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청국장에서 분리한 세균인 Bacillus licheniformis HK-12의 혈전용해활성 및 특징 (Fibrinolytic Activity and Characterization of Bacillus licheniformis HK-12 Isolated from Chungkook-Jang)

  • 손병희;송유진;오계헌
    • KSBB Journal
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    • 제23권3호
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    • pp.251-256
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    • 2008
  • 이 연구의 목적은 자연 천연한 청국장에서 분비되는 혈전용해효소를 생산하는 Bacillus Iicheniformis HK-12의 혈전용해활성과 특성을 조사하기 위하여 실시한 것이다. 먼저 균주 HK-12의 생리생화학적 특성에 대하여 조사하였다. BIOLOG GP2 MicroPlate system과 16S rRNA 염기서열 분석을 통하여 균주를 동정하였고, 그 결과 Bacillus licheniformis로 확인되었고, B. licheniformis HK-12로 명명하였으며, 이 균주는 GenBank에 [Eu288193]로 등재하였다. 16S rRNA 염기서열 분석에 근거하여, B. licheniformis HK-12의 계통수를 작성하였다. B. licheniformis HK-12의 배양기간동안 세균의 생장, 혈전용해활성, pH의 변화를 모니터링하였다. 36시간배양 후, 배양의 최대 혈전용해활성은 대조군으로서 플라스민과 비교하여 약 2.25배로 나타났다. 혈전용해활성과 관련하여, B. licheniformis HK-12의 생장에서 최적 pH와 온도는 각각 초기 pH 7.0과 40$^{\circ}C$로 나타났다.

보정방암탕가감방(保正防癌湯加減方)이 cisplatin으로 유도된 인간 근위세뇨관 HK-2세포의 G2/M phase arrest에 미치는 영향 (Inhibitory Effect of Bojungbangam-tang Kakambang on Cisplatin-Induced G2/M Phase Arrest in Human Renal Proximal Tubular HK-2 Cells)

  • 박성철;이수경;염승룡;권영달;송용선
    • 동의생리병리학회지
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    • 제21권6호
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    • pp.1555-1563
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    • 2007
  • To idenifty effect of Bojungbangam-tang kakambang on Cisplatin-Induced G2/M Phase Arrest in Human Renal Proximal Tubular HK-2 Cells. Cytotoxicity of cisplatin was detected in HK-2 cells and the value of IC50 is about $25\;{\mu}M$. The treatment of cisplatin to HK-2 showed the G2/M phase cell cycle arrest. The ethanol extract of Bojungbangam-tang kakambang (EBTKB), a new herbal prescription composed of ten crude herbs, inhibited cisplatin-induced G2/M phase arrest in HK-2 cells. EBTKB increased G0/G1 peak in cisplatin-treated HK-2 cells. p53, p21 and p27 expression were increased in cisplatin-treated HK-2 cells. Inhibitory effect of EBTKB on cisplatin-induced G2/M phase arrest was accomplished through inhibition of p53, p21 and p27 expression. Also, reduced CDK2 and cyclin A expression by cisplatin were increased by EBTKB, but cyclin E was not changed. Reduction of ERK activation and increment of p38 activation by cisplatin were increased ERK activation and decreased p38 activation by EBTKB. Cisplatin had no effect on JNK activation, but EBTKB increased JNK activation. These results can suggest that EBTKB inhibits cisplatin-induced G2/M phase arrest in HK-2 cell through reduction of p53-dependent p21 and p27 protein, ERK activation and p38 inactivation.

Sweroside plays a role in mitigating high glucose-induced damage in human renal tubular epithelial HK-2 cells by regulating the SIRT1/NF-κB signaling pathway

  • Xiaodan Ma;Zhixin Guo;Wenhua Zhao;Li Chen
    • The Korean Journal of Physiology and Pharmacology
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    • 제27권6호
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    • pp.533-540
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    • 2023
  • Sweroside is a natural monoterpene derived from Swertia pseudochinensis Hara. Recently, studies have shown that sweroside exhibits a variety of biological activities, such as anti-inflammatory, antioxidant, and hypoglycemic effects. However, its role and mechanisms in high glucose (HG)-induced renal injury remain unclear. Herein, we established a renal injury model in vitro by inducing human renal tubular epithelial cell (HK-2 cells) injury by HG. Then, the effects of sweroside on HK-2 cell activity, inflammation, reactive oxygen species (ROS) production, and epithelial mesenchymal transition (EMT) were observed. As a result, sweroside treatment ameliorated the viability, inhibited the secretion of inflammatory cytokines (TNF-α, IL-1β, and VCAM-1), reduced the generation of ROS, and inhibited EMT in HK-2 cells. Moreover, the protein expression of SIRT1 was increased and the acetylation of p65 NF-kB was decreased in HK-2 cells with sweroside treatment. More importantly, EX527, an inhibitor of SIRT1, that inactivated SIRT1, abolished the improvement effects of sweroside on HK-2 cells. Our findings suggested that sweroside may mitigate HG-caused injury in HK-2 cells by promoting SIRT1-mediated deacetylation of p65 NF-kB.

청국장에서 분리한 Bacillus licheniformis HK-12의 혈전용해활성과 프로테옴 분석 (Fibrinolytic Activity and Proteomic Analysis of Bacillus licheniformis HK-12 Isolated from Chungkuk-Jang)

  • 손병희;권상철;오계헌
    • 한국산학기술학회논문지
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    • 제9권3호
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    • pp.800-806
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    • 2008
  • 자연발효된 청국장으로부터 혈전용해활성을 가지는 세균 Bacillus licheniformis HK-12를 농화분리하여, 배양기간 동안 생산된 혈전용해활성을 가지는 단백질에 대해 프로테옴 분석을 실시하였다. B. licheniformis HK-12를 액체 영양배지에 접종하여 얻어진 배양상등액을 피브린 평판법(fibrin plate method)을 사용하여 효소활성을 측정하였다. 그 결과, HK-12의 혈전용해 활성은 대조구인 plasmin보다 약 2.3배정도 높은 활성을 나타내었다. 효소는 배양상등액을 ammonium sulfate 침전, DEAE-cellulose chromatography, Sephadex chromatography 등을 수행하여 분리정제하였으며, 정제된 혈전용해효소의 분자량은 SDS-PAGE를 통해 약 23 kDa로 측정되었다. 배양시간에 따른 HK-6의 세포외 단백질의 변화를 2-D PAGE 분석을 통하여 분석하였다. 그 결과 36시간배양 후에 가장 현저하게 유도된 spot #1을 분리하였으며, MALDI-TOF MS를 이용하여 단백질 동정을 실시한 결과, 유도된 단백질의 아미노산 서열은 $^1EKKIEKYREEEORLK^{15}$으로서, serine protein kinase (PrkA) (AAU22526)로 확인되었다.

2차원적(次元的)인 직격자(直格子)와 역격자간(逆格子間)의 상호관계(相互關係) (Interrelation between Two-Dimensional Direct and Reciprocal Lattices)

  • 김영상;고재중;강상욱;한원식;서일환;김진규;김윤중
    • 한국결정학회지
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    • 제17권1호
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    • pp.1-5
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    • 2006
  • 2차원적(二次元的)인 직격자(直格子)와 역격자(逆格子)의 기본(基本) vectors를 정의(定義)하고 이들 간(間)에 존재(存在)하는 여러 가지 상호관계(相互關係)를 유도(誘導)한 후(後) $\vec{d^*}(hk)//direction\;of\;(hk),\;d(hk)=1/d^*(hk),\;[uv]$ 방향(方向)에 속(屬)한 (hk)면(面)들, 그리고 이차원적(二次元的)인 4가지 격자(格子)들의 면적(面積) 및 면간건리등(面間距離等)의 계산법(計算法)을 제시(提示)하였다.

프로스타글란딘 유도체의 합성과 그의 생물학적 활성에 관한 연구 II. 위궤양과 위산분비에 대한 프로스타글란딘 유도체의 효과 (Studies on the Synthesis and Biological Activity of Prostaglandin Derivatives II. Effects of Prostaglandin Derivatives on Acute Gastric Ulcer and Gastric Secretion in Rats)

  • 조태순;이선미;함원훈;이병무;김경례;지상철;고준일;박인;오창영;박호군;김형자;이향우
    • Biomolecules & Therapeutics
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    • 제3권1호
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    • pp.72-79
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    • 1995
  • The antiulcer effects of newly synthesized prostaglandin derivatives were investigated in various experimental ulcer models and on gastric secretion in rats. HK-3 and HK-4, PG $E_2$derivatives, prevented the formation of acute gastric ulcer induced by ethanol or aspirin in pylorus-ligated rats. The ulcer formation was moderately inhibited by HK-1 and HK-2, PG $F_{2{\alpha}}$ derivatives, and aggravated by SK-1, SK-2 and SK-3, PG $F_{2{\alpha}}$ derivatives. HK-3 and HK-4 reduced the volume, acid output and pepsin output of gastric juice in pylorus-ligated rats. The gastric perfusion with physiologic saline(pH 6.0) showed relatively constant acid secretion and indomethacin increased the acid secretion. The acid secretion was markedly decreased by PG $E_2$but PG $F_{2{\alpha}}$ caused little change. Prostaglandin derivatives, especially HK-3 arid HK-4, significantly inhibited the acid secretion induced by indomethacin. The results show that, PG $E_2$ derivatives, HK-3 and HK-4, inhibit acid secretion and also have protective effects on gastric ulceration induced by ethanol or aspirin.

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LPS로 활성화한 RAW 264.7 세포에서 HK표고버섯균사체의 NF-κB 활성 억제를 통한 항염증 효과 (Anti-inflammatory Efficacy of HK Shiitake Mushroom Mycelium in LPS-treated RAW 264.7 Cells Through Down-regulation of NF-κB Activation)

  • 송채영;오태우;김훈환;이유빈;김정옥;김곤섭;하영래
    • 생명과학회지
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    • 제32권7호
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    • pp.491-500
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    • 2022
  • HK표고버섯균사체(HK shiitake mushroom mycelium, HKSMM)는 간 건강 개별 인정 건강기능식품이다. LPS로 활성화된 RAW 264.7 세포에서 HKSMM50 (HKSMM의 50% ethanol 수용액 추출물)의 항염증효과를 연구하였다. AHCC는 positive control로 사용하였다. LPS로 활성화된 RAW 264.7 세포에 HKSMM50 및 AHCC를 처리(0, 20, 100, 500 ㎍/ml)하고 24시간 배양하여 배양물의 염증 관련 인자는 ELISA kits로, 세포에 함유된 iNOS와 COX-2 protein 발현은 Western blotting으로 측정하였다. HKSMM50는 LPS 처리에 비해 농도 의존적으로 NF-κB 함량을 낮추었고, iNOS와 COX-2 protein 발현을 억제하여 NO와 PGE2 함량을 낮추었다. 더불어 HKSMM50는 LPS 처리에 비해 IL-1β, TNF-α, IL-4 및 IL-6의 함량을 낮추었으나 SOD와 CAT의 활성은 증가시켰다. AHCC도 HKSSM50 처리와 비슷한 효과를 나타내었다. 이 결과는 HKSMM50이 LPS로 활성화된 RAW 264.7 세포에서 NF-κB 신호전달을 억제하여 항염증효과를 나타내었으며, HKSMM은 면역기능증진에 도움을 줄 수 있는 건강기능식품원료로 사용할 수 있을 것이다.

HK-2 세포에서 카드뮴 세포독성에 대한 밀몽화(密蒙花)의 효과 (Effect of Buddleja officinalis on Cadmium-induced Cytototoxicty in HK-2 Cells)

  • 주성민;강민수;전병훈
    • 동의생리병리학회지
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    • 제26권4호
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    • pp.441-445
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    • 2012
  • Cadmium is an important occupational and environmental pollutant that damages various organs, especially renal proximal tubular cells. We examined the effect of aqueous extract of Buddleja officinalis (ABO) on cadmium chloride ($CdCl_2$)-induced cytotoxicity in HK-2 human renal proximal tubular cells. HK-2 cells were preincubated with ABO (50, 100, 200 and 400 ${\mu}g/ml$) for 3 hr and then treated with 10 ${\mu}M$ $CdCl_2$ for 24 hr. The effect of ABO on $CdCl_2$-induced cytotoxicity in HK-2 cells was investigated by using MTT assay, morphological observation, flow cytometric analysis and Western blot. The results of the MTT assay and morphological observation indicated that $CdCl_2$-induced cytotoxicity was prevented by pretreatment with ABO. In flow cytometric analysis, ABO reduced sub-G1 peak (apoptotic peak) in $CdCl_2$-treated cells. $CdCl_2$-induced procaspase-3 proteolysis and PARP cleavage reduced by pretreatment with ABO. These results suggest that ABO effectively inhibited $CdCl_2$-induced cytotoxicity in HK-2 cells.

원유로 오염된 지역으로부터 분리한 생물계면활성제 생산균주, Pseudoalteromonas sp. HK-3의 특성조사 (Characterization of the Biosurfactant-Producing Bacterium, Pseudoalteromonas sp. HK-3 Isolated from the Crude-Oil Contaminated Areas)

  • 조수희;오계헌
    • 미생물학회지
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    • 제46권4호
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    • pp.346-351
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    • 2010
  • 본 연구의 목적은 원유에 오염된 지역의 토양시료로부터 분리한 생물계면활성제 생산균주의 특성을 조사하기 위하여 실시하였다. 1% 원유를 포함하는 배지에서 균주 HK-3의 배양기간 동안, 생장, 생물계면활성제의 생산, pH의 변화 등을 조사하였다. 생물계면활성제의 생산능력이 뛰어난 균주인 HK-3를 선별하여, 이 균주의 배양기간에 따른 생장 변화와 생물계면활성제의 생산량, 그리고 pH에 대하여 관찰하였다. HK-3는 배양 36시간이 경과하였을 때, 가장 많은 양의 생물계면활성제를 생산하였다. 생물계면활성제 생산에 대한 부가탄소원의 효과를 알아보기 위하여 HK-3를 다른 부가탄소원(예, glucose, dextrose, mannitol, citrate, acetate)과 함께 배지에서 배양하였다. 그 결과, 생물계면활성제의 최대생산량은 mannitol을 포함하는 BH 고체평판배지에서 관찰되었으며, 투명대의 면적은 직경은 약 7.64 cm2로 측정되었다. 분리균주의 생리학적 및 생화학적 특성을 조사하였으며, 주사전자현미경을 통하여 불규칙한 막대형의 세균으로 관찰되었다. BIOLOG 시스템과 16S rRNA 염기서열을 이용한 계통유전학적 분석을 통하여 동정하여 Pseudoalteromons 종으로 확인되어 Pseudoalteromons sp. HK-3로 명명하였으며, GenBank에 [FJ477041]로 등록하였다.

폭약 TNT를 분해하는 세균인 Pseudomonas SP. HK-6에서 분리정제된 Nitroreductase의 특성연구 (Characterization of Nitroreductase Purified from TNT-degrading Bacterium, Pseudomonas sp. HK-6.)

  • 호은미;강형일;오계헌
    • 한국미생물·생명공학회지
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    • 제32권3호
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    • pp.230-237
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    • 2004
  • 균주 Pseudomonas sp. HK-6로부터 2,4,6-trinitrotoluene (TNT)의 대사 과정에서 유도되는 nitroreductase (NTR)를 분리 및 정제하여 다양한 특성조사를 실시하였다. NTR은 균주 HK-6의 세포추출물로부터 ammonium sulfate 침전, DEAE-sepharose, 그리고 Q-sepharose chromatography의 일련의 과정을 통하여 분리되었고, NTR의 활성을 가지는 세개의 다른 fractions를 확인하였다. 균주 HK-6의 NTR fractions I, II, 그리고 III의 비 활성은 각각 4.85 unit/mg, 5.47 unit/mg, 5.01 unit/mg으로 측정되었으며, 세포추출물에 비해 각각 9.0배, 10.1배, 9.3배 농축된 것으로 나타났다. SDS-PAGE에서 측정된 균주 HK-6의 NTR fractions I, II 그리고 III의 분자량은 모두 약 27 kDa으로 확인되었다. 정제된 NTR의 활성에 온도, pH, 금속 이온, 억제 물질의 효과와 기질 특이성 등에 대한 물리화학적 특성 조사를 실시하였다. 균주 HK-6의 NTR fractions I, II, 그리고 III의 적정온도는 $25~35^{\circ}C$ 확인되었고, 모두 $30^{\circ}C$에서 최대 활성을 나타내었으며, 이들 효소 활성의 적정 pH는 7.0~8.0이었고, 최적 pH는 7.5로 확인되었다. TNT에 대한 HK-6의 NTR fractions I, II, 그리고 III의 활성은 금속 이온 $Ag^{+}$ , $Cu^{2+}$ , 그리고 $Hg^{V}$ 에 의해서 약 70%이상 저해되었으며, $Mn^{2+}$ 또는 $Ca^{2+}$ 에 의해서 약 20~50%로 활성이 억제되었다. 그러나 $Fe^{2+}$ /첨가 시에는 효소의 활성에 크게 영향을 미치지 않는 것으로 나타났다. NTR의 활성에 대한 억제물질의 영향은 $\beta$-mercaptoethanol 첨가 시에 효소의 활성이 모두 억제되었고, dithiothreitol, EDTA, 그리고 NaCl 첨가시에도 활성이 감소하는 것으로 확인되었다. TNT와 그 유사기질을 이용하여 HK-6에서 분리된 NTR의 기질 특이성을 조사한 결과, TNT, nitrobenzene, 그리고 RDX에 대해서는 비교적 활성이 높게 나타났으나 2,6-DNT와 2,4-DNT에서는 낮은 활성을 나타내는 것으로 확인되었다.