To develop the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the analysis of N-acetylehitooligosaccharides (NACOS) and chitooligosaccharides (COS), specific antibodies (Abs) were produced, and their properties were compared. N-acetylehitohexaose (NACOS6), chitohexaose (COS6), and COS mixture (COSM) conjugated to bovine serum albumin (BSA) were used to immunize rabbits. By the use of specific Abs and NACOS6-horseradish peroxidase (HRP), COS6-HRP, and COSM-HRP conjugates, competitive direct ELISA (cdELISA) was developed. The detection limits of NACOS6 by the anti-NACOS6 Ab and COS6 by the anti-COS6 and the anti-COSM Abs in the cdELISAs were about 0.2, 2, ana 2 ng/ml (ppb), respectively. In the cdELISA, the anti-NACOS6 Ab was found to recognize NACOS3-NACOS6, but not N-acetyl-D-glucosamine (GlcNAc), NACOS2, and COSs; the anti-COS6 Ab recognized COS2-COS6 and COSM, but not glucosamine (GlcN) and NACOSs. The recognition pattern of the anti-COSM Ab was almost the same as that of the anti- COS6 Ab, except that the former recognized COS2 and COS3 slightly better than the latter.
Biotin-S-S-Phosphine was designed and synthesized as a potential tool for a proteomic study of O-GlcNAcmodified proteins. This reagent features a disulfide linker between a triarylphosphine moiety, which allows selective conjugation to azide-containing proteins, and a biotin moiety that can allow easy isolation through its strong affinity toward avidin-coated solid beads. The disulfide linkage within this reagent can allow the easy release of the bound molecules of interest, which is difficult to achieve when a biotin:avidin pair is used alone, by reducing the disulfide bond of the reagent with DTT. Preliminary in vitro biological assays with azidelabeled and unlabeled cell lysates and a pure protein Nup62 showed that the Biotin-S-S-Phosphine reagent is highly reactive toward the free thiol groups of proteins. When a molecular tool with a disulfide linker is applied to the enrichment of the molecules of interest from other species, it is important to block the free-thiols of the sample using exhaustive alkylation prior to the Staudinger ligation reactions to restore the bioorthogonal nature of this reaction.
담배연작지의 토양중 토양살충제로 처리한 Heptachlor의 잔류분을 GLC로 분석하였다. Heptachlor의 토양중 잔류분은 모두 0.010ppm에 미달하였다. 한편 담배 연작지에 재배된 무우, 배추의 Heptachlor잔류량은 0.01 ppm이하로, 이수준은 같은 해인 3971년도 전국에서 수집, 분석한 두 채소의 Heptachlor 잔류량과 대등하였다. 무우 및 배추로 흡수, 이행하는 Hheptachlor잔류량은 토양 중 등 살충치의 농도에 비례하지 않었다.
Energy minimization and conformational studies of molecular ions generated by ESI (electrospray ionization) tandem mass spectrometry (MS/MS) can be used for the discrimination of stereoisomeric permethylated and sodium cationized trisaccharides. Sets of fucose-containing trisaccharides having different internal and terminal linkages have been synthesized to analyze the reducing terminal linkage positions using BT and IT fusion approaches. A detailed investigation has been undertaken on the conformational behaviors of four trisaccharide fragments from human milk and blood group determinants of Type 1 and Type 2, namely Fuc($\alpha$1- 3)Gal($\beta$1-3)GalNAc and Fuc($\alpha$1-3)Gal($\beta$1-X)GlcNAc where X = 3, 4 and 6 using molecular modeling methods. Three dimensional rigid and adiabatic phi-psi-energy maps (Surfer program) describing the energy as a function of rotation around corresponding glycosidic linkages were calculated by SYBYL molecular modeling and MM4 force field programs conjunction with cleavage energies of ESI MS/MS for the side group orientations. This approach predicted conformational behaviors exhibited by isomer saccharides for future applications on biologically active glycoconjugates and to exploit a faster method of synthesizing a series of structural isomeric oligosaccharides.
Kim, Seong-Hun;Oh, Doo-Byoung;Kwon, Oh-Suk;Jung, Jae-Kap;Lee, Yun-Mi;Ko, Ki-Sung;Ko, Jeong-Heon;Kang, Hyun-Ah
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제18권5호
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pp.859-865
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2008
Bacterial glycosyltransferases have drawn growing attention as economical enzymes for oligosaccharide synthesis, with their easy expression and relatively broad substrate specificity. Here, we characterized a glycosyltransferase homolog (Fnu_GT) from a human oral pathogen, Fusobacterium nucleatum. Bioinformatic analysis showed that Fnu_GT belongs to the glycosyltransferases family II. The recombinant Fnu_GT (rFnu_GT) expressed in Escherichia coli displayed the highest glycosylation activity when UDP-galactose (Gal) was used as a donor nucleotide-sugar with heptose or N-acetylglucosamine (GlcNAc) as an acceptor sugar. Interestingly, rFnu_GT transferred the galactose moiety of UDP-Gal to a nonreducing terminal GlcNAc attached to the trimannosyl core glycan, indicating its potential as an enzyme for human-type N-glycan synthesis.
Park Youn-Young;Han Kyung-Soo;Yeom Jong-Min;Suh Yong-Cheol
대한원격탐사학회지
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제22권3호
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pp.199-209
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2006
The Global Land Cover 2000 (GLC 200) project, as a most recent issue, is to provide for the year 2000 a harmonized land cover database over the whole globe. The classifications were performed according to continental or regional scales by corresponding organization using the data of VEGETATION sensor onboard the SPOT4 Satellite. Even if the global land cover classification for Asia provided by Chiba University showed a good accuracy in whole Asian area, some problems were detected in Korean region. Therefore, the construction of new land cover database over Korea is strongly required using more recent data set. The present study focuses on the development of a new upgraded land cover map at 1 km resolution over Korea considering the widely used K-means clustering, which is one of unsupervised classification technique using distance function for land surface pattern classification, and the principal components transformation. It is based on data sets from the Earth observing system SPOT4/VEGETATION. Newly classified land cover was compared with GLC 2000 for Korean peninsula to access how well classification performed using confusion matrix.
유지의 triglyceride 조성을 밝히기 위하여 비교적 구성지방산의 종류가 간단한 수종의 식물유를 시료로 하여 연구 검토하였는데, 본 보고에서는 참기름의 triglyceride 조성에 대하여 보고하기로 한다. 시료유를 Bio-Beads SX-2및 sephadex LH-20을 사용한 column chromatography에 의하여 triglyceride를 분리하고, 이것을 $\mu-Bondapak\;C_{18}$ column을 사용한 HPLC에 걸어 PN별로 triglyceride를 분획하여 분취하였다. 분취한 획분의 일부를 GLC에 걸어 acyl 탄소수별로 분획하고, 또 일부는methyl 화하여 GLC에 걸어 지방산조성을 분석하였다. 이들 결과로부터 triglyceride조성을 산정하였는데 산정할 수 있었는 triglyceride는 21종류이며, 그 중 주요 triglyceride는 $(2{\times}_{C18:1},\;C_{18:2};\;17.1\%),\;(C_{18:1},\;2{\times}C_{18:2};\;17.0\%),\;(3{\times}C18:2;17.0\%),$$(3{\times}C_{18:1}; \;10.9\%),\;(3{\times}C_{18:2};\;9.6\%),$$(C_{16:0},\;C_{18:1},\;C_{18:2};\;7.9\%),\;(C_{16:0},\;2{\times}C_{18:1};\;7.4\%),$$(C_{16:0},\;2{\times}C_{18:2};\;6.8\%), (C_{18:0},\;C_{18:1},\;C_{18:2};\;3.1\%),$$(2{\times}C_{18:0},\;C_{18:2};\;1.5\%),\;(C_{18:0},\;2{\times}C_{18:1};\;1.4\%),$$(C_{16:0},\;C_{18:0},\;C_{18:1};\;1.3\%),\;(2{\times}C_{16:0},\;C_{18:1};\;1.2\%)$ 및 $(C_{16:0},\;C_{18:0},\;C_{18:2};\;1.0\%)$ 등이었다.
I 세포 질환(뮤코지방증 2형; MIM 252500)과 pseudo-Hurler polydystrophy (뮤코지방증 3형; MIM 252600)는 세포내 비정상적인 리소좀 관련 운송으로 인해 발병한다. 특징적인 소견으로는 섬유아 세포의 세포질에 다수의 봉입체, 뮤코다당뇨의 부재, 혈청 내 리소좀 효소 활성도의 증가, GlcNAc-phosphotransferase 활성도의 감소를 보인다. 이 연구에서는 GlcNAc-phosphotransferase 알파/베타 아형에 대한 knockout 마우스의 표현형과 생화학적 특징을 조사하였다. 또한, 태반으로부터 추출한 리소좀 농축 분획을 knockout 마우스에 투여하였을 때 체중 증가에 대한 효과를 볼 수 있는지에 대해 알아보고자 하였다. knockout 마우스는 뮤코지방증 2형 환자에서 그렇듯이 정상적인 체중 증가를 보이지 않았고 낮은 골밀도를 보였다. 게다가 knockout 마우스의 피부 섬유 아세포의 배양액에서는 리소좀 효소 활성도가 증가한 반면, 세포 내에서는 리소좀 효소 활성도가 감소되어 있는 것을 확인할 수 있었으며 이러한 특징은 뮤코지방증 2형 환자에서 볼 수 있는 특징과 일치한다. knockout 마우스의 꼬리 정맥내로 태반에서 추출한 리소좀 농축 분획을 투여한 결과, 체중이 증가하는 것을 확인할 수 있었고, 반면 생리식염수를 투여한 knockout 마우스의 경우는 체중이 증가하지 않았다. 결론적으로, knockout 마우스의 표현형과 생화학적 특징이 뮤코지방증 2형 환자와 유사하다는 것을 확인하였으며, 리소좀 농축 분획의 치료적 가능성을 증명하였다. 더 큰 범위의 동물 실험을 진행할 필요가 있으나, 이 연구는 질병에 대한 동물 모델을 개발하고 리조솜 농축 분획의 치료적 가능성을 제시하는 것을 통해 현재까지 치료가 불가능한 뮤코지방증 2형의 새로운 치료 방법의 가능성을 열었다고 볼 수 있다.
Kim, Jong Gug;Nonneman, Dan;Kim, Doo-Wan;Shin, Sangsu;Rohrer, Gary A.
Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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제30권8호
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pp.1086-1092
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2017
Objective: O-linked N-acetylglucosamine (O-GlcNAc) transferase (OGT) catalyzes the addition of O-GlcNAc and GlcNAcylation has extensive crosstalk with phosphorylation to regulate signaling and transcription. Pig OGT is located near the region of chromosome X that affects follicle stimulating hormone level and testes size. The objective of this study was to find the variations of OGT between European and Chinese pigs. Methods: Pigs were tested initially for polymorphism in OGT among European and Chinese pigs by polymerase chain reaction and sequencing at the U.S. Meat Animal Research Center (USMARC). The polymorphism was also determined in an independent population of pigs including European and Chinese Meishan (ME) breeds at the National Institute of Animal Science (NIAS, RDA, Korea). Results: The intron 20 of OGT from European and Chinese pigs was 514 and 233 bp, respectively, in the pigs tested initially. They included 1 White composite (WC) boar and 7 sows ($2Minzu{\times}WC$, $2Duroc\;[DU]{\times}WC$, $2ME{\times}WC$, $1Fengzing{\times}WC$) at USMARC. The 281-bp difference was due to an inserted 276-bp element and GACTT in European pigs. When additional WC and ME boars, the grandparents that were used to generate the $1/2ME{\times}1/2WC$ parents, and the 84 boars of 16 litters from mating of $1/2ME{\times}1/2WC$ parents were analyzed, the breeds of origin of X chromosome quantitative trait locus (QTL) were confirmed. The polymorphism was determined in an independent population of pigs including DU, Landrace, Yorkshire, and ME breeds at NIAS. OGT was placed at position 67 cM on the chromosome X of the USMARC swine linkage map. Conclusion: There was complete concordance with the insertion in European pigs at USMARC and NIAS. This polymorphism could be a useful marker to identify the breed of origin of X chromosome QTL in pigs produced by crossbreeding Chinese and European pigs.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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