This experiment was carried out to investigate the extender, cooling rate and concentration of glycerol for freezing of boar semen. The result obtained were summarized as follows: 1. Optimal cooling rate was $0.17\~022^{\circ}C/min$ from 25 to $5^{\circ}C$ in LEY extender on the viability and normal acrosome after thawed. 2. The LEY extender was effective in protecting frozen boar semen from cold shock among the extenders(p<0.001, respectively). 3. The sperm viability and normal acrosome rates after thawing was showed greater in the 3 or $4\%$ of glycerol concentration than $2\%$ in LEY extender. 4. Viability of sperm was higher when both 15mM of fructose and 3 or $4\%$ glycerol were added to the LEY extender compared with other concentrations of fructose and glycerol were added it(p<0.001).
This study was carried out to establish most suitable freezing condition, to evaluate the different glycerol concentration of freezing and thawing rates on motility, viability, membrane integrity and acrosome intecrity of frozen Korean Jeju Black Bull spermatozoa, Semen was collected from a Korean Jeju Black Bull using an artificial vagina and transported to the laboratory. The semen was extended gradually 1:5 then cooled slowly for 2 hrs to 4$^{\circ}C$. The semen was diluted 1:1 with cryoprotectant extenders (3%, 5% and 7% glycerol) and equilibrated for 2 hrs at cold chamber and packed to 0.5 ml straws. The semen straws were located above 3 cm of liquid nitrogen for 5 minutes, above 5 cm for 10 min and above 8 cm for 10 min. And then the frozen straw was plunged into LN$_2$. The presented straws were examined the viability and motility after thawed at 37$^{\circ}C$ water bath. The viability and membrane integrity immediately post-thawing were significantly higher in samples frozen in 7% glycerol than 3% and 5% glycerol (p<0.05). After CTC staining to assess acrosome integrity, F pattern was significantly increased, but B pattern was significantly decreased in 7% glycerol (p<0.05). Freezing distance of 5 cm from liquid nitrogen and pre-cooling for 10 min yield better survival and membrane integrity, but not significant difference. However, AR pattern according to CTC staining was significantly decreased in 3 cm for 5 min.
Sardine oil was vacuum-steam deodorized at $170^{\circ}C$ with acid (acetic and citric acid) and ethanol solution as steam sources. Glycerol was added to fish oil to remove volatile odorous constituents. The storage stability of deodorized fish oil was determined by totox value, secondary parameter obtained from peroxide and anisidine values. Both deodorization with acetic acid solution and addition of glycerol to the oil resulted in improved storage stability. The totox values of fish oil deodorized with water, glycerol+water and glycerol+acetic acid solution were 936, 611, and 443, respectively after 10 days at $30^{\circ}C$. The result showed that acetic acid seemed to destroy the odorous constituents and glycerol accelerated the removal of odorous constituents, such as amines in fish oil.
Ko, Gyeong Soo;Nguyen, Quyet Thang;Kim, Do Hyeon;Yang, Jin Kuk
Journal of Microbiology and Biotechnology
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v.30
no.2
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pp.271-278
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2020
Glycerol dehydrogenase (GlyDH) catalyzes the oxidation of glycerol to dihydroxyacetone (DHA), which is the first step in the glycerol metabolism pathway. GlyDH has attracted great interest for its potential industrial applications, since DHA is a precursor for the synthesis of many commercially valuable chemicals and various drugs. In this study, GlyDH from Klebsiella pneumoniae (KpGlyDH) was overexpressed in E. coli and purified to homogeneity for biochemical and molecular characterization. KpGlyDH exhibits an exclusive preference for NAD+ over NADP+. The enzymatic activity of KpGlyDH is maximal at pH 8.6 and pH 10.0. Of the three common polyol substrates, KpGlyDH showed the highest kcat/Km value for glycerol, which is three times higher than for racemic 2,3-butanediol and 32 times higher than for ethylene glycol. The kcat value for glycerol oxidation is notably high at 87.1 ± 11.3 sec-1. KpGlyDH was shown to exist in an equilibrium between two different oligomeric states, octamer and hexadecamer, by size-exclusion chromatography analysis. KpGlyDH is structurally thermostable, with a Tm of 83.4℃, in thermal denaturation experiment using circular dichroism spectroscopy. The biochemical and biophysical characteristics of KpGlyDH revealed in this study should provide the basis for future research on its glycerol metabolism and possible use in industrial applications.
Ricci, Maria Antonietta;Russo, Annamaria;Pisano, Isabella;Palmieri, Luigi;de Angelis, Maria;Agrimi, Gennaro
Journal of Microbiology and Biotechnology
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v.25
no.6
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pp.893-902
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2015
Various Lactobacillus reuteri strains were screened for the ability to convert glycerol to 1,3-propanediol (1,3-PDO) in a glycerol-glucose co-fermentation. Only L. reuteri DSM 20016, a well-known probiotic, was able to efficiently carry out this bioconversion. Several process strategies were employed to improve this process. Co2+ addition to the fermentation medium, led to a high product titer (46 g/l) of 1,3-PDO and to improved biomass synthesis. L. reuteri DSM 20016 produced also ca. 3 µg/g of cell dry weight of vitamin B12, conferring an economic value to the biomass produced in the process. Incidentally, we found that L. reuteri displays the highest resistance to Co2+ ions ever reported for a microorganism. Two waste materials (crude glycerol from biodiesel industry and spruce hydrolysate from paper industry) alone or in combination were used as feedstocks for the production of 1,3-PDO by L. reuteri DSM 20016. Crude glycerol was efficiently converted into 1,3-PDO although with a lower titer than pure glycerol (33.3 vs. 40.7 g/l). Compared with the fermentation carried out with pure substrates, the 1,3-PDO produced was significantly lower (40.7 vs. 24.2 g/l) using cellulosic hydrolysate and crude glycerol, but strong increases of the maximal biomass produced (2.9 vs 4.3 g/l CDW) and of the glucose consumption rate were found. The results of this study lay the foundation for further investigations to exploit the biotechnological potential of L. reuteri DSM 20016 to produce 1,3-PDO and vitamin B12 using industry byproducts.
The enzymatic interesterification was performed to produce structured lipids (SLs) with palm mid fraction (PMF) and stearic ethyl ester (STEE) for 1, 3, 6, 9, 12 and 15 hr at $80^{\circ}C$. The reaction was catalyzed by Lipozyme TLIM (immobilized lipase from Thermomyces lanuginosus, amount of 20% by weight of total substrates) in a shaking water bath set at 180 rpm. The optimum condition for synthesis of asymmetric SLs were: substrate molar ratio 1:0.5 (PMF:STEE, by weight), reaction time 6 hr, enzyme 20% (wt%, water activity=0.085) of total substrate and reaction temperature $80^{\circ}C$. After reaction at optimized condition, triacylglycerols (symmetrical and asymmetrical TAGs) from reactants were isolated. POP/PPO (1,3-palmitoyl-2-oleoyl glycerol or 1,2-palmitoyl-3-oleoyl glycerol), POS/PSO (palmitoyl-oleoyl-stearoyl glycerol or palmitoyl-stearoyl-oleoyl glycerol), SOS/SSO (1,3-stearoyl-2-oleoyl glycerol or 1,2-stearoyl-3-oleoyl glycerol) were obtained by solvent fractionation. Finally, refined SLs contained stearic acid of 16.91%. Solid fat index and thermogram of the refined SLs were obtained using differential scanning calorimetry. The degree of asymmetric triacylglycerol in the refined SLs was analyzed by Ag-HPLC equipped with evaporated light scattering detector (ELSD). The refined SLs consisted of symmetric TAG of 41.15 area% and asymmetric TAG of 58.85 area%.
Studies were carried out to find the freezing media which gives no ice crystals in single(glycerol, ethylene glycol, dimethyl sulfoxide(DMSO)) and mixture solutions(glycerol+propylene glycol, glycerol+ethylene glycol) of permeable cryoprotectants in vitrification solution and to study effects of VS on the survival of vitrified mouse morulae. The results are summarized as follows: 1. In toxicity test of permeable cryoprotectants, 30% glycerol of single solution showed the highest FDA-score(4.1) in mouse morulae frozen compared among other single solutions. The FDA-score(4.1) of 30% glycerol was higher than 30% ethylene glycol(3.6) and DMSO(1.4( (P<0.05). 2. 20, 30 or 40% single solution of permeable cryoprotectants containing m-PBS with 10% sucrose and 20% BSA was not crystallized during cooling, but crystallized during warming. However, the 30% mixture solution of the two permeable cryoprotectants was not crystallized both during cooling and warming.3. When mouse morulae were frozen in 30% mixture solutions of two permeable cryoprotectants(glycerol and propylene glycol, glycerol and ethylene glycol), highest FDA-score(4.5) was obtained in a mixture solution of 20% glycerol and 10% ethylene glycol(20G10E) than other 30% mixture solutions(10G20E, 15G15E, 20G10P, 15G15P, 10G20P) and there was significant difference between 20G10E and 10G20E(P<0.05).
Kim, Dong Won;Moon, Myung Joon;Ryu, Young Bok;Lee, Man Sig;Hong, Seong-Soo
Clean Technology
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v.20
no.1
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pp.7-12
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2014
Hydrogenolysis of glycerol to propylene glycol was performed over binary and ternary metal oxide catalysts. The conversion of glycerol and selectivity to propylene glycol were increased on Cu/Zn and Cu/Cr mixed oxides compared to pure CuO and ZnO oxides. The addition of alumina into Cu/Zn mixed oxide very highly increased the conversion of glycerol and selectivity to propylene glycol. The conversion of glycerol was increased with increasing the reaction temperature but the selectivity to propylene glycol was shown to have maximum value at $200^{\circ}C$ and then decreased at $250^{\circ}C$. The conversion of glycerol and selectivity to propylene glycol were decreased with increasing the glycerol concentration.
Choi, Han Na;Lee, Tae Sang;Yang, Ji Woo;Lee, Seung Goo
Journal of Adhesion and Interface
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v.12
no.2
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pp.73-80
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2011
In order to develop the environmental-friendly new materials based on soybean protein which is plantable macromolecule, thermal characteristics of the soybean protein resin (SPI) modified by plasticizers (1,3-propandiol, glycerol) and cross linking agents (glutaraldehyde, epichlorohydrin, glyoxal, urea) were analyzed by TGA. Mechanical properties of modified SPI were investigated and fracture was observed by SEM. As the result, flexibility of SPI film was increased by adding plasticizers; 1,3-propandiol and glycerol. Plasticization effect of glycerol was relatively greater than that of 1,3-propandiol. With the application of crosslinking agents (glycerol, epichlorohydrin and glyoxal), strength and thermal stability of SPI increased with their content. On the other hand, in case of addition of urea, thermal stability of SPI decreased and its strength was reduced because cross-linking between urea and SPI was somewhat difficult. Fracture surfaces and domain interfaces of the modified SPI resins were observed with SEM.
Glycerol dehydrogenases (GlyDHs) are essential for glycerol metabolism in vivo, catalyzing its reversible reduction to 1,3-dihydroxypropranone (DHA). The gldA gene encoding a putative GlyDH was cloned from Thermoanaerobacterium thermosaccharolyticum DSM 571 (TtGlyDH) and expressed in Escherichia coli. The presence of Mn2+ enhanced its enzymatic activity by 79.5%. Three highly conserved residues (Asp171, His254, and His271) in TtGlyDH were associated with metal ion binding. Based on an investigation of glycerol oxidation and DHA reduction, TtGlyDH showed maximum activity towards glycerol at 60℃ and pH 8.0 and towards DHA at 60℃ and pH 6.0. DHA reduction was the dominant reaction, with a lower Km(DHA) of 1.08 ± 0.13 mM and Vmax of 0.0053 ± 0.0001 mM/s, compared with glycerol oxidation, with a Km(glycerol) of 30.29 ± 3.42 mM and Vmax of 0.042 ± 0.002 mM/s. TtGlyDH had an apparent activation energy of 312.94 kJ/mol. The recombinant TtGlyDH was thermostable, maintaining 65% of its activity after a 2-h incubation at 60℃. Molecular modeling and site-directed mutagenesis analyses demonstrated that TtGlyDH had an atypical dinucleotide binding motif (GGG motif) and a basic residue Arg43, both related to dinucleotide binding.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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