(L.) plantarum 3 균주(strain No.49, No.61, No.75)의 ${\beta}-galactosidase$의 생성을 위한 최적 조건을 검토하고, 효소학적 특성을 조사하였다. 효소 ${\beta}-galactosidase$의 최적 생성 조건은 strain No. 49의 경우 탄소원을 dextrose대신에 lactose를, strain No. 75 균주는 galactose를 1.0% 함유한 MRS broth에서, 초기 pH를 6.5로 하여 $30^{\circ}C$에서 48시간 배양하였을 때로 판명되었다. Strain No. 61 균주의 경우는 lactose를 3.0% 함유한 MRS 배지의 초기 pH를 7.5로 하여 실온에서 48시간 배양하였을때가 최적생성조건이었다. 효소의 최적 활성 온도는 $60^{\circ}C,\;37^{\circ}C,\;50^{\circ}C$로 3균주 모두 L. plantarum임에도 불구하고 각각 다른 온도에서 최고 활성을 보였다. 특히, strain No. 61, No. 75는 반응 온도가 상승함에 따라 활성의 감소가 관찰된 반면 strain No. 49는 $60^{\circ}C$의 높은 온도에서 가장 높은 활성을 보여 높은 온도에서도 효소활성이 유지 되는 점은 주목할 만하였으며, 3균주 모두 $45^{\circ}C$까지 90% 이상의 안정성을 나타내었다. 한편 효소의 최적 pH는 3 균주 모두 pH 6.5이었으며, pH 6.0에서 효소활성이 가장 안정하였다.
Lactobacillus acidophilus BK13과 Lactobacillus paracasei BK57 균주로부터 얻은 세포, 배양상등액 및 박테리오신 용액의 anti-Helicobacter pylori 활성과 위장상피세포에 대한 세포독성을 평가하였다. 실험균주를 MRS 배지 상에서 30시간 배양한 결과, L. acidophilus BK57 ($126.8{\pm}7.9mM$) 보다 L. paracasei BK57 ($155.9{\pm}7.9mM$)가 더 많은 양의 유산을 생산하였다. 또한, BK13 균주의 최대 박테리오신 활성(128 AU/ml)은 $37^{\circ}C$에서 30시간 배양 후 관찰되었으나, 이는 BK57의 활성(256 AU/ml) 보다는 낮았다. BK13 및 BK57 균주의 살아있는 세포를 H. pylori와 혼합 배양한 결과, 유산균의 초기균수에 의존하여 H. pylori의 저해효과가 나타났다. 게다가 BK13과 BK57로부터 얻은 배양상등액과 박테리오신은 H. pylori의 성장을 억제할 뿐만 아니라 위장상피세포에 대한 부착력과 urease 활성도 저해하였다. 한편, 이러한 균주들이 생산한 유산은 위암세포에 대한 세포독성 효과가 대조구보다 유의한 수준으로 높게 나타났다. 따라서 BK13과 BK57 균주의 항균물질은 위장질환의 원인균인 H. pylori를 저해시키는데 효과적이므로 이들 유산균은 H. pylori 감염으로부터 위장을 보호하는데 유용할 것으로 사료된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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