최근 Fusobacterium nucleatum subsp. vincentii는 average nucleotide identity 및 genome-to-genome distance 분석법에 의해 Fusobacterium vincentii로 재분류 되었다. F. vincentii는 그람 음성이면서, 혐기성 및 가는 섬유 모양의 세균이다. F. vincentii는 사람의 구강 내 정상세균총의 하나이고, 치주질환에 중요한 역할을 한다. F. vincentii KCOM 2931 균주가 사람 치주염 병소에서 분리되었다. F. vincentii KCOM 2931 균주 유전체 염기서열을 해독하여 보고한다.
최근 Fusobacterium nucleatum subsp. polymorphum는 average nucleotide identity 및 genome-to-genome distance 분석법에 의해 Fusobacterium polymorphum로 재분류 되었다. F. polymorphum 그람 음성이면서, 혐기성 및 가는 섬유 모양의 세균이다. F. polymorphum은 사람의 구강 내 정상세균총의 하나이고, 치주질환의 원인 인자이다. F. polymorphum KCOM 1001 (= ChDC F119) 균주가 사람 치은염 병소의 치은연하치면세균막에서 분리되었다. F. polymorphum KCOM 1001 균주 유전체 염기서열을 해독하여 보고한다.
P. gingivalis를 단독면역하거나 또는 Fusobacterium nucleatum 선면역 후 P. gingivalis 항혈청을 각각 얻어냈다. 두 종류의 항혈청이 P. gingivalis biofilm을 침투해 들어가는 능력을 confocal laser scanning microscope를 이용하여 비교 감증하였다. 항혈청의 P. gingivalis에 대한 avidity index도 측정하였다. 결과적으로 F. nucleatum의 선면역은 P. gingivalis 특이 항혈청에 대해 세균성 biofilm의 침투능력을 저하시키고, 동일한 세균에 대한 avidity도 감소시켰다.
본 연구는 성인성 치주염 환자의 치은연하 치면세균막을 총 60개 치아에서 채취하여 F. nucleatum과 A. actinomycetemcomitans의 동정을 위해 세균배양법, single PCR법 및 mutliplex PCR법을 실시하였고, 세균 동정법간의 비교를 통해 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. F. nucleatum과 A. actinomycetemcomitans의 동정을 위해 세균배양법, single PCR 및 multiplex PCR을 실시한 결과 F. nucleatum은 각각 12개(20.0%), 45개(75.0%), 43개(71.7%) 치아에서 양성반응을 보였지만, A. actinomycetemcomitans는 각각 0개(0.0%), 4개(6.7%), 1개(1.7%) 치아에서 양성반응이 나타났다. 2. F. nucleatum은 세균배양법에 비해 single PCR법 및 multiplex PCR법에서 높은 검출 빈도를 보여 좀 더 효율적인 세균 동정법으로 생각되었지만, 통계적으로는 유의한 차이가 없었다. 3. A. actinomycetemcomitans는 세균배양법에서 전혀 검출되지 않아 통계적으로 검정할 수 없었고, 세균 동정법간의 비교도 어려웠다. 4. F. nucleatum과 A. actinomycetemcomitans의 동정을 위한 single PCR법과 multiplex PCR법 간의 비교에서 두 세균 모두 검출 빈도에 있어서는 큰 차이를 보이지 않았지만, 통계적으로는 유의한 차이를 보였다.
Kim, Seong-Hun;Oh, Doo-Byoung;Kwon, Oh-Suk;Jung, Jae-Kap;Lee, Yun-Mi;Ko, Ki-Sung;Ko, Jeong-Heon;Kang, Hyun-Ah
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제18권5호
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pp.859-865
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2008
Bacterial glycosyltransferases have drawn growing attention as economical enzymes for oligosaccharide synthesis, with their easy expression and relatively broad substrate specificity. Here, we characterized a glycosyltransferase homolog (Fnu_GT) from a human oral pathogen, Fusobacterium nucleatum. Bioinformatic analysis showed that Fnu_GT belongs to the glycosyltransferases family II. The recombinant Fnu_GT (rFnu_GT) expressed in Escherichia coli displayed the highest glycosylation activity when UDP-galactose (Gal) was used as a donor nucleotide-sugar with heptose or N-acetylglucosamine (GlcNAc) as an acceptor sugar. Interestingly, rFnu_GT transferred the galactose moiety of UDP-Gal to a nonreducing terminal GlcNAc attached to the trimannosyl core glycan, indicating its potential as an enzyme for human-type N-glycan synthesis.
Tavares, Livia Jacovassi;Klein, Marlise Inez;Panariello, Beatriz Helena Dias;de Avila, Erica Dorigatti;Pavarina, Ana Claudia
Journal of Periodontal and Implant Science
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제48권1호
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pp.12-21
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2018
Purpose: The goal of this study was to develop and validate a standardized in vitro pathogenic biofilm attached onto saliva-coated surfaces. Methods: Fusobacterium nucleatum (F. nucleatum) and Porphyromonas gingivalis (P. gingivalis) strains were grown under anaerobic conditions as single species and in dual-species cultures. Initially, the bacterial biomass was evaluated at 24 and 48 hours to determine the optimal timing for the adhesion phase onto saliva-coated polystyrene surfaces. Thereafter, biofilm development was assessed over time by crystal violet staining and scanning electron microscopy. Results: The data showed no significant difference in the overall biomass after 48 hours for P. gingivalis in single- and dual-species conditions. After adhesion, P. gingivalis in single- and dual-species biofilms accumulated a substantially higher biomass after 7 days of incubation than after 3 days, but no significant difference was found between 5 and 7 days. Although the biomass of the F. nucleatum biofilm was higher at 3 days, no difference was found at 3, 5, or 7 days of incubation. Conclusions: Polystyrene substrates from well plates work as a standard surface and provide reproducible results for in vitro biofilm models. Our biofilm model could serve as a reference point for studies investigating biofilms on different surfaces.
치주질환과 관련된 세균인 S. gordonii, F. nucleatum 및 P. gingivalis의 상호작용이 군집 형성에 미치는 영향을 알아보고자 trypticase soy hemin menadione broth에 단독 및 열처리한 사균과 혼합 분주하여 혐기성 균배양조를 통해 $37^{\circ}C$$CO_2$ 배양기에서 anearobic gas pack 하에 7일간 배양하였다. 군집 형성 정도를 확인하기 위해 흡광도를 측정하였으며, 군집 구조 및 형태를 확인하기 위해 주사전자현미경으로 관찰하였다. P. gingivalis의 병원성에 미치는 영향을 확인하기 위해 real-time RT-PCR를 통해 gingipain인 HRgpA를 생성하는 rgpA 유전자에 대한 발현 분석을 시행하여 다음과 같은 결론을 얻었다. S. gordonii와 P. gingivalis의 군집 형성은 다른 사균들에 의해 증가하였다. F. nucleatum의 경우 P. gingivalis 사균에 의해 증가하는 양상을 보였으나 S. gordonii 사균에 의해서는 군집 형성이 감소되었다. 따라서 본 실험에 사용된 균주는 군집 형성 시 상호작용 인자뿐 아니라 세균 입자 그 자체 등을 통해서도 서로 영향을 주는 것으로 생각된다.
This study was undertaken to develop PCR primers for the simultaneous detection of Fusobacterium nucleatum and Actinobacillus actinomycetemcomitans, using two species-specific reverse primers in combination with a single conserved forward primer. These primers target the variable and conserved regions of the 16S rDNA. The primer specificity was tested against (i) four F. nucleatum and three A. actinomycetemcomitans strains and (ii) seven representatives of the different species of oral bacteria. The primer sensitivity was determined by testing serial dilutions of the purified genomic DNA of F. nucleatum and A. actinomycetemcomitans. The data indicate that species-specific amplicons could be obtained for all the F. nucleatum and A. actinomycetemcomitans strains tested, which were not found in the seven other species. The multiplex PCR could detect as little as 4 fg of chromosomal DNA of F. nucleatum and A. actinomycetemcomitans simultaneously. These findings suggest that these PCR primers are highly sensitive and are suitable for applications in epidemiological studies, diagnosis, and monitoring F. nucleatum and A. actinomycetemcomitans after the treatment of periodontitis.
우리 인체에는 의학적으로 유용한 기능을 가진 세균들이 정상적으로 존재하며 구강내에도 독특한 기능을 나타내는 세균들이 상재한다. 본 연구에서는 치아우식증이 없는 소아의 타액에서 분리한 유산균 2주가 Streptococcus mutans에 의한 인공치태 형성과 혐기성 세균에 의한 휘발성 유황화합물 생성을 억제하는 것을 확인하고, API 50 CHL medium kit를 이용한 생화학적 검사와 16S rDNA sequencing으로 동정하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 분리균주는 2주 모두 그람양성 간균으로 과산화수소를 생성하였다. 2. 인공치태의 무게는 Streptococcus mutans의 단독 배양시 $124.4{\pm}30.4mg$이었으나, 분리균주와 병합 배양시에는 각각 $5.2{\pm}2.0mg,\;10.6{\pm}6.6mg$으로 현저하게 감소하였다(p<0.05). 3. Streptococcus mutans의 생균수는 단독 배양시 ml당 $3.4{\times}10^9$이었으나, 분리균주와 병합 배양시에는 각각 ml당 $4.6{\times}10^8$과 $2.4{\times}10^8$으로 감소하였다. 4. Fusobacterium nucleatum을 30분간 진탕한 후 측정한 상청액의 흡광도는 1.286이었으나, Fusobacterium nucleatum과 분리균주를 병합으로 30분간 진탕한 후 측정한 상청액의 흡광도는 각각 0.628과 0.497로 감소하였으며, 상호 결합 정도는 29.4%와 57.8%이었다. 5. Fusobacterium nucleatum의 단독 배양시 cysteine과 $FeSO_4$를 첨가한 배지를 가한 후 측정한 침전물의 배지 흡광도는 1.794이었으나, 분리균주와 병합 배양시 측정한 침전물의 배지 흡광도는 각각 1.144와 0.915로 감소하였으며, Porphyromonas gingivalis 단독 배양시 침전물의 배지 흡광도는 1.932이었으나 분리균주와 병합 배양시에는 침전물의 배지 흡광도가 각각 1.170과 1.266으로 감소하였다. 6. 분리균주를 API 50 CHL medium kit로 탄수화물 발효검사를 시행한 결과, 분리균주 1주는 Lactobacillus salivarius로, 다른 분리균주는 Lactobacillus delbrueckii subsp. lactis로 동정되었다. 7 분리균주를 16S rDNA partial sequencing으로 동정한 결과, 2주 모두 Lactobacillus salivarius subsp. salicinius와 유전자 유사치가 99.60%, 99.73%를 보여 Lactobacillus salivarius subsp. salicinius로 동정되었다. 이상의 결과를 종합하면 치아우식증이 없는 소아의 타액에서 분리된 유산균 중 과산화수소를 분비하여 인공치태 형성과 휘발성 유황화합물 생성을 억제하는 분리균주는 Lactobacillus salivarius subsp. salicinius로 동정되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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