Leonid, N.Ten;Lee, Mee-Kyoung;Lee, Mi Ja;Park, Hoon
Journal of Applied Biological Chemistry
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v.43
no.4
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pp.269-272
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2000
The ginseng growth-promoting bacterium Pseudomonas fluorescens KGPP 207 synthesized indole-3- acetic acid (IAA) from L-tryptophan, indole-3-pyruvic acid (IPyA), and indole-3-acetaldehyde (IAAld), but not from indole-3-acetamide (lAM) and other intermediates of various IAA biosynthetic pathways in the experiment with indole compound supplemented cell suspensions. TLC, HPLC, and GC-MS analyses revealed the presence of IPyA, indole-3-ethanol, indole-3-lactic acid and its methyl ester, IAA and its methyl, and ethyl esters in the culture supernatant of the bacterium. IAAld was detected in the supernatant using sodium bisulfite and TLC. The results indicate that unlike gall-forming bacteria which can synthesize IAA by lAM, the indole-3-pyruvic acid pathway is the route for IAA biosynthesis in this beneficial strain of P. fluorescens.
Biosynthesis of indole-3-acetic acid (IAA) via the indole-3-pyruvic acid pathway involves three kinds of enzymes; aminotransferase encoded by aspC, indole-3-pyruvic acid decarboxylase encoded by ipdC, and indole-3-acetic acid dehydrogenase encoded by iad1. The ipdC from Enterobacter cloacae ATCC 13047, aspC from Escherichia coli, and iad1 from Ustilago maydis were cloned and expressed under the control of the tac and sod promoters in E. coli. According to SDS-PAGE and enzyme activity, IpdC and Iad1 showed good expression under the control of $P_{tac}$, whereas AspC was efficiently expressed by $P_{sod}$ originating from Corynebacterium glutamicum. The activities of IpdC, AspC, and Iad1 from the crude extracts of recombinant E. coli Top 10 were 215.6, 5.7, and 272.1 nmol/min/mg-protein, respectively. The recombinant E. coli $DH5{\alpha}$ expressing IpdC, AspC, and Iad1 produced about 1.1 g/l of IAA and 0.13 g/l of tryptophol (TOL) after 48 h of cultivation in LB medium with 2 g/l tryptophan. To improve IAA production, a tnaA gene mediating indole formation from tryptophan was deleted. As a result, E. coli IAA68 with expression of the three genes produced 1.8 g/l of IAA, which is a 1.6-fold increase compared with wild-type $DH5{\alpha}$ harboring the same plasmids. Moreover, the complete conversion of tryptophan to IAA was achieved by E. coli IAA68. Finally, E. coli IAA68 produced 3.0 g/l of IAA after 24 h cultivation in LB medium supplemented with 4 g/l of tryptophan.
A gas chromatographic analytical method for IAA was developed. IAA was extracted with 80% acetone & methanol. Sample was macerated with 80% acetone & methanol to extract IAA. After filtration, the solvent was removed and residual IAA was esterified with 14% $BF_3$/MeOH. The IAA esters can be easily separated with intermediate polar column.
IAA biosynthetic pathways in a basidiomycetous yeast, Rhodosporidiobolus fluvialis DMKU-CP293, were investigated. The yeast strain showed tryptophan (Trp)-dependent IAA biosynthesis when grown in tryptophan supplemented mineral salt medium. Gas chromatography-mass spectrometry was used to further identify the pathway intermediates of Trpdependent IAA biosynthesis. The results indicated that the main intermediates produced by R. fluvialis DMKU-CP293 were tryptamine (TAM), indole-3-acetic acid (IAA), and tryptophol (TOL), whereas indole-3-pyruvic acid (IPA) was not found. However, supplementation of IPA to the culture medium resulted in IAA peak detection by high-performance liquid chromatography analysis of the culture supernatant. Key enzymes of three IAA biosynthetic routes, i.e., IPA, IAM and TAM were investigated to clarify the IAA biosynthetic pathways of R. fluvialis DMKU-CP293. Results indicated that the activities of tryptophan aminotransferase, tryptophan 2-monooxygenase, and tryptophan decarboxylase were observed in cell crude extract. Overall results suggested that IAA biosynthetic in this yeast strain mainly occurred via the IPA route. Nevertheless, IAM and TAM pathway might be involved in R. fluvialis DMKU-CP293.
Journal of the Korean Applied Science and Technology
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v.39
no.6
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pp.831-838
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2022
An auxin-producing bacteria, KSD16, KSD33, and KSD36 were isolated from agricultural soil. The strain KSD16, KSD33, and KSD36 was classified as a strain of Arthrobacter sp. based on phylogenetic analysis of 16S rRNA gene. The isolated KDS16, KDS33, and KSD36 was confirmed to produce indole-3-acetic acid (IAA), which is one of the auxin hormones. When the concentration of IAA was assessed the maximum concentration of IAA, 206.62 mg L-1, was detected from the culture broth incubated in R2A medium containing 0.1% L-tryptophan for 48 h at 28 ℃. To study the effect of IAA producing bacteria on germination rate, seeds of Mung bean were prepared for each treatment. KSD16, KSD33, and KSD36 showed significant increase in root length and number of adventitious roots than the controls. To investigate the growth-promoting effects on the crops, Arthrobacter species were placed in water cultures and seed pots of mung beans. In consequence, the seed germination of mung beans was 73.4% higher than the control.
Indole-3-acetic acid (IAA) molecule has been successfully encapsulated in biocompatible inorganic matrix in order for the cosmetic application such as superfacial fine line reduction. The encapsulation was realized through chemical reaction involving simultaneous formation of inorganic lattice and 1M giving rise to an 1M-inorganic nanohybrid (IAA-brid) which shows excellent storage stability and sustained releasing property of indole-3-acetic acid. The clinical efficacy of essence cream containing IAA-brid as anti-wrinkle formulation was also carefully evaluated by measuring the roughness of the skin replica before and after treatment. Upon administration of the cream on the eye-area, the fine-line is drastically reduced.
Kim, Jin Hyo;Park, Jong Min;Choi, Geun-Hyoung;Park, Yun-Ki;Im, Geon-Jae;Kim, Doo-Ho;Kwon, Oh-Kyung
Journal of Applied Biological Chemistry
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v.56
no.1
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pp.53-57
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2013
In here, we investigated the quantitative analysis method of indole-3-acetic acid (IAA) and indole-3-butyric acid (IBA) with liquid chromatography-mass/mass spectrometry (LC-MS/MS) or gas chromatography-MS. Two ways of clean-up process were investigated for LC-MS/MS instrumental analysis of IAA, but both a simple dilution and hydrophile-lipophile balance (HLB) solid phase extraction (SPE) were not met the optimal recovery rates for quantitative analysis. On the other hand, the clean-up method for GC-MS was finally optimized through HLB-SPE from 250-folds diluted sample and methylation with trimethylsilyl chloride in methanol for 4 h. The limit of detection for methyl ester of IAA and IBA were both 1.4 mg/L, and recovery rates showed 93-107% from the concentrated liquid fertilizer.
To identify amino acid conjugates of indole-3-acetic acid(IAA) in plants, 23 amino acid conjugates of IAA were synthesized and characterized by UV and IR spectroscopies, and thinlayer and high performance liquid chromatographies. In etiolated pea(Pisum sativum L. var. Sparkle) shoots, aspartic and glutamic acid conjugates of IAA were tentatively identified as metabolites of endogenous IAA by thin-layer and high performance liquid chromatography, and by alkaline hydrolysis of the conjugates.
Kim, Hong-Suk;Park, Hyoung-Joon;Heu, Sunggi;Jung, Jin
Journal of Applied Biological Chemistry
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v.44
no.4
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pp.173-176
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2001
This report concerns the role of indole-3-acetic acid (IAA) in bacterial pustule disease of soybean. Pustule production in soybean leaves caused by Xanthomonas axonopodis pv. glycines was accompanied by a drastic increase in IAA content of host tissues. The phytopathogenic bacterium synthesized IAA in a tryptophan concentration-dependent manner when grown in a defined minimal medium. In complex media, however, the pathogen showed no response to tryptophan feeding, implying that the bacterial biosynthetic machinery of IAA is strictly regulated by nutrient availability of its growth environments. The results may suggest that IAA of bacterial origin and tryptophan of plant origin be involved in the process of pustule symptom development in soybean.
Potato tubers treated at $4^{\circ}C$ for 4 weeks were irradiated with a dose of 0.12 kGy from $^{60}Co$ source and stored at $20^{\circ}C,\;70{\sim}90%$ humidity for 5 weeks. Changes of ${\alpha}-amylase$, peroxidase, indole acetic acid oxidase, indole acetic acid synthesizing enzyme activities were determined. In addition, treatment of gibberellin or indole acetic acid to tubers irradiated were carried out to examine reversal of sprout-inhibition of tubers irradiated. Results are as follows; 1. Irradiation by ${\gamma}-ray$ at 0. 12 kGy dose inactivated easily the enzyme activities in vitro. $D_{37}$ values obtained were 0.94, 0.36 kGy for ${\alpha}-amylase$ and peroxidase, respectively 2. Complete inhibition of the toter sprouting was resulted by the irradiation of tubers with a dose of 0.12 kGy. 3. The indole acetic acid oxidase activity increased 2 times immediately after irradiation. Meanwhile, indole acetic acid synthesizing activity decreased about $50{\sim}75%$ for 5-week storage in irradiated potatoes, whereas the activity increased about 3.5 times along with sprouting in non-irradiated tubers. 4. In morphological aspects, deformed buds with necrosis in the meristmatic tissue were developed in irradiated tubers. Treatment of gibberellin or indole acetic acid at the concentration of 100 or 20 ppm to the irradiated tubers reversed the sprout-inhibition partially. Nevertheless, the deformed buds remained without change.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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