본 연구는 전복, Haliotis discus hannai 치패를 이용하여 급격한 수온변화 스트레스에 따른 간부위에서의 항산화효소 및 HSP70 mRNA의 변화를 조사하였다. 실험구는 10, 15, 20(대조구), 25 및 $30^{\circ}C$로 설정하였으며, 측정 시간은 0, 6, 12, 24 및 48h후에 측정하였다. 그 결과 HSP70 mRNA의 발현은 다른 실험구들과 비교하여 $30^{\circ}C$ 실험구에서만 유의적으로 높게 발현되었으며, SOD의 경우 모든 실험구에서는 증가하는 경향을 나타내었으나, 고수온에서 12 h 이후 급격한 상승을 나타내었고, 저수온에서는 수온 스트레스 자극 직후에 증가한 후 회복되는 경향을 나타내었다. CAT에서는 실험 개시 후부터 고수온 실험구에서 지속적인 상승을 나타내었다. 실험기간 중의 생존율은 $30^{\circ}C$ 실험구를 제외한 모든 실험구에서 $100\%$의 생존율을 나타내었으며, $30^{\circ}C$ 실험구에서는 $92\%$의 생존율을 나타내었다. 이상의 결과로, 20"C에서 순치된 전복은 저수온 스트레스에 대한 생리학적 방어기작이 약 $5^{\circ}C$ 내외의 고수온 스트레스에 대한 생리학적 방어기작과 비교하여 보다 빠르게 작용하여 안정화하는 것으로 나타났으며, 일정 수온 이상의 고수온에 노출되었을 경우에는 생체 내 과도한 생리학적 방어 기작이 작용하여 항산화효소 및 HSP70 발현이 증가하는 것으로 나타났다.
This study was performed to clarify whether the variation of stress related heat shock protein 70 (HSP70) (GenBank X68213) gene was associated with the nuclear morphological change of in vitro maturation and in vitro capacitation in oocytes of pig ovaries obtained at the slaughterhouse. The nucleic acid substitution of C to G at the 483rd position was found out in HSP70 K1 (290-512) from X68213. The ovaries were categorized into CC, CG, and GG genotypes using polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) (BsiHKA I). After the second in vitro maturation of immature fresh oocytes, the relation of nuclear morphological change in oocytes with the genotype of HSP70 K1 gene was such that the MII ratios of the genotype GG and CG (46.93% and 42.20%, respectively) were significantly higher than that of the CC genotype (10.71%) (p<0.05). With respect to in vitro maturation of frozen-thawed oocytes by an open pulled straw (OPS) method, the percentage of oocytes matured to MII stage of the CG genotype showed a higher trend than CC and GG genotypes. After the in vitro maturation of immature fresh oocytes and frozen-thawed oocytes by the OPS method, the relation of the pronuclei change in oocytes matured in vitro with HSP70 genotype was assessed, and the result showed that the enlarged sperm heads (ESH) of matured fresh oocytes and frozen-thawed oocytes were 80.0% and 60.0% in the CC genotype, respectively. The CC genotype group had a significantly higher rate of ESH than the CG and the GG genotype group (p<0.05). The ratios of polyspermic invasion were not different among HSP70 of the three genotypes. It was considered that the rate of in vitro maturation of fertilized oocytes was expected to differ according to genotype of the stress related gene.
본 연구는 돼지에서 스트레스 관련 HSP70 유전자의 다형성과 IVF 수정란의 배발달간의 관련성을 조사하기 위하여 수행되었으며 그 결과는 다음과 같다. HSP70-K1, -K3 및 -K4의 PCR 산물로부터 SSCP 다형성은 각각 다르게 확인되었다. 체외수정란의 분할율 시험에서 HSP70 K1-AA($73.1\%$) 및 K1-AB($62.3\%$) 난할율은 HSP70 K1-BB($49.3\%$)보다 유의적으로 높게 나타났다(p<0.05). 또한 HSP70 K3-AA($72.4\%$) and K3-AB($62.2\%$)형도 HSP70 K3-BB($49.1\%$)형보다 유의적으로 높았다(p<0.05). 돼지품종들과 정자의 HSP70 유전자형에 따른 2-cell 단계까지의 체외수정란 배발달은 유의적 차이를 보였다. Landrace(28.8)와 Duroc(29.8)에서 2세포기까지 발달된 수정란의 수는 Yo.kshire(10.9) 보다 유의적으로 높았다(p<0.05). 또한 HSP70 K4-AB(29.6)형의 2세포기 단계까지의 배발달 수정란 수는 HSP70 K4-AA(10.6)형보다 유의적으로 높았다(p<0.05). 그러나 돼지 품종 및 HSP70 유전자형에 따른 배반포기까지 수정란 배발달 정도는 유의적 차이는 없었다. 이러한 결과들은 돼지 체외수정란의 초기 배발달은 HSP70 유전자형과 품종에 따라서 영향을 받는 것으로 확인되었다.
To better understand the gene expression of the cold-adapted polar diatom, we conducted a survey of the Chaetoceros neogracile transcriptome by cDNA sequencing and expression of interested cDNAs from the Antarctic diatom. A non-normalized cDNA library was constructed from the C. neogracile, and a total of 2,500 cDNAs were sequenced to generate 1,881 high-quality expressed sequence tags (ESTs) (accession numbers EL620615-EL622495). Based on their clustering, we identified 154 unique clusters comprising 342 ESTs. The remaining 1,540 ESTs did not cluster. The number of unique genes identified in the data set is thus estimated to be 1,694. Taking advantage of various tools and databases, putative functions were assigned to 939 (55.4%) of these genes. Of the remaining 540 (31.9%) unknown sequences, 215 (12.7%) appeared to be C. neogracile-specific since they lacked any significant sequence similarity to any sequence available in the public databases. C. neogracile consisted of a relatively high percentage of genes involved in metabolism, genetic information processing, cellular processes, defense or stress resistance, photosynthesis, structure, and signal transduction. From the ESTs, the expression of these putative C. neogracile genes was investigated: fucoxanthin chlorophyll (chl) a,c-binding protein (FCP), ascorbate peroxidase (ASP), and heat-shock protein 90 (HSP90). The abundance of ASP and HSP90 changed substantially in response to different culture conditions, indicating the possible regulation of these genes in C. neogracile.
온도는 곤충의 발달, 성장, 생식에 중요한 요인이며, 또한 곤충의 생존에 직접적 관련있는 물리적 요인이다. 변온동물인 곤충은 생존을 위해 기후변화에 반응을 해야 하며, 저온과 같은 취약한 환경하에서도 다양한 생존전략을 발달시켜야 한다. 본 연구는 저온에 대한 적응에 기여하는 유전자를 동정하기 위해 배추좀나방 유충의 지방체를 저온과 상온에 노출시켜 전사체 분석을 수행하였다. 저온전사체에서는 chitinase, 표피단백질, Hsp23, chytochrome, Glutathione S transferase, phospholipase 2 유전자의 발현이 증가된 반면, 에너지 대사에 관여하는 UDP-당전이효소, trehalase, trehalose transporter는 오히려 발현이 감소하였다. 저온에 곤충이 노출되었을 때, 대사중심인 지방체의 유전자 발현의 변화가 곤충의 온도 적응을 이해하는 단서를 제공할 수 있을 것으로 기대된다.
Background: Recently, the rate of infections with non-tuberculous mycobacteria (NTM) has been increasing in Korea. Precise identification of NTM is critical to determination of the pathogen and to target treatment of NTM patients. Methods: Sixty-eight unclassified mycobacteria isolates by rpoB PCR-RFLP assay (PRA) collected in 2008 were analyzed by National Center for Biotechnology Information (NCBI) Basic Local Alignment Search Tool (BLAST) search after sequencing of 16S rRNA, hsp65, rpoB genes. Results: Nineteen strains of 68 isolates were specified as species after sequencing analysis of 3 gene types. We found 3 M. lentifulavum, 5 M. arupense, 4 M. triviale, 4 M. parascrofulaceum, and one M. obuense. One M. tuberculosis and another M. peregrinum were mutated at the Msp I recognition site needed for rpoB PRA. The remaining 49 isolates did not coincide with identical species at the 3 kinds genes. Conclusion: Sequencing analysis of 16S rRNA, hsp65, rpoB was useful for identification of NTM unclassified by rpoB PRA.
Endometritis is one of the primary reasons for reproductive failure. In order to investigate endometritis-associated marker proteins, proteomic analysis was performed on bovine endometrium with endometritis. In bovine endometritis, desmin, $\alpha$-actin-2, heat-shock protein (HSP) 27, peroxiredoxin-6, luteinizing hormone receptor isoform 1, collectin-43 precursor, deoxyribonuclease-I (DNase-I), and MHC class I heavy chain (MHC-Ih) were up-regulated. In contrast, transferrin, interleukin-2 precursor, hemoglobin $\beta$ subunit, and potassium channel tetramerisation domaincontaining 11 (KCTD11) were down-regulated in comparison to normal endometrium. The proteomic results were validated by semiquantitative-PCR and immunoblot analysis. The mRNA levels of desmin, transferrin, $\alpha$-actin-2, HSP27, KCTD11, and MHC-Ih were up-regulated by over 1.5-fold, and showed a pattern similar to their proteomic profiles. Desmin and $\alpha$-actin-2 protein showed positive correlations between proteomic analysis and immunoblot analysis. These results suggest that desmin and $\alpha$-actin-2 may play important roles in endometritis-related function, and could be useful markers for the diagnosis of bovine endometritis.
Kim, Myung-Jin;Jeong, Eui-Kyong;Kwon, Eun-Young;Joo, Ji-Young;Lee, Ju-Youn;Choi, Jeomil
Journal of Periodontal and Implant Science
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제44권5호
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pp.235-241
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2014
Purpose: Regulatory T cells (Tregs), expressing CD4 and CD25 as well as Foxp3, are known to play a pivotal role in immunoregulatory function in autoimmune diseases, cancers, and graft rejection. Dendritic cells (DCs) are considered the major antigen-presenting cells (APCs) for initiating these T-cell immune responses, of which $CD103^+$ DCs are derived from precursor human peripheral blood mononuclear cells (PBMCs). The aim of the present study was to evaluate the capacity of these PBMC-derived $CD103^+$ DCs to promote the differentiation of antigen-specific Tregs. Methods: Monocyte-derived DCs were induced from $CD14^+$ monocytes from the PBMCs of 10 healthy subjects. Once the $CD103^+$ DCs were purified, the cell population was enriched by adding retinoic acid (RA). Peptide numbers 14 and 19 of Porphyromonas gingivalis heat shock protein 60 (HSP60) were synthesized to pulse $CD103^+$ DCs as a tool for presenting the peptide antigens to stimulate $CD3^+$ T cells that were isolated from human PBMC. Exogenous interleukin 2 was added as a coculture supplement. The antigen-specific T-cell lines established were phenotypically identified for their expression of CD4, CD25, or Foxp3. Results: When PBMCs were used as APCs, they demonstrated only a marginal capacity to stimulate peptide-specific Tregs, whereas $CD103^+$ DCs showed a potent antigen presenting capability to promote the peptide-specific Tregs, especially for peptide 14. RA enhanced the conversion of $CD103^+$ DCs, which paralleled the antigen-specific Treg-stimulating effect, though the differences failed to reach statistical significance. Conclusions: We demonstrated that $CD103^+$ DCs can promote antigen-specific Tregs from naive T cells, when used as APCs for an epitope peptide from P. gingivalis HSP60. RA was an effective reagent that induces mature DCs with the typical phenotypic expression of CD103 that demonstrated the functional capability to promote antigen-specific Tregs.
중금속은 다양한 경로를 통해 환경 중 배출되어 서식 생물에 노출되며 체내 다양한 생리학적 불균형을 유도한다. 본 연구에서는 수서생물지표종으로 이용되는 깔따구(Chironomus riparius)를 이용하여 야외 중금속(Al, Aluminum; Cr, Chromium; Cu, copper; Mn, Manganese; Zn, Zinc) 농도 노출에 따른 다양한 분자발현 반응과 상관성을 분석하였다. 생물 체내 분자 반응을 관찰하기 위해 heat shock protein 40, 70, 90 (HSP40, 70, 90), cytochrome 450(CYP450), Glutathione S-transferase (GST) and Serine-type endopeptidase (SP)를 이용하였다. 그 결과, 스트레스 분자마커로 이용되는 HSPs 유전자들은 중금속 노출된 개체들에서 대조군보다 높은 경향을 보였으며 Cu 노출 시 가장 높은 발현을 나타냈다. 해독에 관여하는 CYP450과 GST 유전자 발현 결과, Cr과 Cu에서는 다른 노출군에 비해 높은 발현 경향을 나타냈다. SP 유전자 발현 결과 Al을 제외한 모든 노출군이 대조군과 유사한 발현 패턴을 보였다. 이와 같은 연구 결과는 실내에서 환경 중 존재하는 실제 농도를 반영한 독성실험을 통해 노출물질과 농도에 따라 특이적으로 발현하는 분자마커 패턴을 보고하였다. 또한, 수생태계로 유입되는 중금속이 하천에 서식하는 생물에 주는 유해 영향에 대한 정보와 분자 지표 유전자들의 현장 적용 가능성을 보여준다.
Objective: This study was perfomled to examine the therapeutic effect of aqua-acupuncture solution of Hominis Placenta(HP) on kidney and liver intoxicated by $HgCI_2$ in rats. Methods: $10\%$ and $25\%$ HP aqua-acupuncture were carried out everyday for 8 days on corresponding bilateral loci of Shinsu(BL23) and Kansu(BL18), respectively, after mercuric chloride intoxication in rats. Thereafter BUN, creatinine, GOT, GPT, ALP, ${\gamma}$-GT, albumin and total bilirubin were measured before intoxication, and at the 4th and the 8th experimental day. Histopathological and immunochemical observation were also carried out. Results: 1. It showed significant decreases of BUN in the group of $10\%$ HP aqua-acupuncture into Shinsu on the 4th experimental day as compared with the control group. 2. It showed significant decreases of creatinine in the group of $10\%$ HP aqua-acupuncture into Shinsu on the 4th and the 8th experimental days as compared with the control group. 3. There were not any significant changes of GOT, GPT, ALP,${\gamma}$-GT, albumin and total bilirubin in the HP aqua-acupuncture groups compared with the control group. 4. By the histopathological observations on kidney under a light microscope, alt the $10\%$ and $25\%$ HP aqua-acupuncture into Shinsu showed the preventive effect on tubulo-interstitial necrosis and muItifocal calcification in tubular lumen respectively compared with the control group. 5. By the histopathological observations on liver under a light mIcroscope, the groups $10\%$ and $25\%$ HP aqua--acupuncture into Kansu did not show any significant changes in the liver compared with the control group. 6. By the immunochemical analysis of heat shock protein(hsp) and glucose-regulated protein(grp) in rat renal cortex, the expressions of hsp70 and grp78 were decreased in the $10\%$ and $25\%$ HP aqua-acupuncture into Shinsu respectively compared with the control group. Conclusion: These results suggest that Hominis Placenta aqua-acupuncture have an effect on prevention and protection of renal intoxication by $HgCI_2$ in rats.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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