Bacillus sp. YBL-7 which had been isolated from ginseng root-rot suppressive soil was able to antagonize Fusarium solani causing ginseng root-rot by their antibiotic substance. In order to develop multifunctional antagonist on Bacillus sp. YBL-7 as a biocontrol agent against Fusarium salam', optimal conditions for protoplast transformation system of Bacillus sp.YBL-7 by the vector plasmid pE194 were investigated. The protoplasts of Bacillus sp. YBL-7 were obtained at best efficiency by treatment with 200${\mu}g$/ml of lysozyme in the pH 7.0 of SMM buffer for 90 minutes at $40^{\circ}C$. The cell wall of the protoplast was regenerated on the agar plate containing 1.2% agar and 0.7 M mannitol. Under the best condition for protoplast formation and regeneration, the optimal transformation was achieved with 40% polyethylene glycol (M.W. 4000) treatment for 10minutes. The vector plasmid pE194 showed the best transformation frequency at 5$\mu$g/ml of final concentration. The pE194 was very stable over 80% in the transformants.
Kim, Byung-Yong;Ahn, Jae-Hyung;Weon, Hang-Yeon;Song, Jaekyeong;Kim, Sung-Il;Kim, Wan-Gyu
The Korean Journal of Pesticide Science
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v.16
no.4
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pp.357-363
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2012
Ginseng (Panax ginseng C. A. Meyer) is an economically important crop in Korea. While the consumption of the crop is gradually increasing, the yield is decreasing due to the injury of continuous cultivation or infection of soil-borne fungal pathogens such as Cylindrocarpon destructans, Fusarium solani, Rhizoctonia solani and Sclerotinia nivalis. In order to find promising biocontrol agents, we have isolated 439 soil bacteria from ginseng cultivated soil and tested their antifungal activities against ginseng rot pathogens. Among them, 3 strains were finally selected and tested for the elucidation of their genetic and biochemical properties. They were identified as Bacillus amyloliquefaciens using phylogenetic analysis based on 16S rRNA gene sequences. Moreover, all selected strains showed positive reaction for PCR detection targeting biosynthetic gene sequences of iturin A and surfactin. The results provided promising evidences that the bacterial strains isolated from ginseng cultivated soil can be novel biocontrol agents for ginseng cultivaion.
An antifungal Pseudomonas stutzeri YPL-1 produced extracellular chitinase and .betha.-1, 3-glucanase that were key enzymes in the decomposition of fungal hyphal walls. These lytic extracellular enzymes markedly inhibited mycelial growth of the phytopathogenic fungus Fusarium solani. A chitinase from P. stutzeri YPL-1 inhibited fungal mycelial growth by 87%, whereas a .betha.-1, 3-glucanase from the bacterium inhibited growth by 53%. Furthermore, co-operative action of the enzymes synergistically inhibited 95% of the fungal growth. The lytic enzymes caused absnormal swelling and retreating on the fungal hyphal walls in a dual cultures. Scanning electron microscopy clearly showed hyphal degradation of F. solani in the regions interacting with P. stutzeri YPL-1. In an in vivo pot test, P. stutzeri YPL-1 proved to have biocontrol ability as a powerful agent in controlling plant disease. Planting of kidney bean (Phaseolus vulgaris L.) seedlings with the bacterial suspension in F. solani-infested soil significantly suppressed the development of fusarial root-rot. The characteristics of a crude preparation of .betha.-1, 3-glucanase produced from P. stutzeri YPL-1 were investigated. The bacterium detected after 2 hr of incubation. The enzyme had optimum temperature and pH of 40.deg.C and pH 5.5, respectively. The enzyme was stable in the pH range of 4.5 to 7.0 and at temperatures below 40.deg.C, with a half-life of 40 min at 60.deg.C.
Relationship of soil properties and seasonal variation on microbilogical population to-continuous culture and first-time culture of ginseng was investigated by bimonthly from May 1976 to January 1977. pH and P contents of 2 years continuous culture of soil were higher than other culture plot of soil, and contraty to the above, 2 years first-time culture of ginseng soil was conplot of soil, and contraty to the above, 2 years first-time culture of ginseng soil was contained more potassium contents than other culture plot of soil. In microbiological fluctuation with seasonr in various soil conditions, the population, trends of Fusarium spp., Erwiniaspp., and flourescent Psedudomonas spp. were increased in May and July in general, but decreased in the other month. It was observed that in all type of soil, Fusarium spp. was distributed in abundance in and on rihizosphere, and decreased the propagules numbers as soil depth increase. The numbers of Erwinia spp. and fluorescent Pseudo-monas spp. were distributed greater in numbers on the surface zone of soil depth decreasing the numbers along the soil layer increase, and also in 2years continuous culture of soil especially, a great numbers of Erwinia spp. and fluorescent Pseudomonas were evenly distributed in surface zone and rhizosphere. Ginseng disease with a high incidence of bacterial disease in continuous culture of 2 and 4 years was seemed to be associated with soil bacteria that was high in numbers of Erwinia spp. and fluorescent Pseudomonas spp. in May and July.
A severe ginseng root rot disease was occurred and became widespraed in 1973 affecting the ginseng cultivating plot around Kangwha and Gimpo-Gun of Kyunggi province. Soil samples were collected from the area of Wolgot-Myun, Gimpo-Gun, Kuunggi-Do, 1974. We examined general fungi and Fusarium sp. in soil layers and also in different kinds of soil of respective diseased, uncultivated and healthy areas, and found the following results. 1. In the diseased and uncultivated area, the content of moisture, organic matter and silt was greater than in the healthy area. 2. Contray to the above, the healthy area contained a greater amount of inorganic elements such as $P_2O_5$, K,Ca and of soil particle such as Cs and Fs. The degree of pH and content of Mg were even in the three types of soils. 3. General fungi were found in abundance in the diseased and uncultivated soils. It was observed that in all types of areas, general fungi reside in abundance in the rhizosphere, i.e., 10-15cm layers and that the closer the surface, the greater the numbers of fungi. 4. A great number of Fusarium sp. was found in the uncultivated area, and followed diseased and healthy areas. It was observed that in all types of areas, Fusarium sp. distributed in abundance in rhizosphere and that the closer the surface, the greater the numbers of Fusarium sp., with the numbers decreasing as the soil layers increase.
Lee, Sung Woo;Lee, Seung Ho;Lan, Jin Mei;Park, Kyung Hoon;Jang, In Bok;Kim, Ki Hong
Korean Journal of Medicinal Crop Science
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v.24
no.2
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pp.136-142
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2016
Background: Root diseases caused by Cylindrocarpon destructans and Fusarium solani decrease the yield and quality of ginseng. Cylindrocarpon root rot is a major disease caused by replant failure in ginseng fields. Methods and Results: Solarization of infested greenhouse soil was carried out during the summer season after applying green manure (Sudan grass) and Calcium Cyanamide (CC) on the soil. Mycelium and conidia of C. destructans died at $40^{\circ}C$ after 15 h, but they did not die at $35^{\circ}C$ after 15 h. They also died after keeping the soil at $40^{\circ}C$ for 2 h daily for 9 days, and at $45^{\circ}C$ for 8 days, but they did not die at $38^{\circ}C$ for 9 days. Maximum soil temperature was $55.4^{\circ}C$ at 5 cm depth, $48.7^{\circ}C$ at 10 cm, $44.7^{\circ}C$ at 15 cm, $42.5^{\circ}C$ at 20 cm, and $31.9^{\circ}C$ at 30 cm by incorporating green manure into the soil and using solarization. Solarization using green manure mixed with CC was the most effective in decreasing soil-borne pathogens of 2-year-old ginseng. However, the addition of CC decreased the root weight due to the increase in EC and $NO_3-N$. Conclusions: Soil disinfection using green manure and solarization in a greenhouse environment was effective in inhibiting root rot, however, it did not completely kill the soil-borne pathogens.
Park, Se Won;Yang, Hee-Jong;Seo, Ji Won;Kim, Jinwon;Jeong, Su-ji;Ha, Gwangsu;Ryu, Myeong Seon;Yang, Hee Gun;Jeong, Do-Youn;Lee, Hyang Burm
The Korean Journal of Mycology
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v.49
no.4
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pp.441-454
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2021
Fungal diseases including anthracnose, stem rot, blight, wilting, and root rot of crops are caused by phytopathogens such as Colletotrichum species, Sclerotinia sclerotiorum, Phytophthora species, and Fusarium oxysporum and F. solani which threaten the production of chili pepper. In this study, to identify biological control agents (BCAs) of phytopathogenic fungi, potentially useful Bacillus species were isolated from the field soils. We screened out five Bacillus strains with antagonistic capacity that are efficiently inhibiting the growth of phytopathogenic fungi. Bacillus species were characterized by the production of extracellular enzymes, siderophores, and indole-3-acetic acid (IAA). Furthermore, the influence of bacterial strains on the plant growth promoting activity and seedling vigor index were assessed using Brassica juncea as a model plant. Inoculation with Bacillus subtilis SRCM 121379 significantly increased the length of B. juncea shoots and roots by 45.6% and 52.0%, respectively. Among the bacterial isolates, Bacillus subtilis SRCM 121379 showed the superior enzyme activities, antagonistic capacity and plant growth promoting effects. Based on the experimental results, Bacillus subtilis SRCM 121379 (GenBank accession no. NR027552) was finally selected as a BCA candidate.
To study the cause of the injury by continuous cropping and the countermeasure for reduction on it's injury in ginseng cultivation by the period passed since post-harvest, and previous soil management far planting, the injury by continuous cropping was investigated from 2004 to 2005 at the continuous cropping field of National Institute of crop Science in Jungpyong county, Korea. There was negative correlation between the ratio of survived root and the Period Passed since post-harvest. The ratio infected by Cylindrocapon destructans and Fusarium spp. in root was about 81${\sim}$95% at continuous cropping field that passed by 3${\sim}$4 years since post-harvest. Though the previous soil management for planting was somewhat effective to increase the ratio of survival root, but which was not effective to protect the infection of Cylindrocapon destructans and Fusarium spp. in root. There was no significant difference in reducing rotted root between management and nonmanagement. When previous soil management for planting was programed, it should be considered that Cylindrocapon destructans was detected at continuous cropping field that passed by above 10 years after harvesting.
Melons (Cucumis melo L.) are generally grafted onto Cucurbita rootstocks to manage soilborne pathogens such as Monosporascus root rot and v ine decline (MRR/VD) and Fusarium wilt. However, g rafting onto Cucurbita rootstocks reportedly results in the reduction of fruit quality. In this study, the resistance to MRR/VD, yield, and fruit quality of melons grafted onto melon rootstocks were evaluated under greenhouse conditions. Eight melon rootstocks (R1 to R8) were used and the inodorus melon 'Homerunstar' was used as scion. Melon rootstocks R1 to R6 were selected based on resistance to MRR/VD under greenhouse conditions. Non-grafted 'Homerunstar' and plants grafted onto squash interspecific hybrid 'Shintozwa' rootstock (Cucurbita maxima D. ${\times}$ C. moschata D.) served as controls. Grafted melons were cultivated in the greenhouse infested with Monosporascus cannonballus during two growing seasons (summer and autumn). The responses to MRR/VD, yield, and fruit quality differed depending on the rootstocks and growing season. The melons grafted onto 'Shintozwa' exhibited less severe disease symptoms and higher survival rates than non-grafted melons in both seasons. While the melon rootstocks in the summer cultivation did not increase the survival rate compared to non-grafted melons, the melon rootstocks R1 and R2 in the autumn cultivation led to higher survival rates. The melon rootstocks resistant to MRR/VD increased the percentage of marketable fruits and marketable yields. Grafting onto the melon rootstocks caused little or no reduction of fruit quality such as low calcium content, fruit softening, and vitrescence, especially in lower-temperature autumn season. Accordingly, these results suggest that grafting onto the melon rootstocks may increase the tolerance to MRR/VD and the marketable yield without a reduction of fruit quality.
For the genetic development of more powerful antagonistic Pseudomom - YPL-1 as a biocontxol agent against soilborne plant pathogenic Fuaarium solani causing root rot of many important crops, mutants improving the productivity of chitinase were obtained by mutation with UV radiation or NTG treatment, P. stutzeri YPL-M26 (UV mutant) and P. stutzeri YPL-MI78 (NTG mutant) could improve the productivity of chitinase by 2.5 and 2.0 times, and its antifungal activity by 1.7 and 1.5 times, respectively. The antifungal mechanism of P. stutzeri YPL-M26 was caused by lysis of the fungal cell wall by hydrolytic enzymes such as chitinase. The antifungal activity of crude chitinase of P. stutzeri YPLM26 on the mycelial growth of F. solani was observed to be much higher than that of the original strain. The enzymes produced by P. stutzeri YPL-M26 were the same as the original strain in enzymatic properties such as optimal pH and temperature.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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