Cathepsin D (CtsD)는 아스파르트산 단백질 분해효소로서 cytochrome C의 방출을 유도하여 apoptosis 기전을 활성화시킨다. 본 연구에서는 3T3-L1 지방전구세포에서 CtsD 발현 조절에 관여하는 microRNA에 대해 조사하였다. 먼저 지방전구세포 사멸시 CtsD 발현 변화를 관찰하기 위하여 DNA damage agent인 doxorubicin을 3T3-L1 세포주에 노출시켜 CtsD 발현이 증가함을 확인하였다. 또한 지방전구세포주에서 CtsD가 과발현되면 세포 생존율이 감소하였다. miRanda program을 이용하여 CtsD 유전자를 표적으로 하는 microRNA를 탐색하여 miR-145를 선발하였다. Luciferase reporter assay에 의해 miR-145가 CtsD 유전자의 3' UTR 부위에 결합하여 luciferase 활성을 감소시킴을 관찰하였다. 3T3-L1 세포주에 miR-145 mimic을 도입한 결과 CtsD mRNA 발현과 단백질 수준이 감소하였다. 또한 세포주에 doxorubicin을 처리한 결과 CtsD 유전자 발현 증가와 상반되게 miR-145 발현이 감소하였다. 이외에도 miR-145 inhibitor을 세포에 도입하면 세포 생존율이 감소하였다. 이러한 결과는 지방전구세포의 세포사멸에 CtsD가 관여할 수 있으며, miR-145에 의해 CtsD 발현이 직접 조절되고 있음을 나타낸다. 따라서, 지방전구세포의 사멸을 유도하기 위해서는 miR-145 발현 제어가 주요한 표적이 될 수 있을 것으로 생각된다. 본 연구결과는 향후 비만 예방 및 치료를 위한 지방세포 사멸기전 규명에 중요한 기초 자료를 제공할 수 있을 것으로 기대한다.
항암제로 알려진 cisplatin과 t-BHP를 토끼에 투여하여 유도된 급성 신부전 시 산조인 추출액을 처리하였을 때 신장 세포의 보호에 미치는 항산화 효과를 조사하였다. 신장을 분리한 후 신피질 절편 실험에서 세포의 손상을 유발하는 지질과산화 및 LDH 실험에서 t-BHP 단독 처리 시 대조군에 비하여 각각 3배, 5배 이상 증가하였으나 산조인 추출액 0.5%를 동시 처리하였을 때는 대조군 수준으로 감소하였다. Creatinine 측정과 지질과산화 실험에서 cisplatin $5mg{\cdot}kg^{-1}$을 복강 투여한 군의 creatinine 농도가 $2.13{\pm}0.1mg{\cdot}dl^{-1}$로 나타났으나 산조인 추출액 $50mg{\cdot}kg^{-1}{\cdot}day^{-1}$을 7일간 전처리 후 cisplatin 투여 48시간 경과한 군은 $0.84{\pm}0.1mg{\cdot}dl^{-1}$로 creatinine의 농도가 약 60% 감소되는 신장보호 효과를 나타내었고, 지질과산화 검사는 cisplatin 단독 투여 시 대조군에 비하여 1.6배 높게 나타났으나 산조인 추출액 전처리 시 1.1배로 대조군과 유사하였다. 병리조직 검사는 cisplatin 단독 처리군에서 근위곱슬세관이 대조군에 대하여 더 붉게 염색되었으며 근위곱슬세관은 내강의 융모세포가 탈락하여 공포를 형성하였다. 그러나 산조인 추출액을 7일간 전처리한 군에서는 근위곱슬세관이 대조군과 유사한 염색소견을 보였고 근위곱습세관도 내강의 융모세포 탈락이 거의 나타나지 않았다. 따라서 cisplatin과 t-BHP에 의해 유발된 신장세포 손상에 대하여 산조인 추출액이 항산화 효과를 보였다.
A novel neuropeptide with a relaxing activity on the dorsal retractor muscle (DRM) was isolated from the whole body extract of the starfish, Asterina pectinifera. The peptide was purified by gel-filtration ion-exchange and $C_{18}$ reversed-phase HPLC. The complete amino acid sequence of this peptide, which was determined by automated Edman degradation and MALDI-TOF mass, was Phe-Gly-Lys-Gly-Gly-Ala-Tyr-Asp-Pro-Leu-Ser-Ala-Gly-Phe-Thr-Asp. A comparison of the amino acid sequence with those of other known neuropeptides revealed that the asteripectin was a novel neuropeptide with smooth muscle-relaxing activity on the starfish DRM. This peptide showed threshold response to relaxing activity on the DRM at $10^{-10}M$ and the maximal relaxing effect was $120{\pn}7.0\%$ at $10^{-5}M$. The relaxing activity of this peptide on the starfish DRM increased in a dose-dependent manner.
살모넬라는 주요한 식중독균의 하나로 미생물학적 식품품질을 보증하기 위해 신속 정확하게 현장에서 관리되고 모니터링되어야 한다. 본 연구팀에서는 광학 현미경 기반의 이미징 시스템과 바이오센서가 결합된 모니터링 시스템을 개발하였고, 이를 살모넬라에 적용하기 위해서는 바이오센서에 적용되는 생물학적 수용체의 개발이 절대적으로 필요한 실정이다. 따라서 본 연구에서는 살모넬라에 반응하는 특이적인 anti-Salmonella 다중클론 항체를 토끼로부터 성공적으로 생산 정제하였으며, 최종 항체의 농도는 2 mg/mL로 결정되었다. 또한, 정제된 anti-Salmonella 다중클론 항체의 역가가 상업용 anti-Salmonella 다중클론 항체보다 전 항체 농도 범위에서 우수함을 알 수 있었다. 정제된 항체 특이성 검토를 위해, 정제된 anti-Salmonella 다중클론 항체를 20 종의 살모넬라 serotypes과 20 종의 non-Salmonella strains과 반응시킨 결과, 20 종의 non-Salmonella strains과는 특이성을 보여주지 않은 반면 19 종의 살모넬라 serotypes와 유의적으로 높은 반응성으로 보여 주었다. 최종적으로, anti-Salmonella 다중클론 항체가 고정화된 골드센서를 살모넬라 현탁액에 노출시켰을 때, 수 백여 개의 살모넬라가 센서 표면에 capture되어 있음을 확인할 수 있었다. 따라서, 본 연구를 통해 생산 정제된 anti-Salmonella 다중클론 항체는 새로운 생물학적 수용체로서 충분한 역가와 특이성 그리고 센서에 적용 시 살모넬라와의 높은 결합력을 보여주었으므로 광학현미경 기반 이미징 시스템을 활용한 바이오센서 모니터링 시스템에 새로운 생물학적 수용체로 적용될 수 있으리라 판단된다.
본 연구는 2013~2014년 국민건강영양조사 원시자료를 사용하여 만 19세 이상 성인을 대상으로 성별을 구분하여 평균 음주량 및 폭음 빈도와 치주염의 관련성을 살펴보았다. 평균 음주량과 치주염과의 관련성을 살펴본 결과, 남자에서는 평균 음주량과 치주염은 J자 형태의 관련성을 보였으며, 특히 경도 음주군을 기준으로 중등도 음주군(1.25배)과 고도 음주군(1.39배)에서 치주염 위험이 유의하게 증가하였다. 반면, 여자에서는 평균 음주량과 치주염은 유의한 관련성이 없었다. 폭음 빈도와 치주염과의 관련성 연구 결과, 남자에서는 폭음 빈도가 증가할수록 치주염의 위험이 유의하게 높아지는 경향을 보였지만, 여자에서는 폭음 빈도와 치주염은 유의한 관련성이 없었다. 결론적으로 본 연구를 통해 남자에서 과도한 음주량 및 폭음을 하는 경우 치주염이 유의하게 증가함을 확인하였다. 지역사회에서 치주염 예방을 위해서는 올바른 음주습관 형성을 위한 정확한 정보제공과 다양한 홍보교육 전략이 필요할 것이다.
Objective : The water extract of Bojungikgi-tang (BTE) composed with Ginseng Radix, Astragali Radix, Angelicae gigantis Radix, Atractylodes Rhizoma alba, Aurantii nobilis Pericarpium, Glycyrrhizae Radix, Cimicifuga Rhizoma, and Bupleuri Radix and it has been traditionally used for chronic diseases or weakness after illness in oriental countries. However, little is known about the effects of aqueous extract of BTE on trimellitic anhydride (TMA)-induced contact hypersensitivity (CHS). Therefore, the aim of this study was to investigate the effects of BTE on TMA-induced CHS in BALB/c mice.Methods : In this study, the extract of BTE was prepared by extracting with distilled water at 100℃ for 2.5 h. The extract was freeze-dried following filtration through 0.45 μm filter. Mice were orally administrated with or without BTE extract of different doses (25-200 ㎎/㎏/day) for 28 days. During the challenge period, mice were externally applied with different doses of BTE extract one time per day 30 min before TMA treatment. I examined the effects of BTE on the serum levels of IgE, IgG1, IgG2a, and IgG2b, nitric oxide (NO) and prostaglandin E2 (PGE2) production in isolated peritoneal macrophages, Th2 cytokine production in isolated spleen cells, ear swelling responses, and the leukocyte infiltration induced by TMA.Results : The orally and externally administration of BTE dose-dependently reduced the serum levels of hapten-specific immunoglobulin E (IgE), IgG1 titer, and PGE2 production as well as ear swelling responses and leukocyte infiltration in TMA-induced BALB/c mice. The levels of NO and PGE2 production from peritoneal macrophages stimulated with TMA-BSA were markedly suppressed by pretreatment with BTE in a concentration dependent manner. Furthermore, the levels of Th2 cytokines (IL-4, IL-5, IL-13) production from spleen cells stimulated with ConA were markedly suppressed by BTE treatment in a concentration dependent manner.Conclusions : These results suggest that BTE treatment suppresses chronic contact hypersensitivity, and it can be assumed that the suppression of ear swelling, serum IgE, NO and PGE2 levels, leukocyte infiltration, and Th2 cytokines in an animal model. Therefore, these properties may contribute to the strong anti-CHS response effect of BTE.
목적 : 본 연구에서는 정향 에탄올 추출물이 RBL-2H3 세포 매개 알레르기 반응에 대해 미치는 영향과 그 작용기전에 대해 연구했다. 방법 : 정향 에탄올 추출물의 RBL-2H3 세포에 대한 독성 여부는 MTT 분석을 통해 평가했다. 정향 에탄올 추출물의 항알러지 작용은 효소결합면역 분석방법(ELISA)을 이용해 ${\beta}$-Hexosaminidase과 Histamine의 분비량을 측정하여 평가하였다. 정향 에탄올 추출물의 작용기전에 대해서는 유사 분열물질-활성화단백질인산화효소(mitogen-activated protein kinase, MAPK)를 western blot 법을 이용하여 측정함으로써 평가하였다. 결과 : 정향의 에탄올 추출물은 RBL-2H3 세포에 대해 독성을 나타내지 않는 농도에서 RBL-2H3 세포의 탈과립과 히스타민 분비를 유의하게 억제하였으며, p38 MAPK의 활성을 차단하였다. 결론 : 본 연구의 결과 정향의 에탄올 추출물은 비만세포에서 유래된 알러지 반응을 억제하는 효과가 있으며, 또한 그 작용기전은 p38 MAPK 인산화와 연계되어 있을 것으로 사료된다.
본 연구에서는 NSAID계 약물인 sulindac, sulindac sulfone, 그리고 sulindac sulfide 처리에 의한 암세포 생존율에 미치는 영향을 확인하기 위하여, 인간 대장암 세포주인 HCTl16에 각각 10 ${\mu}M$의 NSAID들을 처리하였다. 처리한약물 중 sulindac sulfide에 의한 암세포 생존율이 가장 높게 감소하는 것으로 MTS assay 결과 확인되었다. 또한 sulindac sulfide의 처리 농도가 증가됨에 따라 세포 생존율이 감소하는 것으로 확인되었다. Sulindac sulfide의 처리에 따른 이러한 암 세포 사멸의 분자생물학적 기전을 이해하기 위하여, oligo DNA microarray 실험을 수행하였다. 그 결과, 10 ${\mu}M$의 sulindac sulfide의 처리에 의해 2배 이상 발현이 증가되는 유전자가 23개 확인되었고, 반대로 2배 이상 발현이 감소되는 유전자가 33개 확인되었다. 증가되는 유전자중 3개(NAG-1, DDIT3, PCK2)를 선택하여, RT-PCR과 real-time PCR을 수행하였다. 그 결과 두 실험 모두 DNA microarray 실험결과와 동일하게 발현이 증가되었다. 이 중 sulindac, sulindac sulfone, sulindac sulfide에 의 한 NAG-1 유전자의 발현변화를 RT-PCR과 real-time PCR 방법으로 확인한 결과, sulindac sulfide에 의한 암 억제유전자인 NAG-1의 발현이 가장 많이 발현되었다. 이러한 연구결과는 세포생존율 결과와 비교하였을 때, NAG-1의 높은 발현과 암 세포 생존율의 감소가 관련이 있음을 간접적으로 시사한다. 따라서 이들 연구결과는 sulindac sulfide에 의한 화학적 암 예방법의 분자생물학적 기전을 이해하는데 도움을 줄 것으로 생각한다.
해양성 심층수(KDSW)는 해양심층수(DSW)와 유사한 mineral 조성을 가지고 있어 식품 및 의약분야에서 그 유용성에 대한 관심이 증대되고 있다. 본 연구에서는 KDSW 및 탈염한 Danasoo의 항산화력, 면역활성, 함암 및 당뇨에 대한 효과를 연구하였다. KDSW와 Danasoo의 항산화 활성은 DPPH radical scavenging 활성, SOD-like 활성 및 PCL 법에 의하여 항산화 활성을 조사하였다. KDSW와 Danasoo의 항산화 활성은 첨가된 농도에 의존적으로 증가하였으며, 특히 PCL법에 의한 KDSW와 Danasoo의 항산화능은 85.32과 14.02(nmol of ascorbic acid equivalent/ml)로 높은 항산화 활성을 나타내었다. Macrophage RAW 264.7 cell에서 LPS에 의하여 유도된 NO 활성은 Danasoo (20%)를 첨가에 의하여 약 30%정도의 NO 합성이 저해되었으며, 이 농도에서 세포 독성이 없는 것으로 MTT assay에 의하여 확인하였다. NO는 nitric oxide synthase에 의하여 합성되며, tumor성장 및 angiogenesis에서 중요한 역할을 하는 것으로 밝혀져 있으며, Danasoon (20%)는 위암세포와 폐암세포의 iNOS 발현을 현저히 감소시켰다. STZ에 의하여 유도된 당뇨 쥐의 혈당량은 Danasoo (20%) 식이에 의하여 대조구와 유사한 당뇨효과를 나타내었다. 이러한 결과들은 KDSW가 우수한 biological 활성을 가지고 있으며, 또한 천연 기능성 제품생산을 위한 소재로 사용될 수 있는 높은 가능성올 시사하고 있다.
갓 중의 향균성 물질을 검색할 목적으로 에탄올추출물이 미생물의 증식에 미치는 영향과 전자현미경에 의한 세균의 형태변화를 살펴보았다. 갓 에탄올추출물의 농도별 항균활성은 대부분의 그람 양성균에서는 10mg/ml로 강하게 나타났으며, 그람 음성규느이 경우는 20mg/ml에서 나타났다. 그리고 젖산균 및 효모에서는 40mg/ml로 세균에 비하여 항균력이 약하게 나타났따. 갓 에탄올추출물이 미생물의 대수증식기에 미치는 영향은 E. coli와 S. aureus 두 균주 모두 20mg/ml 이상의 첨가시는 4시간 이후부터 균의 생육이 완전히 억제되었다. 갓 에탄올추출물로 처리한 E. colid와 S. aureus 두 균주를 전자현미경으로 관찰한 결과, 그람 음성균인 E. coli의 경우는 균체표면이 불규칙적으로 수축된 형상을 보였고, 그람 양성균인 S. aureus의 경우는 균체가 팽윤되고 타원형으로 변형되어 두 균주 모두 심한 형태학적인 변화가 있음이 관찰되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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