Immunoglobulins (IgY) were isolated from egg yolk of hens immunized with bovine serum albumin(BSA). The stability of anti-BSA IgY against heat and pH was investigated. Antibody activity was measured by enzyme linked immunosorbent assay. IgY was relatively heat-stable and most of the antibody activity remained after heating up 65$^{\circ}C$ for 30 minutes. IgY was stable at pH 5-11. However, inactivation of IgY was observed below pH 4, or above pH 12. Inactivation of IgY proceeded rapidly at low pHs(pH 2-3). Most of the antigen binding activity was lost at low pHs probably because of some conformational changes.
The present was undertaken to establish a model for the control of adipocytes differentiation by using antibody from egg yolk. The emulsion of membrane protein of 3T3L-1 cell membrane protein with the complete Freund's adjuvant was firstly immunized in layer. Second and third boosting were undertaken with two weeks intervals by injection of the emulsion of the same antigen with the incomplete Freund's adjuvant. After 4 week of the first immunization, eggs were collected and antibody (IgY) was purified from egg yolk. The purity of IgY was 60-98% determined by single radial immunodiffusion (SRID) methods. Titer value of the antibody showed high reactiviy for the preadipocytes membrane protein measured by ELISA. When the IgY was added in the test media containing either 2.5% porcine serum or 10% FBS(control), the differentiation of 3T3L-1 cells and Glycerol-3-phosphate dehydrogenase(GPDH) activities was significantly decreased compared to the control cells(p〈0.05). When mice were subcutaneously injected with IgY raised against membrane protein of 3T3L-1 cells for 3 weeks, adipose tissue mass around ovary was tended to be decreased in female mice compared to those of control mice. It is suggested that a potential for manipulating of lipid accumulation through decrease in 3T3L-1 cell differentiation and fat accumulation in female mice by IgY treatment.
본 연구는 식중독은 물론, 아토피성 피부염의 원인물질로 알려져 있는 포도상구균 장내독소 B(Staphylococcal enterotoxin B; SEB)에 대한 특이 난황항체를 개발하고자 실험을 실시하였다. 우선, SEB 유전자를 클로닝한 다음, 대장균 발현시스템을 이용하여 약 30 kDa 정도의 재조합 SEB 단백질을 생산하였다. 재조합 SEB 단백질을 산란계에 2주 간격으로 3회 면역접종을 실시하고, 혈청 및 난황 내 항체가를 측정한 결과, 면역 후 4주경에 항체가가 최고치에 달하였으며, 산란계로부터 획득한 난황항체를 이용한 Western blot 결과, 재조합 SEB 단백질은 물론, 상용화 SEB 단백질과도 특이적으로 반응한다는 것을 규명하였다. 결론적으로, 식중독과 아토피성 피부염 등의 원인물질로 알려진 SEB에 특이적인 난황항체를 생산에 성공하였으며, 이러한 특이적인 난황항체는 식중독 및 아토피성 피부염의 예방 및 치료에 활용 가능할 것으로 사료된다.
Although several methods have been developed and applied to control swine respiratory diseases, the disease induces severe economic impact to swine industry worldwide. As one of the new trials, application of egg yolk antibody(IgY) was attempted for the purposes and immune response in sera and egg yolk was analysed with ELISA in previous study. In this study, immunological specificity of the IgY was analysed by Western blot analysis. In the analysis of causative agents of atrophic rhinits, B bronchiseptica and P multocida 4D, proteins of 33, 40, 43, 67 and 141 kDa were specifically reacted with IgY Also, 40 and 110 kDa proteins were identified as the major immunogens in P multocida 3A. In A pleuropneumoniae serotypes 2 and 5, 40 kDa and 47 kDa proteins were found to be the major reactive ones. These results suggested that egg yolk antibodies from immunized hens was specific with antigens injected into hens and partially purified antigens, outer membrane proteins and dermonecrotic toxin, were more effective than bacterin for the production of specific antibody.
닭을 이용한 egg yolk immunoglobulin (IgY)의 생산과 이용 가능성을 조사하기 위하여 pepper mild mottle virus (PMMoV)로 닭을 면역하였다. Ring-test로 달걀의 난황에서 분리 정제한 IgY의 역가를 조사한 결과 IgY의 최고 역가는 1:2,560이었고 달걀 l 개에서 대략 $60{\sim}80 mg$의 IgY를 얻을 수 있었다. 최고역가를 갖는 IgY를 이용하여 Gelrite gel 이중확산법, 효소면역항체법 (ELISA), 조직자국면역반응법을 실시한 결과 간접면역효소항체법의 PMMoV 검출 감도는 1 ng/ml 이었고, 검정법의 바이러스 검출감도와 특이도는 IgG와 비슷한 경향을 보였다. 그러므로 한 마리의 닭으로부터 대량으로 생산 가능한 IgY는 식물바이러스에 대한 항체생산과 혈청학적 검정에 유용할 것으로 생각한다.
Preventive and therapeutic effects of egg yolk antibody, immunoglobulin Y (IgY), against canine parvovirus (CPV) was evaluated in 25 pups orally challenged with CPV-2a. Oral administration of IgY using powder, paste and coated paste delivery systems was compared. Each type of IgY was administered orally for 17 days from 3 days before challenge. The group of pups administered coated IgY showed mild symptoms such as a moderate decrease in total white blood cell count, no depression, vomiting and diarrhea when compared with other groups. The overall clinical score of the group of pups administered coated IgY was significantly lower than that of the challenge control group. However, mortality did not differ among groups because not all pups received symptomatic treatment. These results implied that oral treatment of coated IgY could improve therapeutic effects against CPV challenge if pups received symptomatic treatment.
본 시험은 오리 사료 내 난황항체제제 첨가 시 생산성, 혈액 특성, 장내 미생물 및 면역글로불린에 미치는 영향을 조사하기 위하여 수행하였다. 1일령 오리(Cherry valley) 총 300수를 공시하여 5처리 3반복, 반복당 20수씩 공시하여 6주간 시험을 실시하였다. 처리구는 항생제를 첨가하지 않은 처리구(NC, negative control), 항생제 처리구(PC, positive control), 난황항체제제 0.1% 첨가구(T1), 난황항체제제 0.5% 첨가구(T2) 그리고 난황항체제제 1.0% 첨가구(T3)로 나누어 실험을 실시하였다. 종료 시 체중은 난황항체제제 첨가구와 항생제첨가구가무항생제처리구보다 유의적으로 높았고(P<0.05), 증체량 역시 난황항체제제 첨가구와 항생제 첨가구가 무항생제 처리구에 비해 높게 나타났다(P<0.05). 하지만 전 기간에 대한 사료 섭취량과 사료 요구율은 처리구간에 통계적인 유의차가 나타나지 않았다. 6주간 사양 T실험 후 혈액 생화학 및 혈구 분석 결과, 난황항체제제 0.1, 1.0% 첨가구에서는 total cholesterol 함량이 무항생제 처리구에 비해 다소 감소하는 경향을 보였으나, 통계적인 유의차는 없었다. 또한 AST와 ALT 함량 역시 처리구 간에 유의적인 차이를 보이지 않았다. 오리의 맹장 내 유산균 수는 난황항체제제 0.1와 0.5% 급여 시 다른 처리구에 비해 가장 높았으며(P<0.05), 대장균 수는 난황항체제제 수준이 증가함에 따라 감소하는 경향을 보였으나, 통계적 유의차는 없었다. 또한 혈청 내 면역글로불린 함량에도 처리구간에 유의적인 차이는 나타나지 않았다. 결과적으로 오리 사료 내 난황항체첨가 시 오리의 생산성을 개선시키고, 장내 미생물 균총에 효과적인 것으로 나타났으나, 아직까지 국내에서는 난황항체제제 첨가에 따른 사양 시험과 관련된 연구가 부족하다는 점을 감안할 때 향후 이에 대한 많은 연구가 필요할 것으로 사료된다.
Immunoprophylatic effect of IgY against B. bronchispetica was proven with 100% preventive rate in mice administrated with IgY with antibody titer 1:640~1:2,560. Intramuscular administration was more efficient than oral administration. This phenomenon was also observed in the therapeutic effects of IgY after challenge with B. bronchseptica in mice. In the field trials with the egg yolk antibodies from hens immunized with combined antigens with B. bronchiseptica and parvovirus, curing rates in dogs with severe clnical signs such as bloody diarrhea were 81.6% and 86.7% by intramuscular or subcutaneous administration of IgY, respectively. Safety of the antibodies in dogs was proven without any side effects such as vomiting, edema, fever, etc. by adminstration of double doses for 7 days. These results indicated that the egg yolk antibodies could be used as effective prevention and treatment of alimentary and respiratory diseases in dogs.
Salmonella typhimurium 항원에 의해서 면역된 계란 특이항체(IgY)를 분리 정제하여, Anti-S. typhimurium 항체의 온도에 대한 활성을 실험한 결과 6$0^{\circ}C$에서 30분 가열시 91.5%, $65^{\circ}C$에서 15분 가열 시 각각 73.2%의 활성도를 나타내었으며, 8$0^{\circ}C$에서 15분간 가열 시는 거의 활성이 없는 것으로 나타났다. pH에 대한 안정성은 pH 7부터 pH 4까지는 각각 98.7%의 활성도를 유지하다가 pH 3부터 급격히 감소하여, pH 2에서는 9.6%로 거의 활성도를 나타내지 않았다. 항균활성은 생균수 측정에서는 항균활성을 확인할 수 없었으나, 응집반응과 disc diffusion susceptibility test에서 측정한 anti-S, typhimurium 항체의 항균활성도는 미약하나 확연한 미생물 억제현상을 확인할 수 있었다. 이상의 결과에서, 본 실험에서 사용된 IgY는 항원에 대한 항체특성 및 항균효과 등을 고려해 볼 때 앞으로 식중독균 제거 및 예방 치료뿐만 아니라 식품산업 소재, 각종 질병예방을 위한 의약품 소재, 연구용 kit와 진단용 kit 및 축산분야 등 다양한 분야에서 응용될 수 있으리라 기대 된다
Salmonella typhimurium 항원에 면역된 산란계의 계란항체(IgY)생산 및 증가를 측정한 결과, 산란계가 이들 항원에 면역반응을 일으켜 2주 후 혈청과 난황에서 정상군에 비하여 뚜렷한 항체가 생성능을 보였으며. 혈청내의 IgG생성에 비하여 계란항체(IgY)의 생성이 다소 낮은 것으로 나타났다. 혈청 및 난황내의 단백질 함량은 정상군에 비하여 약간 높은 경향을 나타내어 산란계의 혈청 및 난황내의 단백질이 이들 항원에 의하여 증가하는 것으로 나타났다. DEAE-Sephacel column을 통과한 분획은 두 개의 peak를 나타내었다. 각 분획의 IgY농도를 ELISA법으로 확인한 결과 시험관 350-635$m\ell$에 해당되는 두번째 peak에서 대부분 측정되었다. 분리 정제된 IgY의 분자량을 측정한 결과, heavy chain 72-75KD, light chain 30-40KD정도였다. 이상의 결과에서, 본 실험에서 사용된 IgY는 항원에 대한 특이성 및 생화학적 특성 등을 고려해 볼 때, 식품산업 소재, 의약품 소재, 연구용 kit와 진단용 kit 및 축산분야 등 여러 분야에 응용될 수 있으리라 기대된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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