한국독성학회 2002년도 Molecular and Cellular Response to Toxic Substances
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pp.164-164
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2002
The estrogenic activity of 47 plant extracts was assessed by reporter gene assay using MCF-7 breast cancer cell lines stably transfected with luciferase reporter gene. The estrogenic activity of food extracts was expressed as 17${\beta}$-estradiol(E2) equivalent concentration(EEQ), the concentration of E2 that resulted in the same relative luciferase unit(RLU) of the food extract of 0.2mg/$m\ell$.(omitted)
To establish whether or not androgens is responsible for the induction of vitellogenin(Vg) synthesis and secretion, primary hepatocytes prepared from immature eels were used. The results are follows: 1. Eel hepatocytes were prepared using a collagenase perfusion technique. The isolated cells attached efficiently to fibronectin-coated dishes and subsequently formed monolayers in serum-free medium. These cultures maintained in medium for 10 days with minimal cell loss. 2. Estradiol-17$\beta$(E2) alone was insufficient to induce Vg synthesis. The combination of E2 with methyltestosterone(MT) markedly stimulated Vg synthesis. High vg production occurred in MT concentration from 10-6~10-5M in the presence of E2 (10-6M). Testosterone and androsterone were also effective, but progesterone was not effective in inducing Vg synthesis. Neither MT alone nor testosterone and androsterone alone had any effect on Vg synthesis. 3. E2-primed hepatocytes showed Vg synthesis in both media with and without hormones 1 day after culture. In the cultures with the vehicle, MT, or progesterone, the rate of synthesis seemed to decrease with time. But the combination of E2 and MT showed an intense increase in Vg synthesis. Hepatocytes isolated from E2-primed eels also required androgens for continuating of Vg synthesis. 4. These results demonstrate that androgens act together with E2 in synthesis and secretion of eel Vg.
We studied oocyte steroidogenesis in blacktip grouper Epinephelus fasciatus ovarian follicles during vitellogenesis. Vitellogenic oocytes with average diameters of 0.45, 0.48 and 0.50 mm were incubated in vitro in the presence of $[^3H]17{\alpha}$-hydroxyprogesterone as a precursor. The steroid metabolites were analyzed using thin layer chromatography (TLC), high performance liquid chromatography (HPLC), and gas chromatography-mass spectrometry (GC/MS). The major metabolites in the vitellogenic oocytes were androstenedione ($A_4$), testosterone (T), estradiol-$17{\beta}$ ($E_2$), and estrone ($E_1$). The metabolites of androgen ($A_4$ and T) were higher in the 0.50-mm oocytes than in the 0.45- and 0.48-mm oocytes, while the estrogen metabolites (E2 and E1) were lower in the 0.50-mm oocytes. These results suggest that 0.50-mm oocytes are fully vitellogenic following initiation of the maturation process.
조피볼락, S. schlegeli 치어에 $estradiol-l7{\beta}\;(E_2)$와 $17{\alpha}-methyltestosterone$ (MT) 그리고 고수온을 처리하여 성분화에 미치는 영향을 조사하였다. 실험어는 출산 후 56일부터 72일까지 $E_2\;20,\;40,\;60\;{mu}g/g\;diet$ 농도로 경구투여 하였고, MT는 $20, 50{\mu}g/g diet$ 농도로 경구투여 하였다. 고수온 처리는 대조구 그리고 호르몬 처리구와 비교하여 약 $10^{\circ}C$ 이상인 $27.0{\pm}0.5^{\circ}C$로 사육하였다. 출산 후 56일까지 성분화 과정에서, 생식소는 대부분 생식원세포로 구성되어 있어 성적으로 미분화 단계였다. 그러나 출산후 128일째에, 난소는 난소강파 난소박판으로 구성되어 있고, 난원세포와 주변인기난모세포는 난소박판에 분포하고 있다. 그리고 정소는 많은 정세관으로 이루어 졌고, 이들 세관내에는 정원세포들이 무리를 지어 분포하고 있긴 또한 색소포들이 정소의 수질층과 기부에 드문드문 분포하고 있다. 성비에 있어, 대조구와 비교하였을 때 모든 $E_2$, 처리구는 더 많은 암컷이 관찰되었고, 반면에, 모든 MT 처리구와 고수온 처리구에서는 더 많은 수컷이 관찰되었다. 이러한 결과들에서, 성스테로이드 호르몬의 농도와 종류 그리고 고수온 사육이 조피볼락의 성분화 과정에 있어서 성결정에 영향을 주고 있다고 볼 수 있다.
Objective: To elucidate 1) whether there are any differences in the urine concentrations of steroid hormone metabolites between patients with leiomyoma and normal controls 2) the correlation between urinary profiles of steroid hormones and leiomyomas of the uterus according to their type, location, volume, and weight. Materials of Methods : The study population consisted of 37 premenopausal patients with uterine leiomyoma and the control group consisted of 25 premenopausal normal volunteer women without uterine leiomyoma. Confirmation of the existence of uterine leiomyoma was done by ultrasonography and histopathological examination after surgery. The volume of the leiomyoma was estimated by trans-abdominal and/or trans-vaginal ultrasonography. The Leiomyomas were divided into 3 types (subserosal, intramural and submucosal). Seventeen patients had subserosal type of leiomyoma, 10 with the intramural type and 10 with the submucosal type. The locations of the leiomyoma were also divided into 3 groups (fundus, body and isthmus). Seventeen patients showed a fundus location, 10 in body, and 10 in isthmus. We compared urinary profiles of the endogenous steroids between patients with leiomyomas and normal controls, and also investigated the relationship between urinary profiles of the endogenous steroids and leiomyomas according to their type, location, volume and weight by using highly sensitive Gas Chromatography-Mass Spectrometry (GC-MS) system. Results: The mean ages of the patients with leiomyomas and the control group were $43.1{\pm}5.6$ and $40.6{\pm}7.2$ years, the weights were $63.4{\pm}7.3$ and $59.4{\pm}8.1\;kg$, and their heights were $155.4{\pm}4.8$ and $159.3{\pm}4.8\;cm$ respectively. Seventeen patients had subserosal, 10 had intramural, and 10 had submucosal leiomyomas. There were 17 patients with leiomyoma located in fundus, 10 in body and 10 in isthmus. $17{\beta}$-estradiol, 5-AT, 11-keto ET, $11{\beta}$-hydroxy An, $11{\beta}$-hydroxy Et, THS, THA, THE, a-cortolone, a-cortol, $\beta$-cortol, $11{\beta}$-OH Et/$11{\beta}$-OH An and E2/E1 were significantly increased in patients with leiomyoma than in the control group. $17{\beta}$-estradiol was significantly increased in the intramural and the submucosal types than in the subserosal type. There was no significant difference in the concentrations of urinary steroids according to the locations of leiomyomas. There was no significant relationship between the concentration of urinary steroids and the volume of the leiomyomas. $17{\beta}$-estradiol significantly decreased as the weight of uterus increased (r=-0.322, p=0.04). Conclusion: The concentrations of steroid hormone metabolites were generally increased in patients with leiomyoma but were not significantly related to the volume and weight of the leiomyomas. Our study suggests that steroid hormones may be involved in the initiation of leiomyomas but may not be involved in their progression. In addition, the concentrations of steroid hormone metabolites are not related to the leiomyoma type and location.
본 연구는 체세포 복제란 이식우의 분만에 있어서 혈중 스테로이드호르몬, TGF-${\beta}_1$ 농도와 분만지연의 상관 관계를 살펴보고자 실시하였다. 대조군으로는 인공수정(AI)을 통하여 임신한 암소(cow)들을 사용하였다(AI-R). 모든 AI-R들은 자연분만(n=5, 임신 $284{\pm}0.71$일)을 하였다. 분만징후를 보이지 않는 체세포 복제란 이식우(n=5, SCNT-R)들은 분만 예정일보다 10일 정도 지난 임신 292일째에 제왕절개(Caesarean section, C-sec)를 실시하여 분만하였다. 혈액 및 태반 샘플을 분만 전.후에 채취하여 형태 및 중량 등을 측정하였다. 혈장호르몬인 Progesterone(P4)와 Estradiol-$17{\beta}$(E2) 농도는 방사선동위원소 면역 분석 시험(RIA) 방법을 이용하여 측정하였다. 혈장 및 태반분엽의 TGF-${\beta}_1$ 농도는 ELISA 방법으로 측정하였다. SCNT-R에서 회수한 태반의 무게는 AI-R의 것과 비교하여 유의적으로 무거웠다(p<0.05). 분만 직전 SCNT-R들의 혈장 내 P4 농도는 AI-R들의 그것과 비교하여 유의하게 높았다(p<0.01). 하지만 SCNT-R들의 혈장 내 E2 농도는 AI-R과 비교하여 상대적으로 낮게 나타났다(p<0.01). 한편, 분만 전.후 SCNT-R들에서 혈장 또는 태반분엽의 TGF-${\beta}_1$ 단백질 발현 수준은 AI-R들과 비교하여 각각 유의적으로 높은 수준을 유지하였다(p<0.01). 이상의 결과를 종합하여 보면, 분만 시 P4 및 E2의 이상 발현과 높은 수준의 혈장 및 태반 내 TGF-${\beta}_1$ 단백질은 체세포 복제태아의 분만지연을 야기하는 중요한 요인들 중의 하나일 것이라 사료된다.
Al and Cd-induced inhibition of vitellogenin (VTG) production was examined at the estrogen receptor (ER) level in rainbow trout Oncorhynchus mykiss hepatocytes. The binding of $[^3H]$$estradiol-17\beta\;(E_2)$ to hepatocytes reached a plateau 3 days after addition of $E_2\;(2\times\;10^{-6} M)$to the medium. The binding activity was linearly reduced with the increased concentrations $(-10^{-5}\;M)$ of 4-hydroxy-tamoxifen (4-OHT) and specific binding linearly increased with the increased doses of $[^3H]\;E_2$, indicating that the radioligand bound to ER. Al $(-10^{-4}\;M)$and Cd $(10^{-6}\;M)$ as well as 4-OHT $(10^{-6}\;M)$ significantly reduced the $[^3H]\;E_2$-binding activity by $3040\%$, while they completely inhibited VTG production. Al and Cd had no effect on $E_2-human$$ER\alpha$ binding activity at any concentrations used $(-10^5\;nM\;each)$. These results suggested that Al and Cd inhibited VTG production in part by interfereing with the ER level. Inhibitory effects of these metals on the $E_z-dependent$ upregulation of ER activity are also discussed.
Phthalate esters are used extensively as a plasticizer in the manufacture of plastic products such as PVC bags and medical devices. Recently, phthalate esters have been shown to induce endocrine system mediated responses. However. only a Jew studies have been conducted for estrogenic activity of phthalate esters. In this study estrogenic activities of seven phthalate esters. butyl benzyl phthalate (BBP), di(2-ethylhexyl) phthalate (DEHP), di-n-butylphthalate (DBP), diethylphthalate (DEP), di-n-pentylphthalate (DPP), di-n-propylphthalate (DPrP) and dicyclohexylphthalate (DCHP), were examined in vitro using E-screen assay and competitive binding assay. From the E-screen assay, BBP. DEHP. DBP and DEP showed weak estrogenic activity at the concentration of 5 $\mu\textrm{M}$. The relative proliferative effect (RPE) and the relative proliferative potency (RPP) were 50~70% and 0.01%. respectively, when compared with 500 pM of 17$\beta$-estradiol (E2). In competitive binding assay with the rat uterine estrogen receptor (ER), BBP and DEP showed weak binding potency [(l/$10^4$~1/$10^5$ of E2] while DEHP and DBP scarcely bound to ER. These results suggest that some phthalate esters have weak estrogenic activities in vitro.
4-nonylphenol (4-NP)이 해산어류인 조피볼락, Sebastes schlegeli의 혈장 vitellogenin (VTG), alkaline-labile protein phosphorus (ALPP), calcium(Ca), glutamate pyruvate transaminase (GPT) 및 hepatosomatic index (HSI)에 미치는 영향을 조사하였다. 실험어에 3일간격으로 $estradiol-17{\beta}$ ($E_2$, 5 mg/kg B.W.) 또는 4-NP(0, 10, 50, 100및 200 mg/kg B.W.)을 복강에 2번 주사한 후, 7일째에 채혈과 적출을 통해 혈장과 간장을 수집해 분석이 실시되었다. 대조 실험어에는 용매로 사용된 70% 에탄올만이 투여되었다. $E_2$ 투여 실험어의 혈장 단백질을 전기 영동상으로 분석한 결과 약 170 kDa의 위치에서 짙은 VTG 밴드가 관찰되었으나, 용매만 투여한 대조 실험어의 혈장에서는 동일 밴드가 관찰되지 않았다. 4-NP 투여한 모든 실험어의 혈장 단백질에서는 $E_2$ 투여 실험어와 동일한 VTG 밴드가 관찰되었다. 혈장 ALPP와 Ca 농도도 4-NP 투여 실험어에서 $E_2$ 투여 실험어와 유사하게 증가하였으며, 이들 농도 변화는 VTG 합성과 더불어 증가하는 경향을 나타냈다. 혈장 전위효소인 GPT와 HSI도 $E_2$ 투여 실험어와 유사하게 4-NP가 투여된 모든 실험어에서 급격히 증가하였다. 이상의 결과로부터 연안생태계 내에서 서식하는 어류가 4-NP과 같은 내분비 장애물질(Endocrine Disrupting compounds, EDCs)에 의해 영향을 받는지를 규명하기 위한 생물학적 지표로서 VTG와 더불어 혈장 ALPP와 Ca이 사용가능 할 것으로 판단된다. 또한, 조피볼락과 같은 해산어가 EDCs에 노출되어 VTG가 합성될 때 간장 기능의 손상으로 혈장 전위효소인 GPT가 일시적으로 종가하고 간장도 비대해져 HSI가 높아지는 것으로 판단된다.
The gonadosomatic index (GSI), sex steroid hormones and gonadal development of roughscale sole Clidoderma asperrimum cultured in indoor tank were investigated to evaluate its sexual maturation and reproductive cycle. The highest GSI values of female and male were $6.91{\pm}4.03$ (May) and $0.16{\pm}0.08$ (August), respectively. The reproductive cycle would be classified into four successive developmental stages: growing stage (December to February), maturation stage (March to April), ripe and spawning stage (May to June), recovery and resting stage (July to November). The highest plasma testosterone (T) and estradiol-$17{\beta}$ ($E_2$) levels of female were $259.4{\pm}76.8$ and $633.3{\pm}182.5$ pg/mL, respectively in May. Also $17{\alpha}$, $20{\beta}$-dihydroxy-4-pregen-3-one ($17{\alpha}$, $20{\beta}$-OHP) levels of female peaked in April before spawning season ($244.2{\pm}42.5$ pg/mL). The highest plasma testosterone (T) and 11-ketotestosterone levels of male were $231.0{\pm}46.0$ and $273.9{\pm}54.5$ pg/mL, respectively in April. But there was no significant difference in $17{\alpha}$, $20{\beta}$-OHP.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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