Ligand binding properties of muscarinic acetylcholine receptors (mAChRs) in the nematode Caenorhabditis elegans (C. elegans) were characterized by using filtration binding assays. Scatchard analysis using $[^{3}H]N-methylscopolamine$ ($[^{3}H]NMS$) showed that the dissociation constant ($K_d$) and the maximum binding value ($B_{max}$) were $3.3{\pm}0.8{\times}10^{10}$ M and $9.0{\pm}1.1$ fmol/mg protein, respectively. Binding competition experiments indicated that the affinities of C. elegans mAChRs to atropine, scopolamine, and oxotremorine were similar to those of mammalian mAChRs. Pirenzepine binding experiments revealed that the binding pattern of mAChRs in C. elegans closely resembled that of mAChRs in rat brain, suggesting that the receptors consist primarily of Ml subtype. The affinity of mAChRs for oxotrernorine was significantly affected by guanylylimidodiphosphate (Gpp(NH)p), a non hydrolyzable GTP analog, suggesting that mAChRs in C. elegans might be coupled to G proteins. The data presented here indicate the possibility that C. elegans provides a living animal model to study the action mode of the muscarinic cholinergic system.
Hippo signaling plays critical roles in regulation of tissue homeostasis, organ size, and tumorigenesis by inhibiting YES-associated protein (YAP) and PDZ-binding protein TAZ through MST1/2 and LATS1/2 pathway. It is also engaged in cross-talk with various other signaling pathways, including WNT, BMPs, Notch, GPCRs, and Hedgehog to further modulate activities of YAP/TAZ. Because YAP and TAZ are transcriptional coactivators that lack DNA-binding activity, both proteins must interact with DNA-binding transcription factors to regulate target gene's expression. To activate target genes involved in cell proliferation, TEAD family members are major DNA-binding partners of YAP/TAZ. Accordingly, YAP/TAZ were originally classified as oncogenes. However, YAP might also play tumor-suppressing role. For example, YAP can bind to DNA-binding tumor suppressors including RUNXs and p73. Thus, YAP might act either as an oncogene or tumor suppressor depending on its binding partners. Here, we summarize roles of YAP depending on its DNA-binding partners and discuss context-dependent functions of YAP/TAZ.
고도 카드뮴 내성 Hansenula anomale B-7으로부터 카드뮴 결합 단백질을 분리하여 전기 영동적으로 단일단백질로 정세됨을 확인했다. 이 단백질의 분자량은 약 33000으로서, 분자량 18000과 14000의 subunit로 구성되어 있다. 카드뮴 결합 단백질의 는 19.58이였으며, $100{\mu}{\textrm{g}}$의 단백질 중에 $9.26{\mu}{\textrm{g}}$ 카드뮴을 함유했다. 카드뮴 결합 단백질로부터 14종류의 아미노산이 검출되엇으며, aspartic acid, glycine과 alanine이 비교적 많이 함유되어 있으며, proline, valine 및 methionine은 검출되지 않았다. 본 연구에 사용된 카드뮴 내성효모로부터 분리, 정제된 카드뮴 결합 단백질은 cysteine과 카드뮴을 다량 함유하여 metallothionein의 특징을 잘 나타내고 있었다.
The N-methyl-D-aspartate (NMDA) receptor-ion channel complex is activated by the simultaneous presence of L-glutamate and glycine, allowing the binding of MK-801 to the phencyclidine (PCP) site of the receptor. The $[^3H]$MK-801 binding assay system was established for determination of pharmacological functions of test compounds acting at the glycine site of the receptor. The binding in the presence of 0.1 $\mu$M L-glutamate was increased by an agonist (glycine) in a dose-dependent fashion, while decreased by either partial agonist (R-(+)-HA-966) or antagonist (5,7-dichlorokynurenic acid: 5,7-DCKA). To distinguish partial agonism from antagonism, various concentrations of 7-chlorokynurenic acid (7-CKA) were added in the assay to eliminate the interference of the endogenous glycine present in the membrane preparations. The bindings in the presence of L-glutamate (0.1$\muM$) and 7-CKA (1, 5, or 10$\muM$) were increased by R-(+)-HA-966. Being a weak partial agonist, the extent of potentiation was much less than that by the agonist. These binding profiles were clearly distinguishable from those by the antagonist, 5,7-DCKA, which exhibited no intrinsic activity. The binding assays established in the present study are a useful system to classify ligands acting at the glycine site of the NMDA receptor by their pharmacological functions.
We recently found that the insect-derived antimicrobial peptide CopA3 (LLCIALRKK) directly binds to and inhibits the proteolytic activation of caspases, which play essential roles in apoptotic processes. However, the mechanism of CopA3 binding to caspases remained unknown. Here, using recombinant GST-caspase-3 and -6 proteins, we investigated the mechanism by which CopA3 binds to caspases. We showed that replacement of cysteine in CopA3 with alanine caused a marked loss in its binding activity towards caspase-3 and -6. Exposure to DTT, a reducing agent, also diminished their interaction, suggesting that this cysteine plays an essential role in caspase binding. Experiments using deletion mutants of CopA3 showed that the last N-terminal leucine residue of CopA3 peptide is required for binding of CopA3 to caspases, and that C-terminal lysine and arginine residues also contribute to their interaction. These conclusions are supported by binding experiments employing direct addition of CopA3 deletion mutants to human colonocyte (HT29) extracts containing endogenous caspase-3 and -6 proteins. In summary, binding of CopA3 to caspases is dependent on a cysteine in the intermediate region of the CopA3 peptide and a leucine in the N-terminal region, but that both an arginine and two adjacent lysines in the C-terminal region of CopA3 also contribute. Collectively, these results provide insight into the interaction mechanism and the high selectivity of CopA3 for caspases.
단감 '부유'를 대상으로 과실 비대 및 착색 증진에 위한 결박 처리 시 가지 종류에 따른 효과를 비교하고자 결과모지, 부주지 및 주지에 철사를 이용하여 결박 처리하였다. 철사 제거 직후 6주 동안 과실 직경과 과피색 a값은 무처리에 비해 결과모지 및 주지 결박처리에서 더 많이 증가하였지만 부주지 결박처리에서는 효과를 나타내지 않았다. 결박 처리 8주 후 수확된 과실을 처리하지 않은 과실과 비교하면, 과중은 모든 결박처리에서 더 무거웠는데 특히, 주지 결박처리에서는 월등히 무거웠다. 과고는 주지 결박처리에서만 더 높았고, 과경은 결과모지 및 주지 결박처리에서 더 길었다. 과실 당도는 결과모지 및 부주지 결박처리에서 다소 높거나 비슷하였으나, 주지 결박처리에서는 낮게 나타났다. 과피색 a값은 결과모지 및 주지 결박처리에서 유의하게 높았지만, 이와 반대로 과피색 b값은 낮게 나타남으로써 Chroma값은 결과모지 및 부주지 결박처리에서 높게 나타났다. 과피 내 라이코펜 및 베타카로틴 함량은 부주지 및 주지 결박처리에서 유의하게 높게 나타났지만, 결과모지 결박처리에서는 차이를 나타내지 않았다. 총 엽록소 함량은 모든 결박 처리에서 낮게 나타났다.
Iron and zinc were bound by neutral detergent fiber (NDF) obtained from 15 kinds of vegetables being consumed commonly in Korea. Binding capacity of Fe and Zn of NDF ranged from 37.8% to 85.5% and from 81% to 25.5%, respectively showing higher binding capacity of Fe to NDF than of Zn. Both Fe and Zn binding capacity of NDF increased as pH increased and reached to a maximum at pH 7 In all vegetables. The amount of mineral (Fe and Zn) bound to NDF increased as mineral concentration Increased.
Let G be a graph, and let a, b, k be integers with $0{\leq}a{\leq}b,k\geq0$. Then graph G is called an (a, b, k)-critical graph if after deleting any k vertices of G the remaining graph of G has an [a, b]-factor. In this paper, the relationship between binding number bind(G) and (a, b, k)-critical graph is discussed, and a binding number condition for a graph to be (a, b, k)-critical is given.
Chemical shift perturbation (CSP) is a simple NMR technique for studying binding of a protein to various ligands. CSP is the only technique that can directly provide both a value for the dissociation constant and a binding site from the same set of measurements. To accurately analyze the CSP data, the exact binding mode such as multiple binding, should be carefully considered. In this review, we analyzed systematically the CSP data with multiple modes. This analysis might provide insight into the mechanism on how proteins selectively recognize their target ligands to achieve the biological function.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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