• Annals of Laboratory Medicine
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• 제38권6호
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• pp.578-584
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• 2018

Background: Accurate, rapid, and cost-effective screening tests for hepatitis B virus (HBV) and hepatitis C virus (HCV) infection may be useful in laboratories that cannot afford automated chemiluminescent immunoassays (CLIAs). We evaluated the diagnostic performance of a novel rapid automated fluorescent lateral flow immunoassay (LFIA). Methods: A fluorescent LFIA using a small bench-top fluorescence reader, Automated Fluorescent Immunoassay System (AFIAS; Boditech Med Inc., Chuncheon, Korea), was developed for qualitative detection of hepatitis B surface antigen (HBsAg), antibody to HBsAg (anti-HBs), and antibody to HCV (anti-HCV) within 20 minutes. We compared the diagnostic performance of AFIAS with that of automated CLIAs-Elecsys (Roche Diagnostics GmbH, Penzberg, Germany) and ARCHITECT (Abbott Laboratories, Abbott Park, IL, USA)-using 20 seroconversion panels and 3,500 clinical serum samples. Results: Evaluation with the seroconversion panels demonstrated that AFIAS had adequate sensitivity for HBsAg and anti-HCV detection. From the clinical samples, AFIAS sensitivity and specificity were 99.8% and 99.3% for the HBsAg test, 100.0% and 100.0% for the anti-HBs test, and 98.8% and 99.1% for the anti-HCV test, respectively. Its agreement rates with the Elecsys HBsAg, anti-HBs, and anti-HCV detection assays were 99.4%, 100.0%, and 99.0%, respectively. AFIAS detected all samples with HBsAg genotypes A-F and H and anti-HCV genotypes 1, 1a, 1b, 2a, 2b, 4, and 6. Cross-reactivity with other infections was not observed. Conclusions: The AFIAS HBsAg, anti-HBs, and anti-HCV tests demonstrated diagnostic performance equivalent to current automated CLIAs. AFIAS could be used for a large-scale HBV or HCV screening in low-resource laboratories or low-to middle-income areas.

• The Plant Pathology Journal
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• 제38권6호
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• pp.665-672
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• 2022

Cymbidium mosaic virus (CymMV) is one of economically important viruses that cause significant losses of orchids in the world. In the present study, a reverse transcription recombinase polymerase amplification (RT-RPA) assay combined with a lateral flow immunostrip (LFI) assay was developed for the detection of CymMV in orchid plants. A pair of primers containing fluorescent probes at each terminus that amplifies highly specifically a part of the coat protein gene of CymMV was determined for RT-RPA assay. The RT-RPA assay involved incubation at an isothermal temperature (39℃) and could be performed rapidly within 30 min. In addition, no cross-reactivity was observed to occur with odontoglossum ringspot virus and cymbidium chlorotic mosaic virus. The RT-RPA with LFI assay (RT-RPA-LFI) for CymMV showed 100 times more sensitivity than conventional reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR). Furthermore, the RT-PCR-LFI assay demonstrated the simplicity and the rapidity of CymMV detection since the assay did not require any equipment, by comparing results with those of conventional RT-PCR. On-site application of the RT-RPA-LFI assay was validated for the detection of CymMV in field-collected orchids, indicating a simple, rapid, sensitive, and reliable method for detecting CymMV in orchids.

• The Plant Pathology Journal
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• 제39권1호
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• pp.158-158
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• 2023

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제31권12호
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• pp.1716-1721
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• 2021

Chikungunya fever is an arboviral disease caused by the Chikungunya virus (CHIKV). The disease has similar clinical manifestations with other acute febrile illnesses which complicates differential diagnosis in low-resource settings. We aimed to develop a rapid test for CHIKV detection based on the nucleic acid lateral flow immunoassay technology. The system consists of a primer set that recognizes the E1 region of the CHIKV genome and test strips in an enclosed cassette which are used to detect amplicons labeled with FITC/biotin. Amplification of the viral genome was done using open-source PCR, a low-cost open-source thermal cycler. Assay performance was evaluated using a panel of RNA isolated from patients' blood with confirmed CHIKV (n = 8) and dengue virus (n = 20) infection. The open-source PCR-NALFIA platform had a limit of detection of 10 RNA copies/ml. The assay had a sensitivity and specificity of 100% (95% CI: 67.56% - 100%) and 100% (95% CI: 83.89% - 100%), respectively, compared to reference standards of any positive virus culture on C6/36 cell lines and/or qRT-PCR. Further evaluation of its performance using a larger sample size may provide important data to extend its usefulness, especially its utilization in the peripheral healthcare facilities with scarce resources and outbreak situations.

• 센서학회지
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• 제20권6호
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• pp.400-405
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• 2011

This study introduced the development of a strip type disposable enzyme-linked immunosensor platform for the detection of IgG. Strips of the strip sensor were fabricated by using commercial nitrocellulose filter membranes and a housing holder for the strips was manufactured by using a standard injection molding process for a plastic material. An IgG-urease conjugate was prepared and used for the competitive immune-binding with sample IgG. From the enzymatic reaction between the conjugated urease and urea added, ammonia was generated and caused a localized alkaline pH change on the immobilized antibody band which was coated onto the sensor strips. This pH increase subsequently caused a color change of the antibody band in the presence of a pH indicator, phenol red. Used in conjunction with a competitive immunoassay format, the intensity of the color produced is directly linked with the concentration of target analyte, IgG, and specific measurement of IgG in a lateral flow immunoassay format was achieved over the range 100 ppb to 2000 ppb IgG.

• Pediatric Infection and Vaccine
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• 제14권1호
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• pp.91-96
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• 2007

목 적 : RSV 감염증 진단을 위한 여러 가지 신속 진단법이 이용되고 있다. 본 연구는 하기도 감염 소아의 비인두흡인물에서 RSV를 검출하는데 있어서 lateral-flow immunoassay 법을 이용하여 국내에서 개발된 RSV 조기 진단 kit인 바이오라인 알에스브이$^{TM}$(Standard Diagnostics, Inc., 용인, 대한민국)의 성적을 세포배양과 면역 형광법 결과와 비교 평가하기 위하여 수행되었다. 방 법 : 2002년 7월부터 2007년 2월까지 서울대학교 어린이병원의 응급실을 방문하거나 입원한 하기도 감염소아로부터 채취한 비인두 흡인물 319개를 대상으로 하여 RSV를 검출하는데 있어서 바이러스 배양과 면역 형광법을 기준으로 하여 바이오라인 알에스브이$^{TM}$ 검사의 성적을 평가하였다. 바이오라인 알에스브이$^{TM}$ 검사는 각 검체의 바이러스 배양과 면역 형광법 결과를 모르는 검사자에 의해서 두번 이상씩 시행되었다. 결 과 : 면역 형광법과 바이러스 배양이 모두 양성인 검체 110개 중 107개(97.3%), 면역 형광법만 양성인 검체 33개 중 29개(87.9%), 바이러스 배양법만 양성인 검체 26개 중 20개(76.9%)가 바이오라인 알에스브이$^{TM}$로 검사한 결과 양성으로 나타났으며, 두 가지 기준 검사에서 모두 음성인 검체 150개 중 140개(93.3%)가 바이오라인 알에스브이$^{TM}$ 검사 결과 음성이었다. 면역 형광법 또는 바이러스 배양법에 대한 바이오라인 알에스브이$^{TM}$ 검사의 민감도는 92.3%(156/169, 95% confidence interval[CI], 87.1-97.5%), 특이도는 93.3%(140/150, 95% CI, 88.4-98.2%), 양성 예측도는 94.0%(156/166, 89.5-98.5%), 음성 예측도는 91.5%(140/143, 95% CI, 86.0-97.0%), 일치도는 95.9%(306/319, 92.1-99.7%)이었다. 결 론 : 국내에서 개발된 RSV 감염 조기 진단 kit인 바이오라인 알에스브이$^{TM}$는 높은 민감도와 특이도를 보였다. 간단한 검사 방법과 신속한 결과라는 장점이 있어 향후 유행 시기에 유용한 진단법으로 사용될 수 있을 것으로 보인다.

• 대한임상검사과학회지
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• 제52권1호
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• pp.18-27
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• 2020

카바페넴내성장내세균속균종(carbapenem-resistant Enterobacteriaceae, CRE)과 카바페넴분해효소 생성 장내세균과(carbapenemase-producing Enterobacteriaceae, CPE)의 정확한 구분과 CPE의 빠른 탐지는 임상 감염의 치료 및 관리에 중요하다. 선별방법은 주로 선택적 배지에서의 직장 면봉 표본 배양 후 카바페넴분해 효소의 활성도, 신속한 카바페넴의 불활성화 방법, 측방유동면역분석(lateral flow immunoassay, LFI), 메트릭스보조레이저 탈착/이온화이온사이클론 공명 질량분석법(matrix assisted laser desorption/ionisation time of flight mass spectrometry, MALDI-TOF MS)을 통해 표현형을 측정하는 분자기반 방법들이다. CRE, 특히 CPE의 적절한 시기에 정확한 탐지는 감염의 임상 치료 및 예방에 필수적이다. 다양한 표현형 검출방법 및 유전자-기반 검출방법이 카바페넴의 신속한 검출을 위해 이용 가능하며, 이들은 임상 미생물학 실험실에서 일상적으로 사용된다. 신속한 처리 시간으로 현장에서 치료를 위한 검사 방법을 사용하는 CRE에 대한 능동적인 감시활동에서 카바페넴분해효소를 생성하는 CRE의 탐지는 중요한 가치를 갖는다. 따라서 카바페넴분해효소의 확산을 통제하기 위해서는 전세계의 많은 검사실에서 신뢰할 수 있고 신속하고 고효율적이며, 간편하고 저비용의 검사법을 사용해야 할 것이다. 환자의 적용에서도 최적의 효과를 가지려면 CRE에 대한 신속한 검사를 통해 항균제의 관리 개입이나 다양한 형태의 임상 의사의 치료에 결정적인 지원을 재현성있게 나타나야 할 것이다. 최적의 검사법을 위해서는 보완되는 검사법을 결합하여 다양한 내성 박테리아 종을 감별하고 다양한 종류의 카바페넴분해효소의 유전적 다양성을 발굴하여 최상의 감염관리 전략을 포괄하는 시스템이 마련되어야 할 것으로 사료된다.

• 공업화학
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• 제33권2호
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• pp.173-178
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• 2022

탄소나노점@실리카를 신호 형질 소재로 이용한 측면 유동 면역 형광 분석법을 개발하여 폐암 바이오마커 중에 하나인 레티놀 결합 단백질 4의 농도를 분석하는 데 적용하고자 하였다. 측면 유동 면역 형광 분석법에서 항원 검출을 위해 바이오리셉터로 주로 사용하였던 항체 대신 좀 더 경제적이고, 장기간 보관성이 용이하며, 특정 표적 단백질에 대해 친화력이 강한 압타머를 니트로셀룰로오스 멤브레인에 사용하였다. 레티놀 결합 단백질 4에 특이적이며 5' 말단을 비오틴으로 변형한 압타머를 뉴트라비딘과 반응시켜 비오틴과 뉴트라비딘의 강한 결합력에 의해 압타머가 니트로 셀룰로오스 멤브레인에 고정되도록 하였다. 압타머가 고정된 스트립에 레티놀 결합 단백질 4 항체를 공유결합으로 고정한 탄소나노점@실리카 블루 형광 신호 형질 나노입자와 레티놀 결합 단백질 4 항원을 측면 유동 방식으로 흘려 주어 샌드위치 복합체를 형성하였다. 이렇게 형성된 샌드위치 복합체에서 탄소나노점@실리카 나노입자에 의한 형광 신호를 측정하여 항원 농도를 분석하기 위한 최적의 조건을 선정하기 위해 전개 완충용액에 첨가된 계면활성제의 농도, 이온 세기를 변화시키면서 블로킹 시약을 추가적으로 사용하였다. 그 결과 150 mM NaCl 및 0.05% Tween-20을 포함하는 10 mM Tris 완충용액(pH 7.4)에서 0.6 M 에탄올아민을 블로킹 시약으로 사용하였을 때 니트로셀룰로오스 멤브레인에 도포된 압타머와 레티놀 결합 단백질 4 항원 및 탄소나노점@실리카 나노입자로 레이블링한 항체가 결합하여 최적의 형광분석신호를 내는 것을 확인 가능하였다. 이러한 결과는 현장진단검사 키트로 현재 각광을 받고 있는 측면 유동 면역 형광 분석법에서 항체 대신 압타머를 니트로셀룰로오스 멤브레인에 고정함으로써 좀 더 경제적이며, 장기간 보관이 용이한 측면 유동 면역 형광 분석 칩을 제작하여 폐암 질환 진단용 바이오마커 검출이 가능함을 시사하였다.

• 대한수의학회지
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• 제58권1호
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• pp.27-31
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• 2018

Canine coronavirus is a single-stranded RNA virus that causes enteritis in dogs of any age. Coronaviral enteritis is seldom definitively diagnosed, since it is usually much less severe than many other types of enteritis and is self-limiting. Conventional diagnostics for the canine coronaviral enteritis such as polymerase chain reaction (PCR), virus isolation, and electron microscopic examination are inappropriate for small animal clinics due to the complicated experimental processes involved. Therefore, a commercially available lateral flow test kit based on chromatographic immunoassay techniques was tested to evaluate its performance as a first-line diagnostic test kit that could be used in clinics. The coronavirus antigen test kit detected canine coronavirus-infected dogs with 93.1% sensitivity and 97.5% specificity. The detection limit of the test kit was between $1.97{\times}10^4/mL$ and $9.85{\times}10^3/mL$ for samples with a 2-fold serial dilution from $1.25{\times}10^6\;TCID_{50}$ ($TCID_{50}$, 50% tissue culture infectious dose). Additionally, the test kit had no cross-reactivity with canine parvovirus, distemper virus, or Escherichia coli. Overall, the commercially available test kit showed good diagnostic performance in a clinical setting, with results similar to those from PCR, confirming their potential for convenient and accurate use in small animal clinics.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제33권5호
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• pp.559-573
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• 2023

Shiga toxin (Stxs)-producing enterohaemorrhagic Escherichia coli (EHEC) and Shigella dysenteriae serotype 1 are major causative agents of severe bloody diarrhea (known as hemorrhagic colitis) and hemolytic uremic syndrome (HUS) associated with extraintestinal complications such as acute renal failure and neurologic impairment in infected patients under 9 years of age. Extreme nephrotoxicity of Stxs in HUS patients is associated with severe outcomes, highlighting the need to develop technologies to detect low levels of the toxin in environmental or food samples. Currently, the conventional polymerase chain reaction (PCR) or immunoassay is the most broadly used assay to detect the toxin. However, these assays are laborious, time-consuming, and costly. More recently, numerous studies have described novel, highly sensitive, and portable methods for detecting Stxs from EHEC. To contextualize newly emerging Stxs detection methods, we briefly explain the basic principles of these methods, including lateral flow assays, optical detection, and electrical detection. We subsequently describe existing and newly emerging rapid detection technologies to identify and measure Stxs.