Dye-binding Capacities of Proteins using Coomassie blue G250 in an Acidic Solution

단백질과 색소(色素) Comassie blue G250과의 결합능력

Commassie blue G250 produced metachromatic effect with some solvents. The absorptivity and molar absorptivity of the dye in ethanol were 82.4 and $70.4{\times}10^3$ at maximum absorption wavelength 610nm, respectively. The dye had a red from$({\lambda}_m=465nm)$ in ethanol-phosphoric acid-water solution and converted to a blue form$({\lambda}_m=590nm)$ after binding to protein. Absorbance at 590nm gave linear responses with respect to protein contents. The dye-binding capacities of proteins varied considerably with the content and source of proteins. Under the experimental condition the dye-binding capacities of bovine serum albumin, cytochrome C and ${\gamma}-globulin$ were 110, 103, and $88{\mu}g$ commassie blue G250 bound per $100{\mu}g$ protein, respectively.

3가지 단백질과 CBG250과의 반응에 의해서 생성되는 복합체(複合體)의 분광학적(分光學的) 성질(性質)과 결합당량(結合當量)을 측정(測定)하였다. CBG250은 사용한 몇 가지 용매(溶媒)에 따라 최대흡광파장(最大吸光波長)$({\lambda}_m)$이 이동(移動)하였으며, ethanol용액 중 $({\lambda}_m=610nm)$에서 흡광계수(吸光係數)는 82.4, 몰 흡광계수(吸光係數)는 $70.4{\times}10^3$이었다. CBG250은 ethanol―인산(燐酸)―수용액(水溶液)에서 갈색$({\lambda}_m=465nm)$을 가지나 일단 단백질과 결합하면 청색(靑色)$({\lambda}_m=590nm)$으로 변환되었으며, 파장(波長) 590nm에서의 흡광도(吸光度)와 단백질 함량(含量) 사이에는 제한된 범위에서 비례관계를 나타냈다. 반응조건에서 단백질과 CBG250은 신속하게 복합체(複合體)를 형성하였다. 단백질의 CBG250에 대한 결합당량(結合當量)은 단백질의 종류(種類)와 함량(含量)에 따라 현저하게 변하였다. BSA, Cytochrome C, ${\gamma}-globulin$의 그것은 각각 110, 103, $88{\mu}g\;$CBG250/100{\mu}g$ protein이었다.