4-(p-Nitrobenzyl)pyridine (NBP)의 색깔변화를 이용한 epoxide hydrolase활성 측정법을 사용하여 다양한 미생물 세포유래의 epoxide hydrolase 활성을 측정하고 평가하였다. Epoxide hydrolase의 가수분해 반응에 의해 분해되고 남은 에폭사이드 기질에 의한 NBP alkylation 반응을 통한 색깔변화로 손쉽게 epoxide hydrolase 활성을 측정할 수 있었다. NBP 반응에서 triethylamine을 첨가하여 색깔반응 효율을 높일 수 있었으며, 10mM styrene oxide에 대한 최적 세포 사용량은 12.5mg/ml로 결정하였다. 본 연구에서 얻은 colorimetric assay조건에서 대용량의 미생물 후보군집으로부터 유용한 epoxide hydrolase를 가지는 신규 미생물을 효율적으로 선별할 수 있을 것으로 기대된다.
Park, Jong-Cheol;Hur, Jong-Moon;Hwang, Young-Hee;Choi, Myeong-Rak;Kim, Suk-Nam;Choi, Jong-Won
생명과학회지
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제13권2호
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pp.230-235
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2003
Bromobenzene으로 간독성을 유발한 흰쥐에 생열귀나무 뿌리를 투여하여 bromobenzene 대사계에 미치는 효소활성을 관찰하였다. Bromobenzene은 bromobenzene 2,3-oxide와 bromobenzene-3, 4-oxide로 전환되며, 3,4-oxide는 독성물질로서 epoxide hydrolase에 의해 무독성 bromobenzene-3,4-dihyrodiol로 대사 또는 glutathione S-transferase에 의하여 배설되기도 한다. 중국 민간에서 강장제로 사용하는 생열귀나무는 한방에서 소화불량, 위통 등의 치료에 사용되는 약용식물이다. 생열귀나무의 뿌리 추출물은 흰쥐의 간 epoxide 생성계에 관여하는 aminopyrine N-demethylase, aniline hydroxylase 활성과 epoxide를 대사시키는 glutathione S-transferase 활성에는 변화를 주지 않았다. 그러나 생열귀추출물 500 mg/kg 경구투여군은 eporide를 무독화시키는 epoxide hydrolase 활성에서 bromobenzene 투여로 효소활성이 저하된 대조군보다 33% 활성을 회복시켰다. 따라서 생열귀나무 뿌리는 간독성물질인 bromobenzene 대사에 관여하는 epoxide hydrolase 활성 증가로 인해 간보호작용이 일어나는 것으로 판단된다.
Aerobic cometabolism of cis-1,2-dichloroethylene (c-DCE) and c-DCE epoxide by a butane-grown mixed culture was evaluated. Transformation of c-DCE resulted in the concomitant generation of c-DCE epoxide. Chloride release studies showed nearly complete oxidative dechlorination of c-DCE (approximately 75%). Mass spectrometry confirmed tile presence of a compound with mass-to-charge-fragment ratios of 112, 83, 48, and 35. The values are in agreement with the spectra of a chemically synthesized c-DCE epoxide. Some evidences indicating the involvement of the monooxygenase in the transformation of c-DCE epoxide are: 1) $O_2$ requirement for c-DCE transformation and butane degradation; 2) butane inhibition on c-DCE transformation and vice versa; 3) the inactivation of c-DCE and c-DCE epoxide transformations by acetylene (a known monooxygenase inactivator); and 4) tire inhibition of c-DCE epoxide transformation by c-DCE.
이 연구는 mouse liver의 epoxide hydrolase에 대한 인삼 사포닌 분획들의 효과를 검정하기 위해 고안되었다. Epoxide hydrolase는 반응성을 갖는 수많은 epoxide 중간물질들의 독성 및 발암성으로부터 세포를 보호하는데 중요한 역할을 하는 효소들의 한 group이다. Cytosolic epoxide hydrolase 활성도는 저농도의 사포닌 분획 첨가시에는 농도에 비례하여 활성이 증가되었으나, 고농동에서는 반대효과를 나태냈다. 수일간 인삼 사포닌 분획을 처리한 epoxide hydrolase의 활성도는 무처리에 비해 유의하게 증가되었음이 관찰되었다.
A new polyacetylene compound with cytotoxic activity against L1210 cells having diyne-ene and epoxy moiety, named panaxyne epoxide, was isolated from Panax ginseng C.A. Meyer. The chemical structure of the polyacetylene was determined to be tetradeca-13-ene-1,3-diyne-6,7-epoxide by UV, IR, $^1H-NMR,\;^{l3}$C-NMR and mass spectra.
다양한 라세믹 에폭사이드 기질에 대한 입체선택적 가수분해 반응을 촉매하는 epoxide hydrolase 활성을 측정할 수 있는 미생물 세포 기반의 자외선 활성 분석법을 최적화하였다. 2.5 mg/ml의 세포 농도에서도 비교적 쉽게 흡광도 변화량을 인식할 수 있는 흡광도 범위인 0.5 이상을 얻을 수 있고, 반응 동력학 분석에도 응용할 수 있었다. 기존의 GC, HPLC 분석 법 보다 분석 시간을 줄일 수 있으며, 효소를 별도로 분리$\cdot$정제하지 않고 미생물 세포 자체의 epoxide hydrolase활성 분석이 가능하므로 상업적 특성이 우수한 epoxide hydrolase을 가진 미생물을 효율적으로 선별하는데 응용될 수 있을 것으로 기대된다.
Soluble epoxide hydrolase (sEH) is a metabolic regulator of epoxyeicosatrienoic acids (EETs). EETs have many beneficial effects, vasodilation, anti-diabetes, anti-inflammation, cardiovascular protection, renal protection. Therefore, selective sEH inhibitors have a potential for treating these diseases. In the present study, screening methods for sEH inhibitors using PHOME ((3-phenyl-oxiranyl)-acetic acid cyano-(6-methoxynaphthalen-2-yl)-methyl ester) and 14-15-EET as substrates were established. To determine selectivity, microsomal epoxide hydrolase (mEH) inhibition assay was also developed using styrene oxide as a substrate of microsomal epoxide hydrolase. Our results obtained from 12-[[(tricyclo[3.3.1.13,7]dec-1-ylamino)carbonyl]amino]-dodecanoic acid (AUDA) used as a positive sEH inhibitor and valpromide used as a positive mEH inhibitor showed that these methods are useful for discovery of drug candidates.
A yeast strain utilizing styrene epoxide as a sole carbon and energy source was isolated from soil samples for the production of enantiopure of styrene epoxide by kinetic resolution. The strain, identified as a Rhodosporidium toruloides SJ-4, expressed an epoxide hydrolase which preferentially converted (R)-styrene epoxide into the corresponding diol. A maximum activity of 135 U/L was observed when biomass (dry cell mass) reached 6.7 g/L at 21 h of batch culture. Under the partially optimized reaction conditions ($35^{\circ}C$ and pH 8.0), the optically pure (S)-styrene epoxide was obtained with the yield of 21% when the initial substrate concentration was 100 mM. The reaction was completed at 9 h.
For the biological survey, effects of Ailanthi Cortex Radicis, the root bark of Ailanthus altissima(Simaroubaceae) on epoxide hydrolyzing enzymes were checked. The methanolic extract and its chloroform fraction were shown to activate the liver metabolizing enzyme system including epoxide hydrolase system which was monitored by activities of transaminase, lactate dehydrogenase, alkaline phosphatase and epoxide hydrolase system in bromobenzene treated rats. But they showed no effect on glutathione S-transferase activity.
Apergillus niger LK의 epoxide hydrolase 활성을 이용하여 chiral styrene oxide를 제조할 수 있는 hollow-fiber 반응기 기반의 비대칭 분할 시스템을 개발하였다. 라세믹 styrene oxide 기질을 dodecane 유기용매에 용해시켜 hollow-fiber 반응기의 lumen 부위로 공급하였으며, 생촉매인 A. niger LK 미세분말은 shell 부위로 공급함으로써 막 표면에서 비대칭 분할 반응을 수행하였다. 반응 산물로 생성되는 phenyl-1,2-ethandiol에 의한 epoxide hydrolase 활성 저해효과를 감소시키기 위하여 2번째 hollow-fiber 반응기에서 완충용액을 이용하여 diol을 추출하여 제거시켰다. 2성분 용매를 사용한 cascade형 hollow-fiber 반응기 시스템을 이용하여 광학적으로 순수한 (ee > 99%) (5)-styrene oxide를 19.5% (이론 수율 대비 39%)의 수율로 얻을 수 있었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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