The purpose of this study was to evaluate the effect of Samsoeum(SSE) on cytokine regulation of mouse T cells. The proliferation of mouse CD4 T cells under the influence of SSE extract was measured. When mouse CD4 T cell were stimulated with anti-CD3 and anti-CD28 in various concentrations of SSE extract, it increased proliferation of CD4 cells by 30% in $50{\mu}g/m{\ell}$ concentration. The proliferation of CD4 cells increased in $100{\mu}g/m{\ell}$ and $200{\mu}g/m{\ell}$. Treatment of CD4+ T cells stimulated by anti-CD3e and anti-CD28 with SSE resulted in reduction of $IFN-{\gamma}$ and IL-4 levels. SSE has dose-dependent inhibitory effect on $IFN-{\gamma}$ and decreased IL-4 by 70% at 50, $200{\mu}g/m{\ell}$. Oral administration of SSE resulted in increase of CD8+ T cell population in Balb/c mice by 8%. CD4+ T cells under Th1/Th2 polarizing conditions for 3 days with SSE resulted in decrease of $IFN-{\gamma}$ level in Th1 cells by 44% and increase of IL-4 level in Th2 cells by 60%. Experimental results of this study show that SSE induces mouse T-cell to transform into Th2, and increases T-cell population and activation.
This study was to evaluate the effect of Samjayangchin-tang (STYCT) on mouse Th1 and Th2 cells' differentiation and ovalbumin (OVA)-induced allergic inflammation. The proliferation of mouse CD4 T cells and the secretion of Th1/Th2 cytokines under the influence of STYCT extract were measured as well as the amount of ${\beta}-hexosaminidase$ in RBL-2H3 cells and the levels of $TNF-{\alpha}$ and IL-6 secretion in Raw264.7 cells. BALB/c mice were orally administered with STYCT extract and simultaneously inoculated with OVA to induce allergic reaction and measure the level of total IgE, OVA-specific IgE and the production of IFN- g, IL-4, IL-5 by the spleen cells. When mouse CD4 T cell were stimulated with anti-CO3 and anti-CD28 for 48 hours in various concentrations of STYCT extract, it decreased proliferation of CD4 cells. CD4 T cells under Th1/Th2 polarizing conditions for 3 days with STYCT resulted in mild decrease of IFN- g in Th1 cells and significant decrease of IL-4 in Th2 cells. STYCT extract had a dose-dependent inhibitory effect on antigen-induced release of ${\beta}-hexosaminidase$ in RBL-2H3 cells. Treatment of STYCT extract on LPS stimulated Raw 264.7 cells showed dose-dependent decrease in IL-6 production. Oral administration of STYCT extract on OVA-induced allergic mice showed an inhibitory effect on the levels of total serum IgE and OVA-specific IgE by 53% and 44%, respectively. Culture of spleen cells with OVA resulted in significant increase of IFN- g by 54% and significant decrease of IL-4 and IL-5 by 42%, and 29%, respectively. The results show that STYCT does not strongly induce mouse T cells to transform into Th1 or Th2 but it has an anti-allergic effect in vitro, and that it also corrects the unbalance between the reactions of Th cells in allergic diseases.
연구배경: Mycobacteria 배양액 여과 단백질은 결핵에 대한 세포성 면역반응 및 진단 연구에 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있다. 새로운 결핵균 특이 유전자를 클로닝하여 약 14-kDa의 결핵균 재조합 단백질(TB-14)을 분리 정제 한 뒤 전혈 배양(whole blood culture)을 통해 재조합 단백질 항원의 자극에 따른 IFN-${\gamma}$ 분비 유도를 PPD와 비교 측정하여 TB-14 단백질이 결핵균에 대한 숙주의 세포성 면역반응 유도에 어떤 역할을 하는 지를 알아보고자 하였다. 방 법: M. avium 배양 여과액에서 항혈청과 강하게 반응하는 하나의 M. avium 특이 단백질을 확인하여 아미노산 서열을 규명한 뒤 이 단백질과 높은 상동성을 나타내는 M. tuberculosis 유전자를 클로닝하여 다량의 결핵균 재조합 단백질(TB-14)을 분리 정제하였다. 재조합 단백질 TB-14에 대한 세포성 면역 반응 유도를 알아보기 위해 결핵 환자(9명), PPD 양성 정상인(7명) 및 PPD 음성 정상인(7명)들로부터 얻은 전혈(whole blood)를 RPMI로 희석한 뒤 $10{\mu}g$의 PPD와 TB-14 단백질로 48 시간 동안 자극하여 상층액에 분비된 IFN-${\gamma}$ 농도를 ELISA로 측정하였다. 결 과: 1. M. avium LR114F 균주의 배양 여과액 내에서 M. intracellulare 항혈청에 강하게 반응하는 새로운 M. avium 특이 단백질을 규명하여 아미노산 서열을 확인하였다. 2. M. avium 특이 단백질과 상동성을 보이는 M. tuberculosis 특이 재조합 단백질인 TB-14은 148개의 아미노산으로 구성되어 있고 30개의 아미노산으로 이루어진 signal peptides를 가지며 M. avium과 78%의 상동성을 보였다. 3. PPD 양성인의 전혈 배양에서 TB-14 단백질 항원으로 자극된 군에서 PPD로 자극된 군보다 월등히 높은 IFN-${\gamma}$ 분비를 나타내었다. 반면 결핵환자에서는 질환의 양상이나 치료 정도에 따라 IFN-${\gamma}$의 분비 양상이 일정하지 않았다. 결 론: 새로운 결핵균 특이 재조합 단백질 TB-14는 결핵에 대한 인체 내 세포성 면역반응 유도에 중요한 역할을 할 수 있는 단백질이라 생각되며 특히 PPD 양성자에서 높은 IFN-${\gamma}$의 분비 양상을 보여 정상인과 결핵 감염자의 감별진단에도 활용될 수 있으리라 생각된다. 또한 TB-14 단백질에 대한 항혈청을 제작하여 환자의 가검물에 분비되는 결핵균 특이 단백질을 탐색하는 결핵의 진단 연구에도 활용될 수 있을 것으로 사료된다.
Lee, Hye-Jeong;Kim, Ji Young;Park, Ji Eun;Yoon, Yong-Dal;Tsang, Benjamin K.;Kim, Jong-Min
한국발생생물학회지:발생과생식
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제20권4호
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pp.315-329
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2016
Fas ligand (FasL) and its receptor Fas have been implicated in granulosa cell apoptosis during follicular atresia. Although interferon-gamma (IFN-${\gamma}$) is believed to be involved in the regulation Fas expression in differentiated granulosa or granulosa-luteal cells, the expression of this cytokine and its role in the regulation of the granulosa cell Fas/FasL system and apoptosis during follicular maturation have not been thoroughly investigated. In the present study, we have examined the presence of IFN-${\gamma}$ in ovarian follicles at different stage of development by immunohistochemistry and related their relative intensities with follicular expression of Fas and FasL, and with differences in granulosa cell sensitivity to Fas activation by exogenous agonistic Anti-Fas monoclonal antibody (Fas mAb). Although IFN-${\gamma}$ immunostaining was detectable in oocyte and granulosa cells in antral follicles, most intense immunoreactivity for the cytokine was observed in these cells of preantral follicles. Intense immunoreactivity for IFN-${\gamma}$ was most evident in granulosa cells of atretic early antral follicles where increased Fas and FasL expression and apoptosis were also observed. Whereas low concentrations of IFN-${\gamma}$ (10-100 U/mL) significantly increased Fas expression in undifferentiated granulosa cells (from preantral or very early antral follicles) in vitro, very higher concentrations (${\geq}1,000U/mL$) were required to up-regulate of Fas in differentiated cells isolated from eCG-primed (antral) follicles. Addition of agonistic Fas mAb to cultures of granulosa cells at the two stages of differentiation and pretreated with IFN-${\gamma}$ (100 U/mL) elicited morphological and biochemical apoptotic features which were more prominent in cells not previously exposed to the gonadotropin in vivo. These findings suggested that IFN-${\gamma}$ is an important physiologic intra-ovarian regulator of follicular atresia and plays a pivotal role in regulation of expression of Fas receptor and subsequent apoptotic response in undifferentiated (or poorly differentiated) granulosa cells at an early (penultimate) stage of follicular development.
The purpose of this study was to evaluate the effect of Baekhasuoyijung-Tang(BHSYJT)on mouse T cell cytokines. The proliferation of mouse CD4 T cells under the influence of BHSYJT extract was measured. When mouse CD4 T cell were stimulated with anti-CD3 and anti-CD28 in various concentrations of BHSYJT extract, it increased proliferation of CD4 cells by 28% in $10{\mu}g/m{\ell}$ concentration and by 32% in $100{\mu}g/m{\ell}$ concentration. Treatment of CD4+ T cells stimulated by anti-CD3e and anti-CD28 with BHSYJT resulted in reduction of $IFN-{\gamma}$,but IL-4 levels is not changed. Oral administration of BHSYJT resulted in increase of both CD4+ and CD8+ T cell population in Balb/c mice by 11%. Oral administration of BHSYJT resulted in reduction of serum $IFN-{\gamma}$ level by 27% but, IL-4 level is not changed. CD4+ T cells under Th1/Th2 polarizing conditions for 3 days with BHSYJT resulted in decrease of $IFN-{\gamma}$ level in TH1 cells. Experimental results of this study show that BHSYJT helps to reduce secretion of $IFN-{\gamma}$ by mouse T helper cell in vitro and it had the same effect in vivo. Thus, it can be concluded that use of BHSYJT is an effective treatment for correcting immune imbalance in immune disorders and autoimmune diseases by reducing secretion of cytokine by Th1 cells.
큰느타리버섯의 기능성 식품으로서 활용도를 높이기 위해 동결 건조된 자실체에서 분리한 조다당체 추출물이 면역세포 활성에 미치는 효과를 조사한 결과는 다음과 같다. 조다당체 추출물은 300 및 1,000 $\mu$g/mL 농도에서 비장세포의 증식을 유도하였으며, 이 때 비장세포는 IL-6와 IFN-${\gamma}$ 분비를 유도하는 것으로 나타났다 조다당체 추출물은 농도 의존적으로B세포의 증식을 유도하였으며, 특히 100 $\mu$g/mL농도 이상에서는B세포의 증식이 현저히 증가하는 것으로 나타났다. 그리고 조다당체 추출물 1,000 $\mu$g/mL 농도에서 B세포가 생산하는 IgGl, IgG2a, IgG3의 분비량이 현저히 증가하였다. 또한 농도 의존적으로 대식세포주의 일산화질소 생산을 유도하였으며, 대식세포가 분비하는 IL-6, TNF-$\alpha$, GM-CSF의 생산도 현저히 증가하는 것을 확인할 수 있었다.
In order to direct the form of the immune response in an antigen-specific manner, we constructed a fusion protein (OVA/IL12) that contained the T cell-dependent antigen, ovalbumin (OVA), covalently linked to murine interleukin-12 (IL-12). The OVA/IL12 protein was produced in a baculovirus expression system and was purified by anti-OVA immunoaffinity chromatography. The purified OVA/ILI2 protein displayed potent IL-12 bioactivity in an IL-12 proliferation assay. BALB/c mice immunized with the OVA/IL12 protein produced increased quantities of anti-OVA IgG2a antibody compared with mice immunized with recombinant OVA alone. Lymph node cells from the immunized mice with the OVA/IL12 protein produced large amounts of IFN-,Y when restimulated in vitro with OVA, while those from mice immunized with the OVA protein produced little or no IFN-.gamma.. In contrast, immunization with a mixture of OVA and free recombinant IL-12 also induced IFN-.gamma. production, which was not OVA-specific. These studies indicate that the OVA/IL12 fusion protein can induce OVA-specific, Th1-dominated immune responses, and that the covalent linkage of OVA and IL-12 confines the effect of IL-12 to OVA-specific cells.
High molecular weight water-insoluble chitosan alone has been previously shown to exhibit in vitro stimulatory effect on macrophages nitric oxide (NO) production. However, high molecular weight water-soluble chitosan (WSC) had no effect on NO production by itself. When WSC was used in combination with recombinant $interferon-{\gamma}\;(Rifn-{\gamma})$, there was a marked cooperative induction of NO synthesis in a dose-dependent manner. The optimal effect of WSC on NO synthesis was shown at 24 h after treatment with $rIFN-{\gamma}$. The increased production of NO from $rIFN-{\gamma}$ plus WSC-stimulated RAW 264.7 macrophages was decreased by the treatment with $N^G$$monomethyl-_L-arginine$. The increase in NO synthesis was reflected, as an increased amounts of inducible NO synthase (iNOS) protein. Synergy between $rIFN-{\gamma}$ and WSC was mainly dependent on WSC-induced nuclear $factor-_KB$ activation. The present results indicate that WSC may provide various activities such as anti-microbial, anti-tumoral, and anti-viral. In addition, since NO has emerged as an important intracellular and intercellular regulatory molecule having functions as diverse as vasodilation, neural communication, cell growth regulation and host defense, it is tempting to hypothesize that this WSC is involved in the local control of the various fundamental processes such as cardiagra, cardiac infarction, impotence etc.
In order to find less toxic antiviral agents from Basidiomycetes, EA, the water soluble substance, was prepared from the carpophores of Elfvingia applanata(Pers.) Karst. Antiviral activity of EA against vesicular stomatitis virus [Indiana serotype, VSV(IND)] was examined in Vero cells using plaque reduction assay in vitro. And the combined antiviral effects of EA with interferon (IFN) alpha or gamma were examined on the multiplication of VSV(IND). EA caused a concentration-dependent reduction in the plaque formation of VSV(IND) with 50% effective concentration $(EC_{50})$ of $104.02\;{\mu}g/ml$. The results of combination assay were evaluated by the combination index (CI) that was analysed by the multiple drug effect analysis. All cases of the combination of EA with IFN alpha or IFN gamma showed potent synergism with CI values of $0.38{\sim}0.52$ for $50{\sim}90%$ effective levels.
This study was performed to investigate the in vitro effect of a corn water extract on immune function. Splenocyte proliferation was determined by the MTT(3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyl terazolium bromide) assay after preparing asingle cell suspension. Production of macrophage-secreted interleukin(IL)-$1{\beta}$, IL-6, and interferon(IFN)-${\gamma}$, was detected by ELISA using a cytokine assay kit. After a 48-hr incubation with mitogens(ConA or lipopolysaccharide), mice splenocyte proliferation increased with the addition of a corn water extract supplement at 10, 50, 100, 250, 500, or $1,000\;{\mu}g/m\ell$. Production of IL-$1{\beta}$, IL-6, and IFN-${\gamma}$ increased in treatments supplemented with the corn water extract. In an in vitro study, splenocyte proliferation increased when $50\sim1,000\;{\mu}\ell/m\ell$ corn water extract was added. In an ex vivo experiment, the highest production of cytokines by activated peritoneal macrophages was observed in mice orally administered 500 mg/kg body weight/day.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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