목적: 하이드로겔 콘택트렌즈에 HA(hyaluronic acid)를 IPN(interpenetrating polymer network)방법과 화학적 공유결합 방법(CCB; Chemical covalent bonding)으로 첨가하였을 때 광투과율과 함수율의 물리적 특성과 lysozyme 흡착량을 비교하여 하이드로겔 콘택트렌즈의 기능성 부여를 위한 효과적인 HA의 첨가방법을 살펴보고자 한다. 방법: 실험실에서 제조한 하이드로겔 콘택트렌즈에 IPN과 CCB의 두 가지 방법으로 HA를 첨가하였다. 광투과율은 300~800 nm 범위에서 측정하였으며, 함수율은 0.9% NaCl 생리 식염수를 사용하여 중량측정법으로 측정하였다. Lysozyme 흡착량은 lysozyme이 포함된 인공눈물을 제조하여 12시간동안 흡착시킨 후 HPLC로 정량하였다. 결과: HA가 첨가된 하이드로겔 콘택트렌즈의 함수율은 HA가 첨가되지 않은 렌즈에 비해 증가하였으며, CCB 방법에 비해 IPN 결합에서 함수율이 더 높게 나타났다. 광투과율은 HA 첨가 전과 후 모두 90% 이상으로 나타났다. Lysozyme 흡착 감소율은 IPN 방법으로 제조한 콘택트렌즈는 60.0%이며, CCB 방법으로 제조한 콘택트렌즈에서는 40.4%로 나타났다. 결론: CCB 방법은 기능성 물질을 렌즈 내부와 표면 전체에 화학적으로 균일하게 분포시키기에 적절한 방법이며, IPN 방법은 상분리 없이 렌즈 표면에 기능성을 부여하기에 적절한 방법으로 여겨진다.
분자각인막(MIM)은 특정 분자의 결합자리를 갖고 있는 다공성 고분자 막이다. 비용매유도 상분리(NIPS)법을 사용하여 분자각인막의 지지체로 사용될 P(AN-co-MA) 비대칭막을 제조하고, 여기에 표면 각인법을 적용하여 광활성 이니퍼터 도입과 photo-grafting을 통해 라이소자임 분자각인막을 제조하였다. P(AN-co-MA) 비대칭막을 3-chloropropyltrimethoxysilane과 광활성 이니퍼터 dithiocarbamate로 개질하고, acrylamide 단량체, N,N'-methylenebisacrylamide 가교제, 라이소자임 주형분자 혼합액을 UV 조사 환경에서 혼성중합 시켜 MIM을 제조하였다. 제조된 MIM의 FT-IR과 FE-SEM 및 EDS 분석을 실시한 결과 P(AN-co-MA) 막은 비대칭 단면 구조이었고 표면에 이니퍼터 그룹이 잘 결합되어 있어 MIM이 성공적으로 제조되었다. 제조공정의 변수 조절을 통해 라이소자임의 흡착량이 비각인막(NIM)에 비해 13배 큰 값인 2.7 mg/g을 갖는 P(AN-co-MA) 기반 MIM이 제조되었으며, 막여과 실험을 통해 라이소자임에 대한 오발부민의 투과선택도를 측정한 결과 MIM은 라이소자임의 선택적 결합력이 우수하였다.
어병세균인 Edwardsiella tarda, Vibrio ichthyoenteri, Streptococcus iniae의 강도다리에 대한 병원성, 염분농도가 어병세균의 성장 및 강도다리의 lysozyme 활성과 사육수온, 밀도가 강도다리에 미치는 영향을 조사하였다.연구 결과, E. tarda에 대해서는 병원성이 높았으나, V. ichthyoenteri와 S. iniae에 대해서는 항병력이 높았다.염분농도에 따른 균의 증식속도 조사 결과, E. tarda와 S. iniae는 저염분에서 증식속도가 빨랐으나, V. ichthyoenteri는 저염분에서 낮았으나, 유의적인 차이는 보이지 않았다. 저염분 사육에서 강도다리의 lysozyme 활성은 일반해수구에 비하여 다소 낮게 나타났으나 유의적인 차이는 보이지 않았다.사육수온, 밀도가 강도다리에 미치는 영향을 조사한 결과, 수온은 26℃ 이하, 밀도는 수조저면적의 100% 이하가 강도다리의 생리학적 성상 및 lysozyme 활성이 높게 나타났다.
Bacillus속에 속하는 세균을 FISH 방법으로 검출하기 위한 새로운 방법을 개발하였다. LGC353b, S-G-Bacill-0597-a-A-22와 S-G-Bacill-0597-a-S-22 등 3개의 probe를 22종의 Bacillus속 세균의 혼합배양액에 적용한 결과 S-G-Bacill-0597-a-A-22의 probe가 DAPI로 검출된 세균 중 95%가 FISH로도 측정되어 가장 효율이 좋은 것으로 나타났다. Hybrillization 과정 전에 Bacillus의 영양세포와 포자의 세포벽을 파괴하기 위하여 SDS/DTT (dithiothreitol)와 lysozyme를 순차적으로 전처리하는 방법과 lysozyme용액으로만 전처리 하는 두 가지 방법을 사용하였다. 그 결과, Bacillus를 검출하기 위해서는 영양세포의 경우에는 lysozyme용액으로만 전처리 하는 방법이 가장 좋았으며, 포자는 FISH로 검출되지 않았다. 따라서 토양, 하수 처리장등의 생태계에서 Bacillus를 검출할 경우에는 영양세포는 lysozyme으로 전처리 하여 FISH로 검출하고 포자는 따로 포자염색으로 검출하는 두가지 방법을 병행하여야한다.
Lopez, Isabel;Santamaria, Pilar;Tenorio, Carmen;Garijo, Patrocinio;Gutierrez, Ana Rosa;Lopez, Rosa
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제19권9호
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pp.1005-1012
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2009
Lysozyme and the reduction of metabisulfite addition to red wine were evaluated during a winemaking process and after malolactic fermentation (MLF). Treatment, with lysozyme, of the must from Tempranillo grapes and at the end of alcoholic fermentation (AF) caused the 100% implantation of the inoculated bacterial strain and shortened the duration of MLF by 7 days. At the end of the MLF, wines treated with lysozyme showed lower volatile acidity, color intensity, and biogenic amine content. The differences in color intensity disappeared during wine stabilization. The lysozyme addition after MLF led to lower histamine concentrations in wines. These phenomena occurred irrespective of the lactic acid bacteria (LAB) proliferation control and of the Oenococcus oeni dominant strain identified at this period. The results of this study show the significance of preventive use of lysozyme in vinification of red wine to maintain low histamine levels and ensure a successful implantation of inoculated O. oeni starters.
A triptolide-lysozyme (TP-LZM) conjugate was synthesized to achieve renal specific delivery and to reduce the side effects of triptolide. Triptolide was coupled to lysozyme through succinic via an ester bond with an average coupling degree of 1 mol triptolide per 1 mol lysozyme. The lysozyme can specifically accumulate in the proximal tubular cells of the kidney, making it a potential carrier for targeting drugs to the kidney. The structure of triptolide succinate (TPS) was confirmed by IR, $^{1}H-NMR$, MS and UV. The concentrations of triptolide in various samples were determined by reversed-phase high-performance liquid chromatography (HPLC). In this study, the physicochemical and stability profiles of TP-LZM under various conditions were investgated the stability and releasing profiles of triptolide-lysozyme (TP-LZM) under various conditions. In vitro release trails showed triptolide-lysozyme was relatively stable in plasma (less than 30% of free triptolide released) and could release triptolide quickly in lysosome (more than 80% of free triptolide released) at $37^{\circ}C$ for 24 h. In addition, the biological activities of the conjugate on normal rat kidney proximal tubular cells (NRK52E) were also tested. The conjugate can effectively reduce NO production in the medium of NRK52E induced by lipopolysaccharide (LPS) but with much lower toxicity. These studies suggest the possibility to promote curative effect and reduce its extra-renal toxicity of triptolide by TP-LZM conjugate.
Chicken-type lysozyme (c-lysozyme) is present in shrimp and is active against some bacteria. To further understand the regulation of c-lysozyme in the fleshy shrimp Fenneropenaeus chinensis, we determined the tissue-specific gene expression of c-lysozyme and the time-course of mRNA expression in response to Vibrio anguillarum and lipopolysaccharide (LPS) injection by quantitative reverse real-time polymerase chain reaction. The results showed that c-lysozyme was expressed in all tissues tested, including gill, eyestalk, eye, hemocytes, hepatopancreas, intestine, heart, and pleopod. It was most highly expressed in the intestine followed by the eyestalk, gill, hemocytes and hepatopancreas. The mRNA expression level began to decline in a short time after V. anguillarum challenge and was then upregulated by two fold or more at 24 h post injection (hpi) compared to that at 0 h. Expression was suppressed shortly after LPS injection and began to increase with higher levels of 5.8-, 5.2- and 8.4-fold at 24, 48, and 72 hpi, respectively. Higher expression was sustained and showed a gradual increasing trend until the end of the experiment (72 hpi). These results increase our understanding of the regulation of defense mechanisms and facilitate an evaluation of the effects of probiotics or immunostimulants in shrimp culture.
실리카 입자를 기공 형성제로 사용하여 물리적 강도와 단백질 결합용량이 높은 다공성 키토산 및 키틴 친화 막을 제조하였다. 키토산 친화 막의 BSA 단백질 결합용량은 최대 21.8mg/mL이었으며, 키틴 친화 막의 lysozyme 효소 결합용량은 최대 26.1mg/mL이었다. 제조된 다공성 키토산 및 키틴 친화 막을 사용하여 단백질 용액의 loading 유량, loading 양 및 농도 변화에 따른 BSA와 lysozyme의 친화 막 여과 크로마토그래피 분리 실험을 수행하였다. 친화 막 여과 크로마토그래피 분리 실험을 통해 얻어진 loading/washing/elution의 단계로 구성된 일련의 크로마토그램으로부터 단백질 용출량과 결합수율을 구하였다. 키토산 및 키틴 친화 막에의 BSA 및 lysozyme 단백질의 결합량과 결합수율은 loading용액의 유량이 작을수록, 주입량 및 농도가 클수록 증가하였다. 이 결과로부터 실리카 입자를 기공 형성제로 사용하여 제조된 다공성 키토산 및 키틴 막은 단백질의 대규모 여과 크로마토그래피 분리를 위한 친화 막으로서 효과적인 활용이 기대된다.
This study was designed to elucidate the effects of lysozyme, clupeine, sucrose, and sodium chloride on the foaming properties of egg albumen and podered beef plasma. Surface tensions of egg albumen(5%, w/w) and powdered beef plasma(5%, w/w) adding to lysozyme, clupeine, sucrose, and sodium chloride were 46.8$\pm$0.379~52.4$\pm$ 0.404dyne/cm(control, 51.5$\pm$0.416dyne/cm) and 54.6$\pm$0.231~60.7$\pm$0.467dyne/cm(control, 53.9$\pm$0.153dyne/cm), respectively. Turbidities of the solutions were 77.0$\pm$0.058~97.9$\pm$ 0.058(control, 91.2$\pm$0.153) and 90.3$\pm$0.058~98.5$\pm$0.115 (control, 82.7$\pm$0.100), respectively. Surface hydrophobicities of the solutions were 524~811(control, 485) and 5102~ 7128(control, 4665), respectively. The solution with high hydrophobicity revealed good foaming properties. Analysis of egg albumen and powdered beef plasma foam by electrophoresis showed that lysozyme was retained for a long time in foam. The optimal concentraitons of lysozyme and clupeine for foaming properties were 0.5% and 0.3% in egg albumen(5%, w/w) and 0.5% and 0.5% in powdered beef plasma(5%, w/w), respectively. In case of egg albumen, sodium chloride dominantly enhanced the action of clupeine. The addition of 0.3% clupeine with sodium chloride(2.0M) to egg albumen(5%, w/w) increased overrun and foam stability by 119.5% and 70.9%, respectively. The addition of 0.5% clupeine to powdered beef plasma(5%, w/w) also increased overrun and foam stability by 43.7% and 127.3%, respectively.
본(本) 연구(硏究)는 초유(初乳) 중(中)에 다량(多量) 존재하면서, 국소면역(局所免疫)을 담당하고 있는 것으로 알려진 Secretory immumoglobulin A (SIgA)를 분리(分離)하여 사람에게 급성위장병 및 집단 식중독을 일으키는 장독소형(腸毒素型) Salmonella속(屬) (S. enteritidis, S. typhimurium)의 성장억제효과(成長抑制效果)를 시험하였다. 우유(牛乳) 초유(初乳) 중(中)에서 분리한 SIgA를 각각 $0.1{\sim}5.0mg/m{\ell}$의 수준이 되도록 stock solution을 제조하여 성장억제효과(成長抑制效果)를 비교 검토하였으며, 한편 항균성물질(抗菌性物質로)로 알려진 egg lysozyme을 $0.5mg/m{\ell}$의 수준으로 단독(單獨) 첨가(添加) 및 SIgA와 혼합(混合) 첨가(添加)하면서, 그에 따른 성장억제효과(成長抑制效果)를 검토(檢討)하였다. 1. 우유(牛乳) 초유(初乳) 중(中)에 존재(存在)하는 SIgA는 gel filtration 및 ion exchange chromatography 방법으로 순수하게 분리(分離)할 수 없었으며, 또한 SIgA rich fraction 중(中)에는 dimeric-$IgG_1$이 상당히 혼재(混在)되어 있는 것이 확인되었다. 2. Human SIgA는 $0.5{\sim}1.0mg/m{\ell}$의 농도(濃度)에서 효과적인 성장억제효과(成長抑制效果)를 보였으며, 그 이상의 농도(濃度)에서는 억제효과(抑制效果)의 증가추세가 둔화되었다. Bovine SIgA는 농도가 증가함에 따라 점진적인 성장억제효과(成長抑制效果)를 보였으며, 특히 $2.0mg/m{\ell}$이상의 농도(濃度)에서는 뛰어난 억제효과(抑制效果)를 보여 주었다. Bovine IgG는 Salmonella속 (屬) 2균주(菌株)에 대하여 성장억제효과(成長抑制效果)를 보이지 않았다. Egg lysozyme의 성장억제효과(成長抑制效果)는 bovine SIgA와 비슷한 경향을 나타냈으며 농도(濃度)를 증가시킬수록 억제효과(抑制效果)가 증가(增加)하는 경향을 보여 주었다. 3. Human SIgA와 egg lysozyme을 단독(單獨) 또는 혼합첨가(混合添加)하면서 시간 경과에 따른 성장억제효과(成長抑制效果)를 시험한 결과, 2균주(菌株) 모두에서 egg lysozyme은 대조구(對照區)에 비하여 월등한 성장억제효과(成長抑制效果)를 나타내는 반면 human SIgA 단독(單獨) 및 egg lysozyme과 혼합처리구(混合處理區)에는 경미한 억제효과(抑制效果)를 나타내었다. 4. Bovine SIgA와 egg lysozyme을 단독(單獨) 또는 혼합(混合) 첨가(添加)하면서 시간경과에 따른 성장억제효과(成長抑制效果)를 시험한 결과, S. enteritidis의 경우 세처리구 모두 월등한 성장억제(成長抑制)를 보였으며, S. typhimurium의 경우 egg lysozyme 단독처리구(單獨處理區)만 뛰어난 성장억제효과(成長抑制效果)를 보여 주었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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