본 연구는 식품포장용 골판지에 사용되는 유기합성 구충제를 대체할 수 있는 천연 구충물질을 탐색하기 위하여 수목의 잎이나 수피 또는 목질부에서 화학성분을 추출하고 그 추출물에 대하여 화락곡나방 유충을 이용한 기피시험을 수행하였다. 아까시나무 목질부와 현사시나무, 수양버들 및 버드나무 수피, 그리고 주목과 비자나무의 잎을 채취하여 아세톤-물(7:3)의 흔합액으로 추출하고 hexane, CH₂Cl₂ ethylacetate(EtOAc)와 물로 분획하여 동결 건조한 후 Sephadex LH-20 칼럼에서 크로마토그래피를 수행하였으며 단리된 물질들은 NMR 및 MS 분석에 의하여 그 구조를 결정하였다. 각 수종의 EtOAc 또는 수용성 분획은 2% 또는 3% 농도로 인쇄용 잉크에 흔합되어 상업용 골판지에 인쇄하고 이를 기피시험을 위한 재료로 사용하였다. 아까시나무 EtOAc용성 분획에서는 robtin과 dihydrorobinetin이, 수용성 분획에서는 leucorobinetinidin이 단리되었으며 현 사시나무 수피의 EtOAc용성 분획은 (+)-catechin, naringenin, aromadendrin, eriodictyol, sakuranetin 및 그 배당체, taxifolin, neosaturanin, p-coumaric acid 및 salireposide 그리고 수용성 분획에서는 aesculin을 단리하였다. 버드나무 수피의 EtOAc용성 분획에서는 다량의 (+)-catechin 이외에 (+)-gallocatechin 및 p-coumaric acid가 분리되었으며 수양버들 수피의 EtOAc용성 분획에서도 (+)-catechin, (+)-gallocatechin, dihydromyricetin 및 myricetin등이 단리되었다.
본 실험에서는 애기달맞이꽃(Oenothera laciniata Hill)를 80% EtOH로 추출하고 추출물을 극성에 따른 용매 분획을 실시하여 분리된 분획의 총 페놀화합물 함량과 DPPH radical 소거, xanthine oxidase 저해활성, superoxide 소거활성 및 nitric oxide 소거활성 및 세포독성 등의 생리 활성을 측정하였다. 본 연구를 통해 애기달맞이꽃은 산소 유리기의 자유기를 소거할 수 있는 우수한 생리 활성물질을 다수 함유하고 있음을 확인 할 수 있었으며 분획 레벨에서의 활성이 대조구 성분 못지않게 우수하게 나타났다. 또한 총 폴리페놀 함량과 세포독성이 가장 높게 나타난 EtOAc 분획물을 농도별로 HL-60세포에 처리한 결과, 세포성장 억제는 농도 의존적으로 나타났으며, 따라서 세포성장 억제효과가 apoptosis 유도에 의한 것이지를 확인하고자, apoptosis 유도에 의하여 나타나는 현상의 하나인 DNA 단편화 현상을 비롯하여 세포 형태학적 변화 및 유동세포분석기를 통한 DNA content을 측정하였다. 그 결과, 애기달맞이꽃 추출물에 의한 세포증식 억제효과는 apoptosis유도에 의해 세포사멸이 일어남을 확인할 수 있었다.
목단피의 mouse 복수암에 대한 항암성을 다른 생약제의 항암성과 비교하여 연구하였다. 천연생약제(목단피, 주목, 울금, 인경쓱, 여정실, 맥문동) methanol 추출물을 hexane, chloroform ($CHCl_3$), ethylacetate (EtOAc), butanol (BuOH)로 fractionation하여 mouse leukemia L1210 cell과 Sarcoma 180 (S-180) cell에 강한 독성을 나타낸 fraction에 대해 mouse 복수암 억제실험을 실시하였다. 복수형 종양세포 S-180을 ICR mouse (male, $6{\sim}7$주령, $23g{\pm}3g$, 처리당 7마리)의 복부에 주사 ($1{\times}10^{6}$ cells/0.1 ml PBS)한 1일 후 부터 10% DMSO에 용해한 시료 ($30{\mu}g/g$ body weight)를 매일 0.1ml씩 10일간 주사하고 수명연장 효과와 몸무게의 변화를 조사하였다. 처리 fraction 중에서 목단피의 EtOAc fraction이 가장 강한 항암성을 보였는데, 수명연장에서는 대조구의 17.2일 (100%)에 비하여 28.7일로서 167%로 연장되었으며, 체중 증가율도 대조구보다 낮았다 (p<0.05). 목단피의 농도별 (5, 10, 30, $60{\mu}g/g$ body weight) 항암효과는 $30{\mu}g$에서 가장 높았고, $60{\mu}g$처리구 에서는 독성이 나타났다. 목단피의 EtOAc fraction으로부터 GC-MS에 의해 잠정적으로 동정된 2-methoxyphenol, 1-(4-hydroxy-3- methoxyphenyl)-ethanone, 8-methyl-2,4(1H,3H)-pteridinedione, 2,5-furandicarboxylic dimethyl ester 가 mouse 복수암 억제에 관련이 있는 주요 화합물로 추정된다.
Japanese anise (Illicium anisatum L.) twigs were collected and ground after drying, then immersed with 50% aqueous acetone for 3 days. After filtration, the extracts were fractionated with n-hexane, chloroform ($CHCl_3$), ethylacetate (EtOAc) and $H_2O$, and then freeze-dried after condensation. A portion of EtOAc soluble fraction (5.7 g) was chromatographed on a Sephadex LH-20 column with various aqueous $MeOH-H_2O$. Compound 2 and compound 3 were isolated from fraction 8 and 5, respectively. Compound 1 and compound 4 were isolated after rechromatography of fraction 7. The isolated compounds were elucidated as (+)-catechin (1), taxifolin (2), taxifolin-3-O-${\beta}$-D-(+)-xylopyranose (3) and quercitrin (4) by spectral and literature data, and by comparison with the authentic samples. Of the isolated compounds, taxifolin (2), taxifolin-3-O-${\beta}$-D-(+)-D-xylopyranose (3) and quercitrin (4) were isolated, for the first time, from the extracts of japanese anise twigs.
담자균류로부터 치매 예방 및 치료 효과를 갖는 생물활성물질을 탐색하기 위한 기초 자료를 확립하기 위하여 56종의 배양 균사체 메탄을 추출물 및 배양 여액의 ethylacetate(EtOAc) 가용성 분획에 대하여 prolylendopeptidase(PEP), acetylcholine esterase(AChE) 및 혈전 응고에 대한 저해활성을 측정하였다. 그 결과 PEP에 대하여 Amanita aspera, Phellinus chrysoloma의 균사체 추출물 및 배양여액의 EtOAc 가용성 분획이 40ppm에서 모두 90% 이상의 저해활성을 나타내었으며 분홍껍질고약버섯(Peniophora quercina), 잎새버섯(Grifola frondosa), Wolfiporia extensa, 좀나무싸리버섯(Clavicorona pyxidata) 및 Phanerochaete soy교교의 배양액이 90% 이상의 저해활성을 나타내었다. AChE에 대하여는 40ppm 농도에서 어느 것도 강한 활성을 나타내지 못하였으나 조개껍질버섯(Lenzites betulina), Phellinus chrysoloma, Wolfiporia extensa, Phanerochaete sordida의 균사체 추출물과 Hypocrea nigricans, Coriolus azureus, 팽나무버섯(Flammuzina velutipes), Phlebiopsis gigantea 및 Bondarzewia montana의 배양여액 EtOAc 가용성 분획이 40% 정도의 저해활성을 나타내었다. 한편 혈전응고 저해활성의 지표로 삼은 thrombin times(TT) assay에서는 Amanita aspera, Oxyporus latemarginata, 분홍껍질고약버섯(Peniophora quercina), 말굽버섯(Fomes fomefarius)의 배양여액 EtOAc 추출물과 Clitocybe clavipes, Trametes versicolor, Phlebiopsis gigantea의 균사체 추출물이 550 ppn의 농도에서 혈전 생성에 걸리는 시간을 2배 내지 3배 연장하는 효과를 나타내었으나 activated partial thromplastin times(APTT) assay에서는 어느 것도 효과를 인정할 수 없었다.
We investigated the contents of crude saponin in the decoctions of Platycodi Radix prepared by the different extraction processes. Each lyophilized decoctions prepared by the different protocol were suspended in water and partitioned with ethylacetate (EtOAc) and n-butanol (BuOH), which gave the EtOAc fraction, BuOH fraction and the remaining water fraction, respectively. The content of crude saponin, which was estimated as the amount of BuOH fraction, and the HPLC profiles of the BuOH fraction were analyzed, and compared each others. The crude saponin content in the decoctions were increased proportionally to the increment of the extraction time, amount of water, extraction temperature and the number of repetition for extraction. Consequently, the optimized conditions were deduced to be suitable and recommendable for the preparation of Platycodi Radix ; the water amount needed for the extraction be 15-20 volumes to crude material, temperature for extraction be optimal at $85{\sim}100^{\circ}C$, extraction time be more than 5 hours and the repetition of extraction was 2 times.
Diabetes mellitus was induced in male Sprague-Dawley rats weighing 200-245g by injection of streptozotocin(STZ) into the tail vein at a dose of 45mg/kg and were divided into seven groups ; normal, diabetic control, and five experimental groups(fractions of hexane, chloroform(CHCl$_3$), ethylacetate(EtOAc), butanol(BuOH) and water($H_2O$)). The rats of all groups were fed on AIN-93 diet and the five experimental groups were orally administered each fraction for 14 days. The body weight and diet intake were monitored daily. The plasma levels of glucose, insulin, cholesterol, triglyceride, HDL-cholesterol, free fatty acid and aspartate and alanine aminotransferase activities were analyzed. Diabetic rats showed the lower weight gain compared to the normal rats. The plasma glucose levels of the CHCl$_3$, and $H_2O$ fraction groups were significantly lower than the other experimental groups. The plasma insulin level of the CHCl$_3$ fraction group was much higher than that of diabetic control group. The plasma cholesterol levels were increased in all the experimental groups. The groups of hexane, BuOH and H2() fractions showed the lower plasma triglyceride levels compared to diabetic control group. The plasma free fatty acid levels were not significantly different in all groups. HDL-cholesterol levels were definitely higher in hexane, CHCl$_3$ and EtOAc fraction groups than that of diabetic control group. In conclusion, administration of CHCl$_3$ and $H_2O$ fractions of methanol extract of Alisma canaliculatum exhibited hypoglycemic effects in STZ induced diabetic rats, showing the possibility of therapeutic use of Alisma canaliculatum to the diabetes mellitus.
Kim, Jungsoo;Lee, Junghee;Lee, Kyung-Tae;Park, Hee-Juhn;Han, Yong-Nam;Park, Jongwon
한국응용약물학회:학술대회논문집
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한국응용약물학회 2003년도 Annual Meeting of KSAP : International Symposium on Pharmaceutical and Biomedical Sciences on Obesity
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pp.97-97
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2003
This study is investigated the effect of Rubus coreanus MIQ. against nephrotoxicity induced by cisplatin in rat. We examined the potency of the extract of R. coreanus fruits by the activity-guided fractionation. The EtOAc- and BuOH fraction, niga-ichigoside F$_1$and 23-hydroxytormentic acid showed significant protective effects as lipid peroxidation in renal tissue and was was not affect the activity of xanthine oxidase and aldehyde oxidase by cisplatin-induced nephrotoxicity. The concentration of glutathione in renal tissue was decreased by cisplatin-induced nephrotoxicity, but was improved by pretreatment of R. coreanus compounds especially in butanol, ethylacetate fraction and 23-hydroxytormentic acid.
본 연구에서는 소목 열수추출물을 용매 순차 분획하여 얻은 EtOAc 분획물을 가지고 감마선 조사(100 kGy)한 후 색상 변화와 항산화활성 향상 변화를 평가하였다. 평가시험으로서 소목 용매 순차 분획물과 선정된 EtOAc 분획물에 감마선을 조사(100 kGy)후 DPPH 라디칼 소거활성에서 4가지 유기용매 분획물(chloroform, ethylacetate, n-butanol, $H_{2}O$) 중 EtOAc 분획물의 전자공여능 $IC_{50}$ 값이 비조사구와 조사구 각각 0.71 및 0.61 ${\mu}g/mL$로 현저히 높았으며, 비조사구와 조사구 각각 $38.5{\sim}91.5%$ 및 $45.7{\sim}94.8%$의 라디칼 소거활성을 보여 조사구의 활성이 높게 나타났다. 또한 감마선 조사(100 kGy)한 EtOAc 분획물의 색상 변화는 명도(L값) 및 황색도(b값)의 경우 조사 후 증가한 반면, 적색도(a값)는 감소하였다. 총 페놀 함량은 비조사구와 조사구 각각 865 및 1195 mg/g으로 조사 후 유의적인 차이를 보였다(p<0.05). Superoxide anion radical 소거활성 시험에서 EtOAc 분획물의 비조사구와 조사구 각각 $16.3{\sim}84.7%$ 및 $20.2{\sim}92.5%$로 조사구의 superoxide anion radical에 대한 소거활성이 높게 나타내었고 첨가수준 50 ${\mu}g/mL$ 이상의 농도에서는 60% 이상의 소거력을 나타내었다. 지질과산화 억제 시험에서 EtOAc 분획물의 비조사구와 조사구 각각 $14.6{\sim}85.6%$ 및 $19.5{\sim}93.4%$로 조사구의 지질과산화에 대한 억제 효과가 높게 나타내었고 첨가수준 0.4 ${\mu}g/mL$와 0.8 ${\mu}g/mL$ 농도에서는 비조사 시료에 비해 유의적으로 높은 활성을 나타내었다(p<0.05). Comet assay를 이용한 EtOAc 분획물의DNA 방어효과 시험에서 생쥐 림프구에서 방사선에 의한 DNA 외가닥 절단 정도를 측정한 결과 TM 값은 정상대조군에서 $3.85({\pm}0.15)$이었고 방사선 조사군의 경우 $22.6({\pm}0.38)$로 증가되었다. 감마선 조사시킨 시료처리군의 경우 10 ${\mu}g/mL$에서 각각 $15.6({\pm}0.28)$, $12.01({\pm}0.31)$로서 DNA의 외가닥 절단에 대한 유의한 억제효과를 관찰할 수 있었다(p<0.05). 이러한 결과는 소목의 구성성분 중 brazilein, brazilin, gallic acid, quercetin 같은 다양한 페놀성 화합물과 플라보노이드의 배당체들이 방사선 조사에 의해 이탈됨에 따른 페놀 함량이 증가하여 항산화 활성도 향상됨을 확인할 수 있었다. 따라서 소목 추출물에 감마선 조사기술을 이용한다면 항산화 활성의 향상과 색택 개선 등 산업적으로 활용도가 높은 천연소재를 제조할 수 있으리라 사료된다.
The antioxidant effects of dichloromethane, ethylacetate or water fraction of kimchi added to the 1% cholesterol diet were studied. Six New Zealand white rabbits in each group were fed either control diet (basal diet containing 1% cholesterol) or experimental diet containing dichloromethane (CH$_2$Cl$_2$), ethylacetate (EtOAc) or water ($H_2O$) fraction of kimchi in the control diet for 16 weeks. The amount of each solvent fraction of kimchi added to the experimental diet was equivalent to 5% of freeze-dried kimchi. Levels of hepatic lipid oxidation expressed as TBARS or peroxide value for the experimental groups were lower than that of control (p<0.05). Liver homogenated of the experimental group containing dichloromethane fraction of kimchi inhibited LDL oxidation in the presence of Cu++ by 46% (p<0.05). The activities of catalase, Glutathione peroxidase (GSH-Px), Cu, Zn-superoxide (Cu, Zn-SOD) and Mn-superoxide (Mn-SOD) of experimental groups were lower than those of control group. Low enzyme activities observed from the kimchi solvent fraction groups might be due to the level of lipid oxidation progressed less in these groups. The most significant antioxidant effects were observed from dichloromethane fraction of kimchi among the experimental groups. The major fatty acids of hepatic phospholipid of rabbit were C18:2 and C18:0. But the major fatty acid profile was changed into C16:0, C18:0, C18:1, and C18:2 when rabbit was fed 1% cholesterol diet for 16 weeks, and this profile was almost the same as in rabbit fed diet containing kimchi solvent fraction. The ratio for unsaturated fatty acid to saturated fatty acid decreased by cholesterol induced diet and it was not corrected by kimchi solvent fractions.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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