동면기 양서류 피부 색소세포의 미세구조를 관찰하기 위하여 무미 양서류인 개구리 (Rana nigromaculata)의 피부조직을 2.5% glutaradehyde-paraformaldehye (pH 7.2)와 2% osmium tetroxide에 전후 고정한 후 ethanol과 acetone으로 탈수, Epon 812 mixture에 포매하여 LKB ultramicrotome으로 초박절 표본을 만들어 uranyl acetate와 lead citrate로 염색하여 Jeol-100B형 전자현미경으로 관찰하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 동면기 개구리의 피부 색소세포는 대황세포, iridophore 및 흑색소 보유세포로 구성되었으며, 이들 세포의 특징은 다음과 같다. 1. 대황세포 A. 대황세포는 pterinosome과 carotinoid vesicles이 전세포질에 채워져 있었으며, 많은 ribosome과 소수의 mitochondria 및 glycogen particle이 pterinosome 사이에 분산되었다. B. Pterinosome은 크고 작은 원형 또는 타원형이며, 이 소낭속의 내부 구조물에 EK라 6가지 형 (제1형 pterinosome, 제2형 pterinosome, 제3형 pterinosome, 제4형 pterinosome, 제5형 pterinosome, 제6형 pterinosome)으로 구분되며, 특히 제1형 pterinosome, 제2형 pterinosome, 제3형 pterinosome이 발달되었따. C. Carotinoid vesicle은 작은 원형 또는 타원형이며, 대부분의 carotinoid vesicle은 핵 주변부에 덩어리 모양으로 모여있고, 일부분은 이 세포의 pterinosome 사이에 분산되어 나타났다. 2. Iridophore A. Iridophore는 볼록렌즈와 같이 나타나고 좁은 세포간 공간에 의하여, 대황세포 아래에 위치하였다. B. Iridophore는 장방형 EH는 방추형의 reflective platelet로 채워져 있었으며, 서로 평행하게 규칙적으로 배열되었다. 3. 흑색소 보유세포 A. 흑색소 보유세포는 대황세포와 iridophore와 평행하여 가장 밑부분에 위치하였다. B. 흑색소 과립은 원형 또는 타원형으로 전세포질에 채워져 있었으며, 세포 소기관은 잘 관찰되지 않았다. C. 흑색소 과립으로 채워진 흑색소 보유세포의 돌기는 iridophore의 양 측부로 \ulcorner어 올라가 대황세포와 iridophore의 사이에 위치하였다.
For evaluation of immune stimulation effect of lacquer tree extracts, lymphocytes were counted by labeling of FITC-conjugated monoclonal antibody in the pheripheral blood of pigs that fed with a fodder supplemented by lacquer tree extracts. Populations of MHC-II+, CD4+, and CD8+T lymphocytes were increased more than 2% level after 1 week feed supply of the lacquer tree extracts. The increase of those T cells reached at maximum level after 2 weeks in the tested group. B lympyocytes with surface IgM were increased 5% after 1 week feed supply of the lacquer tree extracts, and their numbers reached maximum after 2 weeks in the tested group. For the assessment of cytotoxicity of the lacquer tree extracts, morphological changes were examined on the epithelial cells of small intestine from pigs fed with a fodder supplemented by 0.1 % lacquer tree extracts for 6 weeks (the tested group). Thin-sectioned tissue of small intestine was fixed with glutaraldehyde, then coated with gold particles, and the specimen was examined under scanning electron microscope. The villi on the mucus membrane of jejunum and ileum from the tested pigswere enlarged on the tip and were linked each other.
The present study investigated the effects of aging on Leydig cells of Sprague Dawley rats. Rats of 3, 6, 12 and 18 months of age were used. Testes of rat were fixed by whole body perfusion using a fixative containing 2.5% glutaraldehyde in cacodylate buffer, processed and embedded in epon-araldite. Using $1{\mu}m$ sections stained with methylene blue, qualitative and quantitative morphological studies were performed. Testis incubations were used to determine luteinizing hormone (LH; 100 ng/ml) stimulated testosterone secretory capacity per testis in vitro. Testosterone levels in the incubation medium, and testosterone and luteinizing hormone levels in serum of these four groups of rats were determined by radioimmunoassay. Morphological studies revealed that Leydig cells were more abundant in the testis interstitium at 6, 12 and 18 months when compared with 3 months. The volumes of Leydig cells per testis was significantly higher, at 6, 12 and 18 months of age than those at 3 months. The number of Leydig cells per testis was doubled at 6, 12 and 18 months of age compared with 3 months. The average volume of a Leydig cell was not significantly different between 3 and 6 months of age, however, at 12 and 18 months a significantly lower value was observed. LH-stimulated testosterone production per testis in vitro was reduced by 45% at 6 months of age compared with 3 months; a further significant reduction was observed at 12 and 18 months. Serum testosterone and LH levels were not significantly different between 3 and 6 months of age but at 12 and 18 months a significantly lower value was observed in both groups for these hormones. These results showed that signs of aging are apparent in Leydig cells of Sprague Dawley rats at 12 months of age.
표준형 이오네스큐우심낭판막의 일차성 조직실패상의 특징의 일부를 알아보고져 승모판위치에서 각 각 행콕판막을 적출하였던 56례와 표준형 이오네스큐판막을 적출하였던 연속적 전례인 일차성 조직실 패환자 113례를 대상으로 임상 및 병리학적으로 분석 검토하였다. 양 환자군의 수술당시의 연령은 각각 31.9$\pm$9.2세와 30.4$\pm$ 12.5세였다. 행콕판막은 조직손상으로 인 한 판막폐쇄부전이 빈발한 반면 이오네스큐판막은 석회화변성의 빈도가 높고 협착병변인 경향이 우세 하였다. 판막적출기간은 행콕판막에서보다 이오네스큐판막에서 단축되 었다. 이러한 판막실패의 특징은 판막구조설계의 개선으로 기계적 요소로 인한 판막실패를 감소할 수 있을 것으로 보이나 항광물화상의 개선 없이는 조직판막의 내구성의 개선은 곤난할 것임을 시사하였다.
The purpose of this study is to evaluate the phenomenon of attachment and spreading of the cultured rat calvarial cell inoculated on their surface of different kinds of biodegradable membrane which had been used on tissue regeneration on periodontal defects by using scanning electron microscope. In this experiment 30 Sprague-Dawley male rats (mean BW 150gm) were used to harvest abundant number of cell in the short period. The rats were sacrificed by decapitatioan to obtain the calvaria for bone cell culture. Calvarial cells were cultured with Dulbecco's Modified Essential Medium contained with 10% Fetal Bovine Serum under the conventional conditions. Biodegradable barrier membrane were collected with collagen type, and were divided into 3 different kind of surface such as scattered, polarized and fine-net type as their surface texture. Microcover plate which usually used for cell culture was used as control for smooth surface. All the membrane were seeded with cultured calvarial cell on their surface. The number of cell inoculated on the membrane were $1{\times}10^6$ Cells/ml. After the culture as designed time, all the membrane were washed with 0.1 M Phosphate Buffered saline and fuxed with 2.5% Glutaraldehyde. And all specimen were treated with $OsO_4$, and Tannic acid before drying the cell for coating the cell with gold. Scanning Electron Microscope was used to observation. The following results were obtained. I. During the whole period of experiment, the phenomenon of cell attachment and spreading were revealed similar pattern to compare with smooth surface culture plate and ordinary culture dish. 2. The shape of cell attachment and spreading on the surface of barrier membrane were observed no remarked difference pattern between smooth surface culture plate and ordinary culture dish. 3. The cytoplasmic process of cultured calvaria cell extent to the deep portion of barrier membrane like as their own proper shape. 4. There were no remarkable relationships between the degree of cultured cell spreading and surface structure of barrier membrane. 5. Slight starified layer of cultured calvaria cell were observed on the scattered type of resorbable membrane, Conclusively, this study thus suggest that cultured bone cell inoculated onto the biodegradable barrier membrane may have an important role of carrier for many cell which could be used as new tissue regeneration, and those tissue engeering technique may become an new method in the approach to the repair of bone defects.
The purpose of this study was to evaluate a new biodegradable membrane - atelocollagen as a guided tissue regeneration barrier on the dehiscence defects adjacent to the dental implants. 3 beagle dogs were selected for this study and all the mandibular premolars($P_1,P_2,P_3&P_4$) were extracted. Twelve weeks after the extraction, the edentulous ridges were formed to be placed the titanium plasma-sprayed IMZ implants. Four implant osteotomies were performed on each side of the mandible. The osteotomies were placed facially in the edentulous ridges to approximate an actual dehiscence defect as closely as possible, The standardized dehiscence defects were created 3 mm in width and 4 mm in height by osteotomy. A total 24 implants were placed. e-PTFE, ateloco11agen and $Collatape^{(R)}$ were placed to cover the defects and the one defect served as a control, not covered any membrane. By random selection, three dogs were sacrificed at 2 weeks, 4weeks and 8 weeks after fixation with 3% glutaraldehyde. A week before sacrificing, 8-week dog was infused intravenously with oxy-tetracycline 30mg/kg. The left mandibular blocks were used for full decalcified histologic preparation and the right mandibular blocks were selected for undeca1cified preparation, At 2 weeks, the regenerated bone of e-PTFE and atelocollagen groups appeared to be more dense than other groups and the percentage of bone defect fill was highest for e-PTFE and follwed by ateloco1lagen group. However, the $Collatape^{(R)}$ and control groups showed a little new bone formation. $Collatape^{(R)}$ was almost degraded within 2 weeks. At 4 weeks, the regenerated new bone were much greater and denser than at 2 weeks for e-PTFE and ateloco11agen group. Although a part of atelocollagen bagan to be degraded at the margin and surrounded by foreign body giant cells related to foreign body reaction, it was generally intact and the regenerated new bone was shown much more than at 2 weeks. The amount of new bone in $Collatape^{(R)}$ and control groups at 4 weeks were similar to that of 2 weeks group. At 8 weeks, the regenerated bone was matured and observed along the implant fixture. Direct new bone formation and calcium deposits beneath the e-PTFE were observed. No further bone growth was seen in the $Collatape^{(R)}$ and control groups. In reflected fluoromicrcocopic observation, the osteogenic activity was pronounced between e-PTFE membrane and the old bone. High osteogenic activity was also observed in atelocol1agen group. This study suggested that the ateloco11agen as well as e-PTFE could be used for guided tissue regeneration on dehiscence defects adjacent to the dental implants. But the $Collatape^{(R)}$ was completely resorbed within 2 weeks and was not a suitable membrane for guided bone regeneration.
Morphological difference of the renal glomerulus at different age groups have been studied in young (three month-old), adult (twelve month-old) and old (thirty month-old) Fisher strain 344 rats. Pieces of the tissues were taken from renal corticies prefixed with 2.5% glutaraldehyde-1.5% paraformaldehyde (0.1 M Millonig's phosphate buffer, pH 7.3), following by post-fixation with 1% osmium tetroxide (0.1 M Millonig's phosphate buffer, pH 7.3) and embedded within Araldite. The ultrathin sections contrasted with uranyl acetate and lead citrate were observed under a JEM 100CX electron microscope. The mean thickness of glomerular basal lamina and Bowman's capsule were determined by measuring the thinnest portion of basal lamina, and by taking the average of 50 readings from electron micrographs at different ages. The numerical changes of the slit pores were compared based upon the numbers over the length of 10um of glomerular basal lamina. The results were as follow: 1. The thickness of glomerular basal lamina is increased during aging; 140.4 nm in young rats, 270.0 nm in adult ones, and 437.8 nm in old ones. 2. The thickness of basal lamina of parietal cells of Bowman's capsule is 187.5 nm in young rats, 914.0 nm in adult ones, and 2850.0 nm in old ones. 3. The numbers of the slit pores of basal lamina are reduced during aging, 30.3 slit pores/$10{\mu}m$ in adult ones, and 24.2 slit pores/$10{\mu}m$ in old ones. 4. Accumulation of dense intracytoplasmic filamentous material in the parietal cells of Bowman's capsule is increased in the vicinity of the basal lamina during aging. The proximal tubule-like epithelial cell in Bowman's capsule is observed at one glomerulus in a young rat. 5. The endothelial cells are edematous and form balloon-like structure protruding into capillary lumen in young and old rats. 6. Cytoplasm of the podocyte shows a variety of alteration during aging, such as swelling of mitochondria and of endoplasmic reticulum, and increase of microtubules, microfilaments, lysosomes and lamellated myelin structures, etc. Accumulation of dense intracytoplasmic material in the foot processes is increased in the vicinity of the basal lamina during aging. The podocytic membrane-like structures are seen in young and o]d rats. 7. The mesangial matrices and mesangial cells are increased during aging, and slight swelling of endoplasmic reticulum and Golgi cisternae in young and old rats.
In order to discriminate the enteroendocrine cell types in the mucosal epithelium of the normal duodenum of the Korean hedgehog (Erinaceus koreanus). The tissues were fixed in the mixture of 1% paraformaldehyde and 1% glutaraldehyde in phosphate buffer (pH 7.2), and postfixed in 2% osmium tetroxide (phosphate buffer, pH 7.2). They were embedded in Araldite, and the ultrathin sections were made by LKB-V ultratome following the inspection of semithin sections stained with toluidine blue-borax solutions. Ultrathin sections contrasted with uranyl acetate and lead citrate were observed with JEM 100B electron microscope. At least six types of enteroendocrine cells distributed in the mucosal epithelium of the duodenum were identified according to their morphological characteristics mainly based on the size, shape, number and electron density of the secretory granules. Type I cells had moderately developed organelles. The secretory granules were pleomorphic ($370X510nm$), and the granule cores with high electron density were enveloped in limiting membrane and characterized by a narrow halo. Type II cells contained an indented nucleus and well-developed organelles. The secretory granules were round (350 nm) and classified in two kinds by electron density, moderate and high. Both granules were surrounded by limiting membrane and those with high electron density showed often a wide halo. Type III cells had an indented nucleus. The secretory granules with various electron density were round (220 nm) in shape. The granules with high electron density were enveloped in limiting membrane and characterized by a narrow halo, but those with low or moderate electron density had not been observed the limiting membrane. Type IV cells contained an indented nucleus and moderately developed organelles. The secretory granules were round (180 nm) in shape, and the granule cores with high electron density were enveloped in limiting membrane and showed often a wide halo. Type V cells had a large amount of rough endoplasmic reticulum. Secretory granules with low or moderate electron density were round (230 nm) in shape, and surrounded by limiting membrane and showed a narrow halo. Type VI cells contained an oval nucleus and well-developed organelles, especially Golgi complex. The secretory granules with high electron density were round (210 nm) in shape. The granules were enveloped in limiting membrane and showed often a wide halo.
폴리우레탄(PU)과 폴리비닐알콜(PVA)의 고분자 블렌드를 제조하고 피브리노겐 흡착, 혈장 재칼슘화 시간, 혈소판 점착, 전혈 응고실험, 보체 활성도 측정 등의 방법을 이용하여 혈액적 합성을 평가하였다. 또한 PU/PVA 고분자 블렌드에서 PVA 분자의 운동성이 혈액적합성에 미치는 영향을 조사하기 위하여 PVA를 글루타알데히드를 이용하여 가교시킨 후, 혈액적합성을 조사하였다. PU/PVA 고분자 블렌드에서의 피브리노겐 흡착은 블렌드내의 PVA 양이 증가할수록 감소하였으며, 10-50wt%의 PVA를 포함한 고분자 블렌드에서의 혈장 재칼슘화 시간은 PU, PVA 및 PVA 함량이 높은 고분자 블렌드들에 비해서 길게 나타났다. 또한 30-50 wt%의 PVA를 포함한 블렌드에서 혈소판 형태 변화와 점착량이 가장 적었으며 혈액응고와 보체 활성도도 가장 낮았다. 한편 가교된 고분자 블렌드의 혈액적합성은 가교되지 않은 것에 비하여 현저하게 저하되었다. 이와같은 결과로부터 PVA가 30-50 wt% 포함된 고분자 블렌드에서의 혈액적합성이 다른 것에 비하여 상대적으로 우수함이 고찰되었고, PVA 가교실험의 결과에 의하면 고분자 블렌드에서의 혈액적합성은 재료 표면에 노출된 PVA 분자들의 운동성과 연관이 있는 것으로 사료된다.
여러 가지 장점이 있음에도 일정성이 유지되지 않는 다는 단점이 있는 마이크로파 고정 효과를 "저에너지 마이크로파"를 사용하여 보완하고자 하였다. 이를 위해 사람 위선암(gastric adenocarcinoma)을 저 에너지 마이크로파(low energy of microwave, LEM)로 고정하여 미세구조와 항원-항체반응 수준에서 그 효과를 관찰하고자 하였다. LEM으로 고정한 시료에서 항원-항체반응은 monoclonal 생쥐-항-사람-p53 (IgG2b, kappa)과 토끼-항-사람-c-erbB-2로 처리하여 결과를 냉동 절편과 비교하였다. 암세포 특이 항원은 LEM으로 처리한 시료에서 발색반응 산물의 확산이 적은 것으로 관찰되었고 보다 쉽게 인지될 수 있었다. LEM으로 고정한 위선암 조직의 미세구조는 보존된 것으로 보였으나 그 고정효과는 2차 원인에 의해 손상되는 것으로 보였으므로 이를 보상하기 위해서 LEM 고정 후 저농도 화학 고정액으로 재차 처리하여 다소의 일정성을 유지할 수 있었으나 위선암 조직은 더 낮은 마이크로파 에너지 요구성이 있는 것으로 생각할 수 있었다. 따라서 암세포가 요구하는 "최소 마이크로파 요구 범위"를 밝히기 위해서 배양 HeLa 세포를 더 낮은 에너지의 마이크로파와 저농도 화학고정액으로 처리한 결과 HeLa세포 미세구조가 보존되는 등 비교적 좋은 효과를 볼 수 있었다. 이 결과로 보면 LEM 조사(照射)로서 생체 저분자 및 수용성 단백질이 crosslink되는 효과가 있는 것으로 보았고 이를 저농도 화학 고정액으로 재차 고정하는 방법으로서 미세구조 및 항원성 보존 효과가 있는 것으로 사료되었으므로 이에 대하여 논의하고자 하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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