Flagellin, a major structural protein of the flagellum found in all motile bacteria, activates the TLR5- or NLRC4 inflammasome-dependent signaling pathway to induce innate immune responses. Flagellin can also serve as a specific antigen for the adaptive immune system and stimulate anti-flagellin antibody responses. Failure to recognize commensal-derived flagellin in TLR5-deficient mice leads to the reduction in anti-flagellin IgA antibodies at steady state and causes microbial dysbiosis and mucosal barrier breach by flagellated bacteria to promote chronic intestinal inflammation. Despite the important role of anti-flagellin antibodies in maintaining the intestinal homeostasis, regulatory mechanisms underlying the flagellin-specific antibody responses are not well understood. In this study, we show that flagellin induces interferon-β (IFN-β) production and subsequently activates type I IFN receptor signaling in a TLR5- and MyD88-dependent manner in vitro and in vivo. Internalization of TLR5 from the plasma membrane to the acidic environment of endolysosomes was required for the production of IFN-β, but not for other pro-inflammatory cytokines. In addition, we found that anti-flagellin IgG2c and IgA responses were severely impaired in interferon-alpha receptor 1 (IFNAR1)-deficient mice, suggesting that IFN-β produced by the flagellin stimulation regulates anti-flagellin antibody class switching. Our findings shed a new light on the regulation of flagellin-mediated immune activation and may help find new strategies to promote the intestinal health and develop mucosal vaccines.
Objectives : Socheongryong-Tang(小靑龍湯, SCRT), a herbal remedy, has been widely used to treat respiratory disease such as cough and asthma in Oriental countries. Recent years SCRT was known as anti-allergic agent. However, its therapeutic mechanisms including immunoglobuline such as IgE, IgG1, IgG2a productions are unclear. Methods : We investigated the effects of SCRT on levels of antigen specific total antibody, IgE, IgG1, IgG2a using ELISA method in serum from allergen-induced asthma mice. Results : SCRT decreased level of antigen specific IgE significantly. And SCRT treated mice showed downward tendency of IgG1, a Th1 relative antibody, level. But, SCRT did not affect levels of antigen specific total antibody and IgG2a, a Th1 relative antibody. Conclusions : we demonstrated the strong possibility of SCRT as a complementary or alternative drug to western drug also demonstrated that regulation of Th1/Th2 imbalance may be one of mechanism contributed to treatment for respiratory disease by SCRT.
Seven monoclonal antibodies were produced by fusing splenocytes from Balb/C mouse immunized with partially purified human interferon-a (HUIFN-a) with NSO plasmacytoma cells. aery were identified as five IgG class (432.22: IgG2b/n, 460.52: IgG2b/a , 548.46: IgG2a/n , 573.10: IgG2b/h , 625.12: IgG2b/n ), one IgA class (460.50: IgA/n ) and one IsM class (465.27: IgA/n ), and all of them revealed highly sensitive to HUIFN- a IgG class monoclonal antibodies have pts ranged from 8.2 to 8.6. Ascites fluids produced from primed Balb/c mice and were purified through column chromatography. The cytopathic effect (CPE) inhibition assay to examine neutralization of HuIFU-a by IgG class monoclonal antibodies, gave that MAbs 460.52, 548.46, 573.10 can neutralize HUIFU- a arith varying degrees except 432.22. Therefore, it is deduced that these various monoclonal antibodies may recognize the distinct epitopes on HUIFN-a.
This work was conducted to examine the variation of immunoglobulins (Igs) in serum, immune milk, normal milk and colostrum upon implantation of a new Antigen Releasing Device (ARD). The core of each ARD housed an immunostimulating complex (ISCOM) that was made of adjuvant Quil A and type XIII lipase from a Pseudomonas sp. Each ARD was coated with polylactic acid, known as polylactide, that controls antigen release. Twenty lactating Chinese Holstein cows were divided into 2 groups (n = 10): test group and control group. All cows in the test group were implanted with a single injection in the right iliac lymph node with 3 types of ARDs, which were designed to release the antigens at d 0, 14 and 28 post-implantation. Blood and milk samples were collected from both groups, and colostrum samples were also collected from other post-partum cows in the same farm. Concentrations of $IgG_1$, IgA and IgM in whey and serum were measured by sandwich ELISA. The results showed that the $IgG_1$, IgA and IgM concentrations in serum and whey from the test group were higher than from the control group. Among the three Igs measured, the $IgG_1$ concentration in serum was significantly higher at d 40 after ARD implantation, and the $IgG_1$ concentration in whey peaked at d 9, 17 and 30, which corresponded with release of the antigen. Based on Pearson's correlation between Ig concentration and production parameters, IgA concentration in normal milk was positively correlated with lactation period, which reflected IgA changes during the lactation period in immune milk. In colostrum, $IgG_1$, IgA and IgM decreased abruptly from d 0 to 3, and then decreased slightly. In conclusion, serum $IgG_1$ concentration can be affected by controlled release of the ARD, while whey IgA levels are primarily affected by lactation period. These results may be useful in future studies designed to regulate concentrations of Igs in immune milk.
난황 항체 강화를 위하여 켈프밀 $4\%$ 처리구와 계피 $0.3\%$와 박하 $2\%$가 첨가된 특수사료를 급여하고 Streptococcus mutans를 2주 간격의 5회 면역처리를 복합적으로 실시하면서 40주령 산란계를 사양하였다. 면역처리를 하지 않은 처리군에서는 박하 첨가군의 산란율이 높았다. 면역한 후에 발생되는 산란율 저하는 대조구와 계피 첨가군에서 적게 나타났다. 계란의 무게는 면역처리에 따른 효과가 나타나지 않았으나 사료에 따라 차이가 나타났다. 면역처리를 하지 않은 처리구에서 계피, 박하, 켈프밀 모두 총 IgY 함량이 대조구보다 높게 나왔으며, 특히 켈프밀의 경우 대조구에 비해 $5.4\%$ 가량 상승하였다. 면역 한 처리구끼리 각각 비교하여 보면 대조구에 비해서 다른 처리구에서 모두 높았으며, 특히 켈프밀 처리구가 월등히 높아 대조구에 비해 $7.9\%$ 정도의 상승이 있었다. S. mutans로 면역처리된 닭으로부터 얻은 계란에서의 충치균에 대한 특이(specific) 총 IgY 함량을 분석한 결과, 항충치균 IgY는 1차 면역하고 4주정도 후에 나타나기 시작하였다. 마지막 immunization후 5주 이상 경과하더라도 specific IgY의 양이 상당히 높은 수준을 유지하는 것을 볼 수 있었다. 총 실험기간 동안의 specific IgY 함량의 평균을 보면 켈프밀 처리구는 다른 식이에서 보다 훨씬 높은 specific IgY 역가 보여주었고 대조구에 비해 특이 항체가 약 $8.5\%$ 가량 증가되어 켈프밀의 첨가는 면역처리를 통한 특수 IgY 생산에 효과적임을 나타내었다
닭을 이용한 egg yolk immunoglobulin (IgY)의 생산과 이용 가능성을 조사하기 위하여 pepper mild mottle virus (PMMoV)로 닭을 면역하였다. Ring-test로 달걀의 난황에서 분리 정제한 IgY의 역가를 조사한 결과 IgY의 최고 역가는 1:2,560이었고 달걀 l 개에서 대략 $60{\sim}80 mg$의 IgY를 얻을 수 있었다. 최고역가를 갖는 IgY를 이용하여 Gelrite gel 이중확산법, 효소면역항체법 (ELISA), 조직자국면역반응법을 실시한 결과 간접면역효소항체법의 PMMoV 검출 감도는 1 ng/ml 이었고, 검정법의 바이러스 검출감도와 특이도는 IgG와 비슷한 경향을 보였다. 그러므로 한 마리의 닭으로부터 대량으로 생산 가능한 IgY는 식물바이러스에 대한 항체생산과 혈청학적 검정에 유용할 것으로 생각한다.
Objective : Allergic asthma is a chronic airway disease that affects millions of people in the developed world. The disease is characterized by concurring airway inflammation, Th2 cytokine production, increased mucus secretion, airway hyperresponsiveness (AHR) to inhaled antigen, and pulmonary fibrosis. To investigate the therapeutic and anti-asthmatic effects of Drynariae Rhizoma (DR), we examined the influence of DR on the development of pulmonary eosinophilic inflammation and airway hyperresponsiveness in a mouse model of allergic asthma. Methods : In this study, BALB/c mice were systemically sensitized to ovalbumin (OVA) followed intratracheally, intraperitoneally, and by aerosol allergen challenges. We investigated the effect of DR on airway hyperresponsiveness, pulmonary eosinophilic infiltration, various immune cell phenotypes, Th2 cytokine production and OVA specific IgE production in a mouse model of asthma. Results : In asthmatic mice, we found that DR.treated groups had suppressed eosinophil infiltration, allergic airway inflammation and AHR by suppressing the production of IL-5, IL-13 and OVA specific IgE. Conclusions : Our data suggest that the therapeutic mechanism by which DR effectively treats asthma is based on reductions of Th2 cytokines (IL-5), eotaxin, OVA-specific IgE production and eosinophil infiltration.
원발성 면역 결핍증에는 항체형성에 영향을 주는 질환이 가장 흔하고 그중 선택적으로 분비성 IgA 결핍이 많으나 IgG 농도가 정상 혹은 증가되어 있는 어떤 환자에서는 4가지의 IgG 아형 중에서 한 두 개 이상의 결핍이 발견된다. 대부분의 환자, 특히 IgG4 결핍증 환자에서 폐구균, 포도구균, 헤모필루스균 등에 의한 부비동염, 중이염, 폐렴 등이 반복된다. 상기 10세 여아는 평소에 잦은 상기도 감염을 앓아 왔고, 결핵성 림프절염으로 약물요법을 시행한 병력이 있으며, 매년 2~3차례 폐렴으로 입원치료를 받아왔다. 키와 몸무게가 모두 3백분위수 미만으로 성장부전(growth failure)가 지속되었다. 2003년 9월 심한 폐렴으로 입원 치료 중에 면역결핍 검사를 시행하였다. IgG, IgM level은 정상이었으나 IgG subclass 2, 3, 4에서 모두 감소된 수치를 보여 IgG 아형 결핍을 보였다. 저자들은 반복적인 호흡기 질환을 앓는 환아에서 성장부전이 동반된 IgG 아형 결핍 1례를 보고하는 바이다.
식물세포의 느린 생장과 낮은 생산량의 이유로 지금까지 는 주로 미생물이나 동물세포에서 유전자 재조합 단백질을 생산하여 왔다. 그러나 저렴한 배지 가격, 동물 유래 바이러스 감염 위험성으로부터의 안정성, glycosylation 등의 post-translational modification이 가능하다는 장점들로 인하여 최근 들어 식물세포배양은 생물학적 활성을 가진 고부가가치의 단백질을 생산하는데 많이 이용되고 있다. 본 연구에서는 생장배지에 첨가했던 sucrose의 소비와 induction 배지로의 교환에서 오는 배지내의 삼투압을 조절하여 hCTLA4-Ig의 생산성을 높이고자 하였다. 다양한 삼투압 조절제 첨가 실험을 통해 sorbitol을 선별하고, 40 mM의 sorbitol 첨가에서 상대적으로 높은 생존도와 induction 후 7일째 대조구보다 1.7배 높은 생산성을 확인하였다. 또한, 저농도의 glucose 첨가를 통한 생산성 증대에 있어서는 8 mM glucose에서 induction 이후에도 높은 세포농도를 유지하면서 최대 37.3 mg/L까지 hCTLA4-Ig 생산량을 증가시켰다. 5-L bioreactor에서 회분식 배양과 induction시의 hCTLA4-Ig 생산량을 비교한 결과 induction시 배양 18일째 최고 45.3 mg/L까지 높일 수 있었으며, 회분식 배양에 비해 2.1배 증가됨을 확인하였다.
This study was carried out for production of neutral antibody to bee venom $(anti-phospholipase\;A_2IgY)$. Hen layings were injected repeatedly with bee venom and phospholipase $A_2$ with Freund's adjuvant. Specific antibody in egg yolk from immunized hen laying was separated, and purified, also immunological characteristics of anti phospholipase $A_2\;IgY$ was invested. The results were summarized as follows: 1. Phospholipase $A_2$ was showed single band at molecular weight 17,000 in SDS-PAGE and bee venom was showed two band at molecular weight 17,000 and under molecular weight 6,500 in SDS-PAGE. 2. During 70 days after hen immunized with bee venom and phospholipase $A_2$, antibodies(anti-bee venom IgY) to bee venom were showed poor ELISA value in egg yolk, but antibodies$(anti-Phospholipase\;A_2IgY)$ to phospholipase $A_2$ in egg yolk were increased ELISA value from 8 days or 15 days and found maximum ELISA value at 42 days. Also after booster at 49 days, ELISA value of anti Phospholipase $A_2\;IgY$ in egg yolk was supported at optical density(O.D) 1.0 level, continuously. 3. Titer of phospholipase $A_2\;IgY$ was showed 1: 32,000. 4. In double immunodiffusion test to phospholipase $A_2$ after double dilution of anti-phospholipase $A_2\;IgY$, only precipitation line was made in 1:1 dilution well of anti-Phospholipase $A_2\;IgY$. But In immunodiffusion test to anti-phospholipase $A_2\;IgY$ after double dilution of phospholipase $A_2$, Precipitation line to 250ul/ml well of phospholipase $A_2$ was showed. In double immunodiffusion test to bee venom(1mg/ml) after double dilution anti-phospholipase $A_2\;IgY$, all well without 1:32 dilution well were showed strong precipitation line. 5. In dot bloting test to anti-phospholipase $A_2\;IgY$ after diluting bee venom(0.5mg/ml), dot bloting color was showed clearly to $1/100(5{\mu}g/ml)$ in bee venom.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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