대한약학회 2002년도 Proceedings of the Convention of the Pharmaceutical Society of Korea Vol.2
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pp.426.3-427
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2002
The aim of this study was to enhance the transfection efficiency of emulsion-mediated gene expression by using chitosan, Conventional DNA/emulsion complexes and precondensed DNA/emulsion complexes were prepared by adding either naked or precondensed plasmids to cationic emulsion. The zeta potential. TEM, and size of transfection complexes were measured. In vitro transfection efficiency for boty complexes was also studied by several methods: flow cytometer, expression analysis by confocal microscope, RT-PCR, and in addition. (omitted)
In this paper, we present details on fabrication of single-cell electroporation microdevice, practical experiments of single-cell electroporation with our fabricated microdevice. Also, the continuous electroporation for the continuous flow of cells is used for high-throughput electroporation. The delivery efficiency and cell viability tests are provided and the successful GFP transfection into cells is also evaluated with a fluorescent microscope after electroporation. This device enables to reduce the size of samples and thus the use of small amount of reagents. Also, it makes it possible to permit to avoid cell discrimination (transfected cells versus non-transfected cells) encountered when traditional bulk electroporation is held.
Seo, Jin-Wook;Jeong, Jae-Hun;Han, Sung-Tai;Lee, Hak-Sung;Choi, Yong-Eui;Shin, Cha-Gyun
대한약학회:학술대회논문집
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대한약학회 2003년도 Proceedings of the Convention of the Pharmaceutical Society of Korea Vol.2-2
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pp.145.3-146
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2003
Transgenic Eleutherococcus senticosus plants were prepared by introducing the genes for squalene synthase (SQS), hygromycin phosphotransferase (HPT) and green fluorescent Protein (GFP) through Agrobacterium-mediated transformation. The enzyme, SQS, represents a putative branch point in the isoprenoid pathway capable of diverting carbon flow specifically to the biosynthesis of phytosterol and oleanolic acid. The full SQS gene was isolated from P. ginseng roots. Early globular embryo clusters developed from embryogenic callus were used as the explant source. (omitted)
Cellular resources including transcriptional and translational machineries in bacteria are limited, yet microorganisms depend upon them to maximize cellular fitness. Bacteria have evolved strategies for using resources economically. Regulatory networks for the gene expression system enable the cell to synthesize proteins only when necessary. At the same time, regulatory interactions enable the cell to limit losses when the system cannot make a cellular profit due to fake substrates. Also, the architecture of the gene expression flow can be advantageous for clustering functionally related products, thus resulting in effective interactions among molecules. In addition, cellular systems modulate the investment of proteomes, depending upon nutrient qualities, and fast-growing cells spend more resources on the synthesis of ribosomes, whereas nonribosomal proteins are synthesized in nutrient-limited conditions. A deeper understanding of cellular mechanisms underlying the optimal allocation of cellular resources can be used for biotechnological purposes, such as designing complex genetic circuits and constructing microbial cell factories.
GM작물은 세계적으로 재배면적이 지속적인 증가되고 있으며, 이로 인한 GM작물의 잠재적인 환경위해성에 대한 우려도 증가되고 있다. 현재까지 국내에서 GM작물의 상업적 재배는 되고 있진 않지만 GM작물의 안전성 평가를 위한 기술 개발은 크게 요구되고 있는 실정이다. 국내외적으로 다양한 GM작물의 유전자이동성 평가가 수행되어왔으나 화분 공급원인 GM벼의 개화기 차이에 의한 유전자 이동성 연구는 부족한 실정이다. 본 연구에서는 벼의 개화기 차이에 따른 비타민A 강화벼(PAC)로부터 모품종인 낙동벼와 중만생종인 일미벼, 조생종인 운광벼, 중생종인 대보벼, 통일형인 세계진미벼로의 화분매개에 의한 유전자 이동성을 평가하였다. 비타민A 강화벼(PAC)의 도입 유전자를 검출하는 PCR 분석을 통해 유전자 이동성 유무를 최종적으로 검증하였다. 총 파종된 종자수에 대한 교잡율은 개화기가 일치하는 낙동벼에서는 0.0007%, 개화기가 차이가 있는 일미벼, 운광벼, 대보벼, 세계진미벼에서는 0%로 나타났으며, 모든 교잡개체들은 비타민A 강화벼(PAC)에 근접한 2m 내에서 발견되었다. 화분 매개에 의한 비타민A 강화벼(PAC)의 유전자 이동 특성은 기존에 연구된 결과들과 비슷한 결과를 보였으며, 벼 재배품종간의 개화기 차이가 화분에 의한 교잡을 결정하는데 중요한 요인으로 작용하였다. 이에 벼 경작지의 기상 조건과 벼 품종간의 개화시기 중복 여부 등이 GM벼에 의한 일반 재배품종 및 잡초성벼로의 유전자 이동 최소화 기술 개발과 안전관리 기준 작성에서 주요 영향 요소들로 고려해야 한다.
멸치의 유전적 집단구조 및 지리적 거리를 조사하기 위하여 한국근해 및 외해역 12개 정점에서 채집된 멸치의 미토콘드리아 DNA control 부위를 대상으로 염기서열을 상호 비교 및 분석했다. 염기서열 분석결과 89개체 중 29 haplotype이 나타났고, 상호 염기치환율은 0-3.5% 차이를 보였다. E9 haplotype이 근해 및 외해역에서 가장 넓게 분포하고 있는 것으로 나타났다 (58.3%). 반면에, E26, E27, E28, E29 haplotype 들은 서남해역 (정점 10)에서만 보였다. PHYLIP 프로그램을 이용한 유전적 관계에서도 두개의 clade로 분리되었다. E26, E27, E28, E29 haplotype을 제외한 나머지 haplotype 들은 상호 잘 유지되는 것으로 나타났다 (bootstrap 75% 이상). 그러나 clade A와 B bootstrap은 매우 약하게 나타났다 (51%). haplotype 간의 상호분석 결과 다양도는 0.75-1.00, 염기다양도는 0.015-0.0244로 보였다.
본 연구는 유채의 화분이동으로 근연종 갓과의 교잡을 통해 형성된 교잡종의 발아휴면특성과 월하 및 월동성을 평가하여 교잡종의 잡초화 가능성을 예측하고자 본 연구를 수행하였다. 교잡종은 부본인 유채와 모본인 갓에 비해 전반적인 발아특성이 갓에 근접한 중간적인 특성을 보여주었으며, 휴면성도 41.1%로 갓에 근접한 높은 휴면성을 보여주었다. 수확 직후 종자를 토양에 매립하여 월하특성을 평가한 결과 표토보다는 3 cm 토심에서 월등히 높은 월하특성을 보여주었으며, 월하기간과 상관없이 3 cm 토심조건에서 부본인 유채에 비해 매우 높고 모본인 갓에 비해 약간 높은 월하특성을 보여주었다. 반면 종자의 월동특성은 월하특성과 반대로 표토조건에서 교잡종이 부모종보다 높은 월동성을 가지는 것으로 확인되었다. 따라서 유채-갓 교잡종은 휴면성이 비교적 높고 월하 및 월동성이 높아 잡초화 가능성이 있음을 시사한다. 유채-갓 교잡종의 보다 명확한 잡초화 가능성 평가를 위해서는 교잡종의 종자생산 가능성 및 자연 생태계 적응성 여부에 대한 추가적인 연구가 필요하다.
Objective: This study aimed to develop loop-mediated isothermal amplification (LAMP) combined with lateral flow dipstick (LFD) and compare it with LAMP-AGE, polymerase chain reaction (PCR), and standard Salmonella culture as reference methods for detecting Salmonella contamination in animal products and animal production environmental samples. Methods: The SalInvA01 primer, derived from the InvA gene and designed as a new probe for LFD detection, was used in developing this study. Adjusting for optimal conditions by temperature, time, and reagent concentration includes evaluating the specificity and limit of detection. The sampling of 120 animal product samples and 350 animal production environmental samples was determined by LAMP-LFD, comparing LAMP-AGE, PCR, and the culture method. Results: Salmonella was amplified using optimal conditions for the LAMP reaction and a DNA probe for LFD at 63℃ for 60 minutes. The specificity test revealed no cross-reactivity with other microorganisms. The limit of detection of LAMP-LFD in pure culture was 3×102 CFU/mL (6 CFU/reaction) and 9.01 pg/μL in genomic DNA. The limit of detection of the LAMP-LFD using artificially inoculated in minced chicken samples with 5 hours of pre-enrichment was 3.4×104 CFU/mL (680 CFU/reaction). For 120 animal product samples, Salmonella was detected by the culture method, LAMP-LFD, LAMP-AGE, and PCR in 10/120 (8.3%). In three hundred fifty animal production environmental samples, Salmonella was detected in 91/350 (26%) by the culture method, equivalent to the detection rates of LAMP-LFD and LAMP-AGE, while PCR achieved 86/350 (24.6%). When comparing sensitivity, specificity, positive predictive value, and accuracy, LAMP-LFD showed the best results at 100%, 95.7%, 86.3%, and 96.6%, respectively. For Kappa index of LAMP-LFD, indicated nearly perfect agreement with culture method. Conclusion: The LAMP-LFD Salmonella detection, which used InvA gene, was highly specific, sensitive, and convenient for identifying Salmonella. Furthermore, this method could be used for Salmonella monitoring and primary screening in animal products and animal production environmental samples.
Life history characteristics, habitat landscape, and historical events are believed to have shaped the patterns of genetic variation in many taxa. The bony lip barb, Osteohilus vittatus, represent a potamodromous fish that complete all life cycle in freshwater and is widely distributed in Southeast Asia. It usually lives in small rivers and other freshwater habitats, and movement between habitats for either food or reproduction has been typical. These life history characteristics may promote gene flow, leading to less structured populations. However, many freshwater habitats are fragmented, which restricts gene flow. We investigate how this interplay has shaped patterns of genetic variation and phylogeographic structure within this species in the Sundaland, a biodiversity hotspot with a complex geological history, using mitochondrial cytochrome oxidase I (mtCOI) as a genetic marker. Forty-six mtCOI sequences of 506 bp long were collected from ten localities, eight geographically isolated and two connected. The sequences were used for population genetic and phylogeographic analyses. Our results showed a low genetic diversity within populations but high between populations. There was a deep phylogeographic structure among geographically isolated populations but a lack of such structure in the connected habitats. Among geographically isolated populations, sequence divergence was revealed, ranging from 1.8% between Java and Sumatra populations to 12.2% between Malaysia and Vietnam. An indication of structuring was also observed among localities that are geographically closer but without connectivity. We conclude that despite high dispersal capacity, the joint effects of historical events, long-term geographic isolation associated with sea level oscillation during the Pleistocene, and restricted gene flow related to lack of habitat connectivity have shaped the phylogeographic structure within the O. vittatus over the Sundaland.
The aim of this study was to investigate the alterations in meningeal blood flow by stimulation of trigeminovascular system. An open cranial window was prepared on the right parietal bone of male Sprague-Dawley rats. Trigeminovascular system was stimulated by electrical stimulation of trigeminal ganglion (ETS), somatosensory (whisker) stimulation, or topical applications of capsaicin and neuropeptides including substance P and calcitonin gene-related peptide (CGRP). Neonatal capsaicin pretreatment was performed with subcutaneous administration of capsaicin (50 mg/kg) within the first 24 hours after birth. Changes in regional blood flow of dural artery (rDBF) and pial artery (rPBF) were continuously measured through the cranial window by laser-Doppler flowmetry. Both ETS and capsaicin caused a chain of alterations in rPBF and rDBF responses, i.e., an immediate transient decrease followed by rapid and marked increase in rPBF, which were significantly attenuated not only by pretreatments with L-733,060, a $NK_1$ receptor blocker, $CGRP_{8-37}$, a $CGRP_1$ receptor blocker, and 7-nitroindazole monosodium salt (7-NINA), a neuronal nitric oxide synthase inhibitor but also by neonatal capsaicin treatment. Exogenous neuropeptides including substance P and CGRP increased the meningeal blood flow, which was significantly attenuated not only by pretreatment with L-733,060 and $CGRP_{8-37}$, respectively, but also by pretreatment with 7-NINA. The rPBF response to whisker stimulation was significantly attenuated not only by trigeminovascular system injuries including nasociliary nerve denervation and neonatal capsaicin treatment but also by pretreatments with L-733,060, $CGRP_{8-37}$ and 7-NINA. These results suggest that the stimulation of trigeminovascular system causes prominent alterations in meningeal blood flow, and that neuropeptides as well as nitric oxide in the trigeminovascular system are importantly implicated in the regulation of meningeal blood flow.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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