Hemopoiesis and morphogenesis of the human fetal liver through from 10 to 32 weeks of gestation were investigated by light and electron microscopy. The results obtained were as follows. Hemopoiesis of fetal liver tissue was found from 10 to 32 weeks of gestation, but the hemopoiesis was decreased at 32 weeks of gestation. At the 32 weeks of gestation, matured erythrocytes were observed in the sinusoid, and formation of liver cell cord and portal triad were established. Differentiation of hepatic cell was characterized by the increase of amount of cell organelles within cytoplasm, decrease of hemopoietic cell, morphological change of nuclear envelope from folding form to round form during the developmental period. These results suggest that human fetal liver plays a hematopoietic function until bone marrow and spleen play their function, but morphology of liver at 32 weeks of gestation was differed with structure observed in liver of adult.
A primary culture of human fetal hepatocytes was obtained through a therapeutic abortion process at 26 weeks of gestation period. More than $10^8$ cells were seeded on a plastic plate. These hepatocytes were infected with hepatitis B virus (HBV). The HBV was purified from serum of one chronic HBV carrier. Transformed hepatocytes were subcultured in a 10% FBS-supplemented medium. The morphology of the transformed cell was epithelial-like. The cells from the first pass showed signs of early proliferation and had a latent period of more than 3 months after 6-7 passages. After the rest period, the transformed cell proliferated actively and they were subcultured every three days. Transformed hepatocytes were characterized by detection of the HBV transcript by RT-PCR. The secretion of virions from transformed cells was investigated by PCR with the cell medium. Two types of virions secreted into the culture medium were examined by using the transmission electron microscope. Another approach to study the secretion of virions in to culture medium was carried out with HBV antibody. HBsAg was detected in the culture medium of transformed cells using ELISA and Western blot analyses. These data suggested that the human fetal hepatocyte cell line has been established by infection of HBV, in which this cell line secreted viral particles into the culture medium.
Whole liver transplantation, the currently available treatment of end-stage liver disease, has limitations including serious donor shortage, fatal surgical complications, risk of allograft rejection, and the requirement of life-long immunosuppression. In this study, we investigated the possibility of reconstructing liver tissues in vivo by implanting fetal hepatocytes on polymer scaffolds as a potential method to replace the current treatments. Fetal hepatocytes were freshly isolated from mice and seeded onto porous mesh scaffolds fabricated from polyglycolic acid, a biodegradable synthetic polymer. The seeded scaffolds were implanted into peritoneal cavity of athymic mice for one week. As a control, fetal hepatocytes were implanted without scaffold. One week after transplantation, liver-like tissues formed. Histological and immunohistochemical analyses indicated that the hepatocyles and liver tissue structures (bile ducts) were present in the newly formed tissues. In the control group, no transplanted hepatocytes were observed. Theses preliminary results suggest that liver tissues may be regeneration by transplanting fetal hepatocytes on polymer scaffolds.
Kim, Kyoung Hwan;Park, Jeong-Woong;Yang, Young Mok;Song, Ki-Duk;Cho, Byung-Wook
Animal Bioscience
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v.34
no.2
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pp.312-319
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2021
Objective: Stress-induced cytotoxicity caused by xenobiotics and endogenous metabolites induces the production of reactive oxygen species and often results in damage to cellular components such as DNA, proteins, and lipids. The cytochrome P450 (CYP) family of enzymes are most abundant in hepatocytes, where they play key roles in regulating cellular stress responses. We aimed to determine the effects of the antioxidant compound, methylsulfonylmethane (MSM), on oxidative stress response, and study the cytochrome P450 family 3 subfamily A (CYP3A) gene expression in fetal horse hepatocytes. Methods: The expression of hepatocyte markers and CYP3A family genes (CYP3A89, CYP3A93, CYP3A94, CYP3A95, CYP3A96, and CYP3A97) were assessed in different organ tissues of the horse and fetal horse liver-derived cells (FHLCs) using quantitative reverse transcription polymerase chain reaction. To elucidate the antioxidant effects of MSM on FHLCs, cell viability, levels of oxidative markers, and gene expression of CYP3A were investigated in H2O2-induced oxidative stress in the presence and absence of MSM. Results: FHLCs exhibited features of liver cells and simultaneously maintained the typical genetic characteristics of normal liver tissue; however, the expression profiles of some liver markers and CYP3A genes, except that of CYP3A93, were different. The expression of CYP3A93 specifically increased after the addition of H2O2 to the culture medium. MSM treatment reduced oxidative stress as well as the expression of CYP3A93 and heme oxygenase 1, an oxidative marker in FHLCs. Conclusion: MSM could reduce oxidative stress and hepatotoxicity in FHLCs by altering CYP3A93 expression and related signaling pathways.
This study was made to investigate the ultrastructural changes of the hepatocyte of the maternal liver, and fetal liver by Actinomycin D in Wistar rats at the stage of pregnancy. Peritoneal injection of Actinomycin D to rats carried out gestation day 7 to 9 at the level of $15{\mu}g(11.5{\mu}g/100g$ body wt.), $20{\mu}g(15.8{\mu}g/100g$ body wt.) on each day. Treated animals with saline only were used for controls. Animals were sacrificed on day 15 of gestation. On electron microscopic examination, the hepatocytes of maternal liver given Actinomycin D $15{\mu}g$/ml had evidence of serious cellular damage, for example, hypertrophy of rough endoplasmic reticulum, loss in nucleolar osmiophilia, swelling of Golgi apparatus and change of mitochondrial structure. Maternal liver given Actinomycin D $20{\mu}g/ml$ shown similar changes to that of the $15{\mu}g/ml$ treated animals. But mitochondria of this group were not changed than that of $15{\mu}g/ml$ treated group. In the hepatocytes of fetal liver, changes were more pronounced. The drug produced alteration in nuclei and cytoplasm. The rough endoplasmic reticulum was swollen and there were ribosomes detachement. In addition, damages of mitochondria, Golgi apparatus were detected.
Effects of sera from several fish species on monolayer formation, viability and functions of catfish hepatocytes were investigated to establish a primary hepatocyte culture system for screening endocrine disruptors. Hepatocytes of Korean catfish (Silurus asotus) were attached and formed monolayer using the media supplemented with their own serum or sera from eel and tilapia, but not with fetal bovine serum (FBS). The amount of fish sera (0.5~3%) for monolayer culture of the catfish hepatocytes was less than 1/10 of FBS (5~20%) that is commonly used for primary culture of hepatocytes of other species. The results indicate that FBS can be replaced with sera from some fish species and the fish sera are more effective than FBS in maintaining the shape and functions of the hepatocytes. The primary culture of catfish hepatocytes was maintained monolayer with fish sera for at least 10 days, which makes possible to be used for screening the activities of endocrine disruptors. In conclusion, the primary culture system of hepatocytes with fish sera in the present study could be a useful tool for screening and studying endocrine disruptors.
The present study was undertaken to elucidate the mechanisms underlying the cholesterol-lowering effect of S-allylmercaptocysteine (SAMC) derived from aged garlic. Rat hepotocytes and HepG2 cells were used to determine the short-term effects of SAMC on [$^{14}C$] acetate incorporation into cholesterol, and several enzymatic steps. The cells were grown in Dulbecco's modified Eagle's medium supplemented with 10% fetal bovine serum and treated with 20, 40, 60 and 80 ${\mu}g/ml$ of SAMC. At concentration of 20~40 ${\mu}g/ml$, no significant cells viability effect was noted during those incubation periods. However, at a concentration 60 ${\mu}g/ml$, cell viability decreased approximately 50% compared with the control. The treatment of cells with 5, 10, 15, and 20 ${\mu}g/ml$ of SAMC resulted in a marked of [$^{14}C$]-acetate incorporation into cholesterol. At concentration of 15 ${\mu}g/ml$, the cholesterol synthesis was inhibited 79% in cells. The activities of lipogenic enzymes, fatty acid synthase (FAS), and glucose-6-phosphate dehydrogenase (G3PDH) were measured in culture hepatocytes treated with the inhibitors. The activity of FAS in cells treated with 0.95 nmol SAMC was 19% lower than that of nontreated cells, and no affected G6PDH activity, 3-hydroxy-3-methylglutaryl Co A activity was decreased at concentration dependant manner. The present study demonstrates that SAMC is effective in inhibiting cholesterol biosynthesis.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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