To investigate the role of heparin in keratinocyte growth factor (KGF) and acidic fibroblast growth factor (aFGF) high affinity binding to the KGF receptor (KGFR), a cell free system was established which utilized a secreted chimeric molecule between the KGFR extracellular domain and the immunoglobulin heavy chain Fc domain (KGFR-HFc). KGFR-HFc was purified from NIH 3T3 cells and demonstrated the binding of $[^3H]-heparin$ as well as heparin Sepharose. Scatchard analysis showed that the dissociation constant for heparin binding to KGFR-HFc was 140 nM. High affinity KGF and aFGF binding to KGFR-HFc remained unchanged after treatment with 0.6 M NaCl, which is the concentration sufficient to release any bound heparin to the KGFR-HFc. These results strongly suggest that although the KGFR interacts with heparin, the presence of heparin is not absolutely required for high affinity binding of either KGF or aFGF to the KGFR.
Keratinocyte growth factor (KGF) functions in epithelial growth and differentiation in many tissues and organs. KGF is expressed in the uterine endometrial epithelial cells during the estrous cycle and pregnancy in pigs, and receptors for KGF (KGFR) are expressed by conceptus trophectoderm and endometrial epithelia. KGF has been shown to stimulate the proliferation and differentiation of conceptus trophectoderm. However, the role of KGF on the endometrial epithelial cells has not been determined. Therefore, this study determined the effect of KGF on proliferation and differentiation of endometrial epithelial cells in vitro and in vivo using an immortalized porcine luminal epithelial (pLE) cell line and KGF infusion into the uterine lumen of pigs between Days 9 and 12 of estrous cycle. Results showed that KGF did not stimulate proliferation of uterine endometrial epithelial cells in vitro and in vivo determined by the $^3$H]thymidine incorporation assay and the proliferating cell nuclear antigen staining, respectively. Effects of KGF on expression of several markers for epithelial cell differentiation, including integrin receptor subunits $\alpha$4, $\alpha$5 and $\beta$1, plasmin/trypsin inhibitor, uteroferrin and retinol-binding protein were determined by RT-PCR, Northern and slot blot analyses, and immunohistochemisty, and KGF did not affect epithelial cell differentiation in vitro and in vivo. These results show that KGF does not induce epithelial cell proliferation and differentiation, suggesting that KGF produced by endometrial epithelial cells acts on conceptus trophectoderm in a paracrine manner rather than on endometrial epithelial cells in an autocrine manner.
The present study was conducted to determine whether skin spread of Myrrha has an effect on the cell regeneration as well as wound healing following dermal scald burn injury, keratinocyte growth factor (KGF) level was analyzed immunologically in conjunction with the histological changes occurred in skin tissue. The KGF contents in Myrrha skin spread group, which shows cell regeneration ability in skin tissue after burn, increased after 5 hours. After 24 hours, 'the content of Myrrha skin spread group is noticeably higher than at 5 hours postburn. After 72 hours, KGF was decreased compared to at 24 hours postburn. Acceleration effect of KGF production in Myrrha skin spread group was high. Together with the result of histological changes, skin spread of Myrrha reduced protein degeneration and edema in dermis, and induced proliferation of epithelial cells. The data suggest that Myrrha has accelerate cell regeneration and wound healing in case of scald burn skin by spreading of paste.
Using silkworm Bombyx mori Bm5 cells, we established a stable cell line expressing the human keratinocyte growth factor (hKGF), named by the Bm5-hKGF cell, in which the protein hKGF is synthesized in the cell and secreted in the cell culture supernatant (CCS) at approximately 15-20 ng/ml. When the Bm5-hKGF cell was co-expressed with B. mori protein disulfide isomerase (bPDI) cDNA, its secretion increased by about two times the original amount. Through wound healing migration assay, it was demonstrated that the secreted hKGF included in the CCS has a very powerful biological activity of keratinocyte proliferation. We expect to produce useful human recombinant proteins from silkworm cultured cells in large quantities at low prices.
The present study was conducted to determine whether skin spread of Myrrha and Tending Diancibo Pu (TDP) irradiation have a remarkable effect on the cell regeneration as well as wound healing following dermal scald burn injury. Burn injury was induced on dorsal surface $(TBSA\;15\~20\%)$ by scald burn in rats. Postburn concentration of serum protein was significantly decreased compared with sham-treated, double treatment with Myrrha and TDP was significantly increased the protein concentration compared with that of burn control. The content of keratinocyte growth factor (KGF) at 48 h is higher than that of at 24 h, and double treatment with Myrrha and TDP was the most effective to increase the production of KGF in all experimental groups. Morphologically, epithelial regeneration and dermal collagen synthesis by fibroblasts were accelerated in Myrrha and TDP treated group compared with bum control at same time postburn. At 48 h after burn, all dermal connective tissues are recovered to new collagen fibers in case of Myrrha and TDP double treated group. The data suggest that double treatment with skin spread of Myrrha and TDP radiation have a remarkable effect of to accelerate cell regeneration and wound healing in case of scald burn skin.
Journal of the Korea Academia-Industrial cooperation Society
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v.14
no.4
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pp.1857-1862
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2013
Dermal fibroblasts produce the many components of the extracellular matrix (ECM) that are needed to maintain connective tissue integrity and repair tissue injuries. This study investigated the effects of Areca catechu extract (ACE) on dermal fibroblast cell activation. Cultured human dermal fibroblasts were treated with ACE, and then ECM production was determined by ELISA, Western blot and RT-PCR. ACE significantly accelerated the production of type 1 collagen, fibronectin, and transforming growth factor (TGF)-${\beta}1$ by ELISA and type 1 collagen by Western blot assay. ACE also increased the gene expression of COL1A1, TGF-${\beta}1$, keratinocyte growth factor (KGF) and insulin growth factor (IGF)-1. These results suggest that ACE has the potential to stimulate ECM production and that it might be suitable for maintaining skin texture.
This study investigated the effect of herbal extracts fermented by Lactobacillus plantarum (MBN) on hair growth in C57BL/6 mice and HaCaT cells. Five week old mice were applied with MBN topically (0.2 mL) once per for 21 days. Hair regrowth was evaluated by gross examination and verified by hematoxylin-eosin staining. Gene expression of vascular endothelial growth factor (VEGF), keratinocyte growth factor (KGF), and transforming growth factor-beta1 ($TGF{\beta}1$), relevant to hair growth, were examined. The data revealed that MBN successfully promoted hair growth in both male and female mice at a dose between 200-500 mg/kg and improved hair thickness. The VEGF and KGF genes were expressed in a dose-dependant manner, whereas $TGF{\beta}1$ was not expressed. Moreover, nitric oxide was significantly increased, suggesting an improvement in blood flow. These results indicate that MBN effectively promoted hair growth and gene expression relevant to hair growth in an animal model.
Min Woong Kim;Eung Ji Lee;Ha-Na Gil;Yong Ji Chung;Eun Mi Kim
Journal of the Society of Cosmetic Scientists of Korea
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v.49
no.1
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pp.75-85
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2023
This study was conducted to assess the effect of heptapeptide, composed of seven amino acids, on the activation of human hair cells isolated from human hair follicles. We have confirmed that the heptapeptide could bind to Lgr5 from the results of surface plasmon resonance (SPR) analysis. Heptapeptide enhanced the proliferation of human hair follicle dermal papilla cells (HHFDPCs) in a dose dependent manner. It induced the protein level of nuclear β-catenin, and the expressions of β-catenin downstream target genes, including LEF1, Cyc-D1 and c-Myc, in HHFDPCs. Heptapeptide significantly induced the phosphorylation of Akt and ERK, and the mRNA expressions of growth factors, including hepatocyte growth factor (HGF), keratinocyte growth factor (KGF) and vascular endothelial growth factor (VEGF), in HHFDPCs. In addition, heptapeptide significantly increased mRNA expression levels of differentiation-related transcription factors of human hair germinal matrix cells (HHGMCs) and differentiation markers of human hair outer root sheath cells (HHORSCs). Additionally, we investigated the effect of heptapeptide on human hair follicle stem cells (HHFSCs) differentiation and found that the heptapeptide reduced the mRNA and protein levels of stem cell markers, while it increased those levels of differentiation markers. These results have indicated that the heptapeptide promotes proliferation or differentiation of various types of hair follicle constituent cells through the induction of Wnt/β-catenin signaling. From the results, we have suggested that the heptapeptide in this study could be applied as a new functional material for the improvement of hair growth and alopecia.
This study investigated the hair growth effect of Schisandra chinensis extract (TS-SC) and TS-SC fermented by Lactobacillus plantarum (TS-SCLF) on human dermal papilla cells (hDPCs). The production of vascular endothelial growth factor (VEGF), insulin-like growth factor 1 (IGF-1), keratinocyte growth factor/fibroblast growth factor 7 (KGF/FGF-7) and hepatocyte growth factor (HGF), transforming growth factor beta 1 (TGF-β1) were examined. The secretion rates of VEGF and KGF/FGF-7 were high in TS-SC, and the secretion rates of IGF-1 and HGF were high in TS-SCLF. TGF-β1 was inhibited in a concentration-dependent manner in all samples. Gene expression of VEGF, IGF-1, KGF, HGF and alkaline phosphatase, relevant to hair growth, were examined. The data revealed that TS-SC and TS-SCLF successfully promoted hair growth in hDPCs. The IGF-1 gene was expressed in a dose-dependent manner in TS-SCLF. These results indicate that TS-SC and TS-SCLF fermented extract effectively promoted hair growth and gene expression relevant to hair growth in hDPCs. Used in clinical trials the test substance 'CMK-LPF01' showed a statistically significant increase in the number of hairs at 8 weeks, 16 weeks, and 24 weeks compared to before product use, and a change in hair growth, a secondary efficacy evaluation variable. Through additional research in the future, it is expected that "CMK-LPF01" can be developed as a functional material that can help alleviate symptoms of hair loss.
Journal of the Korean Association of Oral and Maxillofacial Surgeons
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v.39
no.2
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pp.63-70
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2013
Objectives: The purpose of this study was to investigate the wound healing effect of primary cultured oral mucosal keratinocytes (OMKs) and to assess their roles in skin wounds. Materials and Methods: OMK labeled with BromodeoxyUridine were scattered onto $1.5{\times}1.5$ cm skin defects of adult female nude mice (OMK group, n=15). For the control, culture media were placed on the wound (control group, n=15). Mice in both groups were sacrificed at three days (n=5), one week (n=5), and two weeks (n=5), and histomorphometric and immunoblot analyses with keratinocyte growth factor (KGF), interleukin (IL)-6, and IL-$1{\alpha}$ antibody were performed for the biopsied wound specimen. To verify the effect of the cytokine, rhIL-$1{\alpha}$ was applied instead of OMK transplantation, and the OMK and control groups were compared with regard to re-epithelialization. Results: Histomorphometric analyses demonstrated faster re-epithelialization in the graft group than in the control group at the third day, first week, and second week. Newly forming epithelium showed maintenance of the histological character of the skin epithelium. The graft group showed superior expression of KGF, IL-6, and IL-$1{\alpha}$ protein, compared with the control group. Similar faster re-epithelialization was observed after treatment with rhIL-$1{\alpha}$ instead of OMK transplantation. Conclusion: We successfully confirmed that the graft of primary cultured OMKs promoted regeneration of skin defects. The mechanism of accelerated wound healing by primary cultured OMKs was attributed to inducement of cytokine expression as required for re-epithelialization.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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