Flagellin, a major structural protein of the flagellum found in all motile bacteria, activates the TLR5- or NLRC4 inflammasome-dependent signaling pathway to induce innate immune responses. Flagellin can also serve as a specific antigen for the adaptive immune system and stimulate anti-flagellin antibody responses. Failure to recognize commensal-derived flagellin in TLR5-deficient mice leads to the reduction in anti-flagellin IgA antibodies at steady state and causes microbial dysbiosis and mucosal barrier breach by flagellated bacteria to promote chronic intestinal inflammation. Despite the important role of anti-flagellin antibodies in maintaining the intestinal homeostasis, regulatory mechanisms underlying the flagellin-specific antibody responses are not well understood. In this study, we show that flagellin induces interferon-β (IFN-β) production and subsequently activates type I IFN receptor signaling in a TLR5- and MyD88-dependent manner in vitro and in vivo. Internalization of TLR5 from the plasma membrane to the acidic environment of endolysosomes was required for the production of IFN-β, but not for other pro-inflammatory cytokines. In addition, we found that anti-flagellin IgG2c and IgA responses were severely impaired in interferon-alpha receptor 1 (IFNAR1)-deficient mice, suggesting that IFN-β produced by the flagellin stimulation regulates anti-flagellin antibody class switching. Our findings shed a new light on the regulation of flagellin-mediated immune activation and may help find new strategies to promote the intestinal health and develop mucosal vaccines.
Objectives : Socheongryong-Tang(小靑龍湯, SCRT), a herbal remedy, has been widely used to treat respiratory disease such as cough and asthma in Oriental countries. Recent years SCRT was known as anti-allergic agent. However, its therapeutic mechanisms including immunoglobuline such as IgE, IgG1, IgG2a productions are unclear. Methods : We investigated the effects of SCRT on levels of antigen specific total antibody, IgE, IgG1, IgG2a using ELISA method in serum from allergen-induced asthma mice. Results : SCRT decreased level of antigen specific IgE significantly. And SCRT treated mice showed downward tendency of IgG1, a Th1 relative antibody, level. But, SCRT did not affect levels of antigen specific total antibody and IgG2a, a Th1 relative antibody. Conclusions : we demonstrated the strong possibility of SCRT as a complementary or alternative drug to western drug also demonstrated that regulation of Th1/Th2 imbalance may be one of mechanism contributed to treatment for respiratory disease by SCRT.
Seven monoclonal antibodies were produced by fusing splenocytes from Balb/C mouse immunized with partially purified human interferon-a (HUIFN-a) with NSO plasmacytoma cells. aery were identified as five IgG class (432.22: IgG2b/n, 460.52: IgG2b/a , 548.46: IgG2a/n , 573.10: IgG2b/h , 625.12: IgG2b/n ), one IgA class (460.50: IgA/n ) and one IsM class (465.27: IgA/n ), and all of them revealed highly sensitive to HUIFN- a IgG class monoclonal antibodies have pts ranged from 8.2 to 8.6. Ascites fluids produced from primed Balb/c mice and were purified through column chromatography. The cytopathic effect (CPE) inhibition assay to examine neutralization of HuIFU-a by IgG class monoclonal antibodies, gave that MAbs 460.52, 548.46, 573.10 can neutralize HUIFU- a arith varying degrees except 432.22. Therefore, it is deduced that these various monoclonal antibodies may recognize the distinct epitopes on HUIFN-a.
This work was conducted to examine the variation of immunoglobulins (Igs) in serum, immune milk, normal milk and colostrum upon implantation of a new Antigen Releasing Device (ARD). The core of each ARD housed an immunostimulating complex (ISCOM) that was made of adjuvant Quil A and type XIII lipase from a Pseudomonas sp. Each ARD was coated with polylactic acid, known as polylactide, that controls antigen release. Twenty lactating Chinese Holstein cows were divided into 2 groups (n = 10): test group and control group. All cows in the test group were implanted with a single injection in the right iliac lymph node with 3 types of ARDs, which were designed to release the antigens at d 0, 14 and 28 post-implantation. Blood and milk samples were collected from both groups, and colostrum samples were also collected from other post-partum cows in the same farm. Concentrations of $IgG_1$, IgA and IgM in whey and serum were measured by sandwich ELISA. The results showed that the $IgG_1$, IgA and IgM concentrations in serum and whey from the test group were higher than from the control group. Among the three Igs measured, the $IgG_1$ concentration in serum was significantly higher at d 40 after ARD implantation, and the $IgG_1$ concentration in whey peaked at d 9, 17 and 30, which corresponded with release of the antigen. Based on Pearson's correlation between Ig concentration and production parameters, IgA concentration in normal milk was positively correlated with lactation period, which reflected IgA changes during the lactation period in immune milk. In colostrum, $IgG_1$, IgA and IgM decreased abruptly from d 0 to 3, and then decreased slightly. In conclusion, serum $IgG_1$ concentration can be affected by controlled release of the ARD, while whey IgA levels are primarily affected by lactation period. These results may be useful in future studies designed to regulate concentrations of Igs in immune milk.
To increase IgY in egg yolks, hens were fed a feed supplemented with kelp meal $4\%$ cinnamon $0.3\%$ and mint $2\%$ respectively, and immunized 5 times with Streptococcus mutans(S. mutans) at 2 week intervals. Groups fed experimental feeds without immunization showed higher laying rate than the control group, without supplementary feed and immunization. After the immunization, the laying rates had been decreasing due to the stress of immunization. The laying rate was recovered after the termination of immunization. Egg weight was not affected by the immunization but diets. Feed intake was dependent on the laying rate. Total IgY concentration in eggs laid from hens fed feeds containing supplementary feeds was higher than that of control. Especially, total IgY was increased up to $7.9\%$ in eggs laid from hens fed feeds supplemented with $4\%$ of kelp meal. Anti-S. mutans IgY was detected at 4 weeks after first immunization. Activity of anti-S. mutans IgY was sustained at 5 week after the final immunization. As the average concentration of specific IgY during the experimental period showed that eggs from hens fed the feed containing $4\%$ of kelp meal increased the specific IgY by $8.5\%$ kelp meal supplement improved specific IgY production by immunization.
Han Jung-Heon;Lee Cheol-Ho;Kim Young-Ho;La Yong-Joon
Research in Plant Disease
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v.12
no.2
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pp.144-147
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2006
Egg yolk immunoglobulin (IgY) is much widely used in medical fields, but its use in serology of plant viruses is much limited. We produced an IgY against pepper mild mottle virus (PMMoV) and applied it to several serological tests. Polyclonal antibodies were obtained from the egg yolk of chicken immunized with a total of 2mg of purified PMMoV over 2 months. The titers of antibodies were measured with the ring-test over six months after the first injection. The highest.titers of IgY was 1/2,560 at 2 months after the first injection. Approximately 60-80 mg of IgY were obtained from one egg yolk. Using the IgY, 1ng/ml of purified PMMoV was detected with the indirect ELISA. Gelrite gel double diffusion test, ELISA and tissue immuno-binding assay employing IgY gave similar sensitivity and specificity to those of IgG developed in rabbit. Therefore, the IgY which can be obtained in large quantities from a chicken, might be useful for the antibody production and the serology of plant viruses.
Objective : Allergic asthma is a chronic airway disease that affects millions of people in the developed world. The disease is characterized by concurring airway inflammation, Th2 cytokine production, increased mucus secretion, airway hyperresponsiveness (AHR) to inhaled antigen, and pulmonary fibrosis. To investigate the therapeutic and anti-asthmatic effects of Drynariae Rhizoma (DR), we examined the influence of DR on the development of pulmonary eosinophilic inflammation and airway hyperresponsiveness in a mouse model of allergic asthma. Methods : In this study, BALB/c mice were systemically sensitized to ovalbumin (OVA) followed intratracheally, intraperitoneally, and by aerosol allergen challenges. We investigated the effect of DR on airway hyperresponsiveness, pulmonary eosinophilic infiltration, various immune cell phenotypes, Th2 cytokine production and OVA specific IgE production in a mouse model of asthma. Results : In asthmatic mice, we found that DR.treated groups had suppressed eosinophil infiltration, allergic airway inflammation and AHR by suppressing the production of IL-5, IL-13 and OVA specific IgE. Conclusions : Our data suggest that the therapeutic mechanism by which DR effectively treats asthma is based on reductions of Th2 cytokines (IL-5), eotaxin, OVA-specific IgE production and eosinophil infiltration.
Immunodeficiency affected by antibody formation is most common among primary immuno-deficiencies. Selective IgA deficiency is more common but, one or more IgG subclass level is low or deficient in some patients. Patients with antibody production deficiency are vulnerable to pneumococci, staphylococci and H.influenzae leading to sinusitis, otitis media and pneumonia. A 10-year-old girl had suffered from frequent upper respiratory infections, a history of tuberculous lymphadenitis tuberculosis medication, and frequent pneumonia that requires hospital adimission. Her height and weight were below 3 percentile normal growth as a manifestation of failure to thrive. When she had another severe pneumonia, all the immunologic test was normal at first, and then we checked the IgG subclass levels. Her IgG1 was within normal, IgG2 was very low, IgG3 and IgG4 was not detected. We report a case of IgG subclass deficiency in frequent upper respiratory infection and failure to thrive.
An immunosuppressive agent, human cytotoxic T lymphocyte antigen 4 (hCTLA4), is used for the prevention of graft rejection and treatment of autoimmune diseases. hCTLA4-Ig, a CTLA4-immunoglobulin fusion protein, was produced and secreted from transgenic rice cell suspension cultures using rice a-amylase (RAmy3D) expression system. In this system, hCTLA4-Ig expression was regulated metabolically by sugar starvation. For the purpose of improving hCTLA4-Ig production, the effects of osmotic pressure was investigated in suspension cultures of transgenic rice cells. The highest production level was achieved at 40 mM sorbitol $(140\;mOsm{\cdot}kg^{-1}\;H_2O)$. Using the medium with 8 mM glucose, the level of hCTLA4-Ig in the medium reached 45.3 mg/L. By adjusting the osmotic pressure of induction medium, it was found that the hCTLA4-Ig production could be increased up to 2.1-fold compared with that in batch culture.
This study was carried out for production of neutral antibody to bee venom $(anti-phospholipase\;A_2IgY)$. Hen layings were injected repeatedly with bee venom and phospholipase $A_2$ with Freund's adjuvant. Specific antibody in egg yolk from immunized hen laying was separated, and purified, also immunological characteristics of anti phospholipase $A_2\;IgY$ was invested. The results were summarized as follows: 1. Phospholipase $A_2$ was showed single band at molecular weight 17,000 in SDS-PAGE and bee venom was showed two band at molecular weight 17,000 and under molecular weight 6,500 in SDS-PAGE. 2. During 70 days after hen immunized with bee venom and phospholipase $A_2$, antibodies(anti-bee venom IgY) to bee venom were showed poor ELISA value in egg yolk, but antibodies$(anti-Phospholipase\;A_2IgY)$ to phospholipase $A_2$ in egg yolk were increased ELISA value from 8 days or 15 days and found maximum ELISA value at 42 days. Also after booster at 49 days, ELISA value of anti Phospholipase $A_2\;IgY$ in egg yolk was supported at optical density(O.D) 1.0 level, continuously. 3. Titer of phospholipase $A_2\;IgY$ was showed 1: 32,000. 4. In double immunodiffusion test to phospholipase $A_2$ after double dilution of anti-phospholipase $A_2\;IgY$, only precipitation line was made in 1:1 dilution well of anti-Phospholipase $A_2\;IgY$. But In immunodiffusion test to anti-phospholipase $A_2\;IgY$ after double dilution of phospholipase $A_2$, Precipitation line to 250ul/ml well of phospholipase $A_2$ was showed. In double immunodiffusion test to bee venom(1mg/ml) after double dilution anti-phospholipase $A_2\;IgY$, all well without 1:32 dilution well were showed strong precipitation line. 5. In dot bloting test to anti-phospholipase $A_2\;IgY$ after diluting bee venom(0.5mg/ml), dot bloting color was showed clearly to $1/100(5{\mu}g/ml)$ in bee venom.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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