• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제14권1호
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• pp.81-89
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• 2004

Tumor necrosis factor-$\alpha$ (TNF-$\alpha$) and lymphotoxin-$\alpha$ (LT-$\alpha$, TNF-$\beta$) can initiate and perpetuate human diseases such as multiple sclerosis (MS), rheumatoid arthritis (RA), and insulin-dependent diabetes mellitus (IDDM). TNFs can be blocked by the use of soluble TNF receptors. However, since monomeric soluble receptors generally exhibit low affinity or function as agonists, the use of monomeric soluble receptors has been limited in the case of cytokines such as TNF-$\alpha$, TNF-$\alpha$, interleukin (IL)-1, IL-4, IL-6, and IL-13, which have adapted to a multi component receptor system. For these reasons, very high-affinity inhibitors were created for the purpose of a TNFs antagonist to bind the TNFR and trigger cellular signal by using the multistep polymerase chain reaction method. First, recombinant simple TNFR-Ig fusion proteins were constructed from the cDNA sequences encoding the extracellular domain of the human p55 TNFR (CD120a) and the human p75 TNFR (CD120b), which were linked to hinge and constant regions of human $IgG_1$ heavy chain, respectively using complementary primers (CP) encoding the complementary sequences. Then, concatameric TNFR-Ig fusion proteins were constructed using recombinant PCR and a complementary primer base of recombinant simple TNFR-Ig fusion proteins. For high level expression of recombinant fusion proteins, Chinese hamster ovary (CHO) cells were used with a retroviral expression system. The transfected cells produced the simple concatameric TNFR-Ig fusion proteins capable of binding TNF and inactivating it. These soluble versions of simple concantameric TNFR-Ig fusion proteins gave rise to multiple forms such as simple dimers and concatameric homodimers. Simple TNFR-1g fusion proteins were shown to have much more reduced TNF inhibitory activity than concatameric TNFR-Ig fusion proteins. Concatameric TNFR-Ig fusion proteins showed higher affinity than simple TNFR-Ig fusion proteins in a receptor inhibitor binding assay (RIBA). Additionally, concatameric TNFR-Ig fusion proteins were shown to have a progressive effect as a TNF inhibitor compared to the simple TNFR-Ig fusion proteins and conventional TNFR-Fc in cytotoxicity assays, and showed the same results for collagen induced arthritis (CIA) in mice in vivo.

• 한국식품영양과학회지
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• 제26권2호
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• pp.175-179
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• 1997

과실의 성숙 연화동안에 단백질의 변화에 대해 연구하고자 완숙 연화된 감과 대추에서 용해성에 따라 추출한 수용성 단백질, 염가용성 단백질 및 세포벽 단백질의 함량 변화와 각 단백질의 gel filtration chromatogram의 pattern 변화를 조사하였다. 두 과실의 수용성 단백질은 완숙감과 대추에서 각각 98.2, 117.1mg/100g-fr.wt.이었으며, 연화된 감과 대추에서는 각각 112.6, 183.4mg/100g-fr.wt.로 과실의 연화에 따라 증가하였다. 염가용성 단백질도 감의 경우 완숙감에서 51.7mg, 연시에서 133.2mg/100g-fr.wt.로 증가하였고, 대추의 경우에도 완숙·연화 대추 각각 101.8, 139.5mg/100g-fr.wt.로 현저한 증가를 보였다. 이 에 반해 세포벽 단백질 함량은 두 과실 모두 감소하였다. Gel filtration에서 연시의 수용성 단백질 chromatogram은 완숙감에 나타난 1개의 peak 이외에 다소 분자량이 작은 2개의 peak가 함께 존재 했으며 , 대추의 수용성 단백질은 완숙 대추와 연화 대추 모두 3개의 peak로 존재했다 염가용성 단백질 및 세포벽 단백질의 get filtration에서는 완숙 연화 과실에서 거의 유사한 경향의 chromatogram을 나타내었다. 또한 연좌된 감과 대추의 세포벽 단백질에서 단백질 함량이 감소하는 fraction은 수용성 및 염가웅성 단백질 분획에서 단백질 함량이 증가하는 fraction과 거의 일치하였다.

• 한국동물학회지
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• 제26권3호
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• pp.155-170
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• 1983

溫熱處理에 대해서 細胞가 反應하여 適應하는 過程을 細胞膜水準에서 연구하기 위해서 培養中인 纖維芽細胞性 腫瘍細胞를 이용하여 細胞週期, 細胞密度 및 溫熱處理에 따른 膜表面蛋白質의 變化를 lactoperoxidase를 이용한 iodination과 galactose oxidase를 이용한 tritiation 方法을 서서 分析하였다. 細胞週期와 細胞密度에 따라 膜表面蛋白質은 定量的 變化를 보였는데 $G_1$期에서는 LETS 蛋白質과 高分子蛋白質이 크게 增加하였고 細胞密度의 증가에 따라서는 125K 蛋白質의 增加와 130K 및 100K 蛋白質의 減少가 特異하게 나타났다. 溫熱處理후의 시간경과에 따른 변화를 보면 處理직후 80K 이상의 蛋白質은 모두 사라지고, 24시간 지나면 70K 蛋白質이 현저한 增加를 보였지만 48시간이 경과하면 다시 減少하고 高分子蛋白質들이 原狀으로 回復되었다. 또한, 溫度를 $39^\\circ\\sim45^\\circC$까지 증가시켜 보았을 때 70K 蛋白質이 $41^\\circC$에서 가장 큰 폭으로 增加하는 特異한 현상이 관찰되었다. 아울러 이 70K 단백질은 trypsin을 처리하면 사라졌는데 galactose oxidase로 tritiation하였을때도 iodination하였을 때와 동일한 變化樣相을 보였다. 이러한 결과와 細胞質蛋白質과 比較한 缺課로 미루어 볼 때, 70K 蛋白質은 膜表面蛋白質이며 糖蛋白質이고 또한 HSP 70과 같은 蛋白質인 것으로 推定되었다. 이 蛋白質의 細胞膜에 있어서의 가능한 機能과 腫瘍細胞가 正常細胞에 비해서 溫熱處理에 敏感한 原因등에 관해서 考察하였다.

• Applied Biological Chemistry
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• 제31권4호
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• pp.361-370
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• 1988

유청 및 대두 단백질의 상호작용을 규명하기 위하여 두 단백질용액 및 1 : 1 혼합용액에 대한 겔투과크로마토그래피와 전기영동에 의하여 열처리 중 조성단백질의 변화 및 상호작용에 관여한 조성단백질을 조사하였다. 크로마토그래피 결과 $80^{\circ}C$ 이상에서 열처리할 경우, 대두단백질 및 혼합물에서 저분자량의 단백질과 고분자량의 응집물이 증가한 것으로 나타났는데, 이는 열처리에 의하여 대두의 11S globulin이 subunit로 해리되고, 이것이 thiol기, disulfide bond 등을 함유한 유청단백질과 가용성 응질물을 형성하기 때문으로 생각되었다. 전기영동에 의하여, 가열시 유청조성단백질 중의 ${\beta}-Lactoglobulin$, ${\alpha}-Lactalbumin$ 및 proteose-peptone 3이 대두단백질과 상호작용을 일으키는 것으로 나타났다. 그리고 용액의 염환경에 따라 Bovine Serum Albumin, Immunoglobulin G(H) 및 Lactoferrin도 상호작용을 일으킬 수 있으며, 대두조성단백질 중의 11S globulin의 basic subunit와 acidic subunit, 7S globulin의 ${\alpha}'$ subunit가 유청단백질과 상호작용을 일으킬 수 있음을 추측할 수 있었다.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제25권1호
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• pp.17-24
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• 1998

We have previously demonstrated that specific antigens involved in autoimmunity in endometriosis may be endometrial proteins with molecular weight (mw) of 71, 92, and 103 kilodalton (kDa). The purposes of this study were to determine the incidence of IgG antibodies against these endometrial antigens in peritoneal fluid of patients with endometriosis and to evaluate the antigenic differences between the endometria of patients with and without endometriosis. Forty peritoneal fluid (PF) from 24 patients with endometriosis and 16 patients without endometriosis (control patients) were tested against endometrial protein from patients (n=8) with endometriosis and from control patients (n=10) by western blot. Fifteen (62.5%) of 24 PF samples from patients with endometriosis had specific Immunoglobuiin (Ig) G antibodies against one of three endometrial proteins with mw of 71, 92 and 103 kDa but none of PF samples from control patients had these antibodies. The electrophoretic pattern of endometrial proteins from patients with endometriosis was similiar to that from control patients. Furthemore there was no significant difference in specific PF Immunoglobulin G binding to endometrial proteins regardless of origin of these proteins. Our data indicate that specific humoral immune response can be found in PF of patients with endometriosis and that specific antigens inducing this immune response are present in human endometrium and that there is no antigenic difference between the endometria of patients with and without endometriosis.

• Applied Biological Chemistry
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• 제25권4호
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• pp.248-251
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• 1982

3가지 단백질과 CBG250과의 반응에 의해서 생성되는 복합체(複合體)의 분광학적(分光學的) 성질(性質)과 결합당량(結合當量)을 측정(測定)하였다. CBG250은 사용한 몇 가지 용매(溶媒)에 따라 최대흡광파장(最大吸光波長)$({\lambda}_m)$이 이동(移動)하였으며, ethanol용액 중 $({\lambda}_m=610nm)$에서 흡광계수(吸光係數)는 82.4, 몰 흡광계수(吸光係數)는 $70.4{\times}10^3$이었다. CBG250은 ethanol―인산(燐酸)―수용액(水溶液)에서 갈색$({\lambda}_m=465nm)$을 가지나 일단 단백질과 결합하면 청색(靑色)$({\lambda}_m=590nm)$으로 변환되었으며, 파장(波長) 590nm에서의 흡광도(吸光度)와 단백질 함량(含量) 사이에는 제한된 범위에서 비례관계를 나타냈다. 반응조건에서 단백질과 CBG250은 신속하게 복합체(複合體)를 형성하였다. 단백질의 CBG250에 대한 결합당량(結合當量)은 단백질의 종류(種類)와 함량(含量)에 따라 현저하게 변하였다. BSA, Cytochrome C, ${\gamma}-globulin$의 그것은 각각 110, 103, $88{\mu}g\;$CBG250/100{\mu}g$ protein이었다.

• 대한약리학회지
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• 제29권2호
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• pp.245-252
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• 1993

Amiloride는 $Na{^+}$ channels를 선택적으로 억제하는 potassium sparing diuretic이다. 본 연구에서는 amiloride와 아데노신 수용체의 상호작용을 밝히고자, 흰쥐에서 얻은 crude adipocytic membrane fractions의 adenylyl cyclase activity를 여러 조건하에서 측정하였다. 우선 GTP가 isoproterenol-stimulated adenylyl cyclase activity에 미치는 영향을 조사함으로서 $G_i$ protein (inhibitory guanine nucleotide binding protein)의 기능을 알아보았다. 그 결과 amiloride는 높은 GTP 농도에서 isoproterenol-stimulated adenylyl cyclase의 활성을 억제하는 것을 관찰할 수 없었다. 이와는 대조적으로 amiloride 존재 하에서 2-chloroadenosine을 사용하여 아데노신 수용체를 경유한 isoproterenol-stimulated adenylyl cyclase activity가 억제되는 정도를 측정하였을 때, 2-chloroadenosine의 농도에 따라 큰 변화 없거나 오히려 억제 효과가 더욱 크게 나타났다. 그러나 위와 같은 조건하에서 propranolol에 의한 isoproterenol-stimulated adenylyl cyclase activity의 억제는 amiloride에 의해서 유의하게 변하지 않는 것으로 보아서, 수용체를 매개로 한 $G_s$ protein의 기능은 amiloride에 의해 영향을 받지 않는 것으로 생각된다. 그리고 amiloride에 의해 증가된, 2-chloroadenosine-mediated adenylyl cyclase의 억제 효과는 150mM NaCl 존재 하에서도 그대로 유지되었다. 이러한 결과로 보아 amiloride는 아데노신 수용체와 결합하여 $G_i$ proteins과의 coupling을 용이하게 할 뿐만 아니라, $G_i$ protein을 선택적으로 변화시켜 $G_i$ protein의 GTP 의존적인 adenylyl cyclase의 억제 기능을 제거하는 두 작용을 갖는 것으로 사료된다.

• 생명과학회지
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• 제27권10호
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• pp.1191-1198
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• 2017

세포 내 소기관들과 소포들은 세포 내에서 미세소관을 따라 적절한 구획으로 수송된다. 이러한 세포 내 수송과정은 분자 모터단백질인 kinesin과 dynein에 의하여 이루어진다. Kinesin 1은 오징어 축삭돌기 세포질로부터 처음 분리되었으며 2개의 중쇄단위체(KHCs, 또는 KIF5s) 및 이와 결합하는 경쇄단위체(KLCs)의 복합체를 형성한다. KIF5s는C-말단 고리 영역을 통해 많은 다양한 단백질과 결합하는데, 아직 그 결합단백질들은 충분히 밝혀지지 않았다. 본 연구에서는 KIF5A 결합단백질을 분리하기 위하여 효모 two-hybrid 탐색을 수행하여 스트레스 과립형성과 mRNP 위치결정에 관여하는 Ras-GTPase-activating protein (GAP) Src homology3 (SH3)-domain-binding protein 2 (G3BP2)를 분리하였다. G3BP2는 KIF5A의 C-말단 고리 영역에 존재하는 73개 아미노산을 포함하는 영역과 결합하였다. 그러나 G3BP2는 KIF5B, KIF5C, KLC1, KIF3A와는 결합하지 않았다. KIF5A는 G3BP2의 arginine-glycine-glycine(RGG)/Gly-rich 도메인과 결합하지만 G3BP1과는 결합하지 않았다. HEK-293T세포에 G3BP2와 KIF5A를 발현하여 면역침강한 결과 G3BP2와 KIF5A는 같이 침강하였다. 또한 HEK-293T 세포 내의 전체에서 두 단백질은 같은 부위에 존재하였다. 이러한 결과들은 세포 내에서 G3BP2는 KIF5A와 결합하는 결합단백질로 확인 되었다.

• 대한의생명과학회지
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• 제13권2호
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• pp.127-133
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• 2007

Heterotrimeric GTP binding proteins (G proteins) mediate signal generated by neurotransmitter and hormones. Among all G proteins, Go is the most abundant in brain but its role in brain is not clearly understood. To determine the function of the alpha subunit of Go (Go$\alpha$), we search for the interacting partner of Go$\alpha$ in brain using yeast two-hybrid system. A resistant to inhibitor of cholinesterase (Ric-8B) was identified as a Go$\alpha$ interacting protein. We confirmed interaction between Go$\alpha$ and Ric-8b employing in vitro affinity binding assay and showed that the Ric-8b increased the function of Go$\alpha$. Our findings indicate that Ric-8b is possible guanine nucleotide exchange factor for Go$\alpha$.

• Molecules and Cells
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• 제42권4호
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• pp.285-291
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• 2019

Eukaryotic cells use conserved quality control mechanisms to repair or degrade defective proteins, which are synthesized at a high rate during proteotoxic stress. Quality control mechanisms include molecular chaperones, the ubiquitin-proteasome system, and autophagic machinery. Recent research reveals that during autophagy, membrane-bound organelles are selectively sequestered and degraded. Selective autophagy is also critical for the clearance of excess or damaged protein complexes (e.g., proteasomes and ribosomes) and membrane-less compartments (e.g., protein aggregates and ribonucleoprotein granules). As sessile organisms, plants rely on quality control mechanisms for their adaptation to fluctuating environments. In this mini-review, we highlight recent work elucidating the roles of selective autophagy in the quality control of proteins and RNA in plant cells. Emphasis will be placed on selective degradation of membrane-less compartments and protein complexes in the cytoplasm. We also propose possible mechanisms by which defective proteins are selectively recognized by autophagic machinery.