단클론항체의 높은 반응특이성을 이용하여, DNV-II의 유전자클로닝에 사용할 목적으로 세포융합법으로 단클론항체를 만들었다. 그 결과 최종적으로 유용하다고 판정된 4개의 단클론항체(C4, Fl, H2, M9)는 매우 높은 반응특이성을 가지고 있어, DNV-I 및 IFV와는 전혀 반응하지 않았으며, 항원으로 사용한 DNV-II와만 특이적으로 반응하였다. 또한 이들 단클론항체들 중 C4, Fl, M9는 DNV의 53KDa 구조단백질과 반응하였고, H2는 46.5KDa 구조단백질과 반응하였다.
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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제6권2호
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pp.145-149
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2003
Seeing inadequate disinfection and unhygenic condition in rearing area, use of disease resistant silkworm variety is the best option. In order to this, an attempt has been made to develop the resistance to Bombyx mori densonucleosis virus (BmDNV-2) into a susceptible silkworm breed Zhenon1 by cross breeding with a resistant silkworm breed SU12 and exposing the subsequent generations to BmDNV-2 followed by the selection of individuals from the surviving batches. After seven generation the evolved DNV-2 resistant strain showed the significantly higher resistance to BmDNV-2 than control Zhenon1. The economic characters of both of the breeds were almost on par.
Sen, Ratna;Nataraju, B.;Balavenkatasubbaiah, M.;Premalatha, V.;Thiagarajan, V.;Datta, R.K.
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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제9권1호
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pp.35-40
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2004
Bombyx mori densonucleosis virus type 1 (BmDNV1)- a non occluded virus causes flacherie disease in the susceptible stocks of the silkworm, Bombyx mori. However, some stocks are non-susceptible. Non-susceptibility to BmDNV1 in B. mori is a unique case where the virus infection is completely inhibited by a single gene of the host. A survey conducted by this institute in some parts of Karnataka state has revealed that, 43.05% of the total incidence of flacherie disease caused by non-occluded viruses, are due to the synergistic infection of B. mori densonucleosis and infectious flacherie virus. Earlier study indicated that rearing of BmDNV1 resistant silkworm stock is effective in protecting silkworm against BmIFV also. In the present study the response of 78 silkworm stocks which include 42 of non-diapausing and 36 of diapausing groups, to BmDNV1 is investigated. Newly ecdysed third instar larvae were inoculated per-os with 10% inoculum of BmDNV1 extracted from the mid-gut of infected silkworm. One non-diapausing and three diapausing silkworm stocks were found to be resistant to BmDNV1. Eleven silkworm stocks were found to possess moderate resistance whereas rest sixty three were found to be susceptible to BmDNV1. Genetic analysis has shown that the resistance to BmDNV1 is autosomally inherited and controlled by a major dominant or a major recessive gene in different silkworm stocks. These resistant stocks can be utilized as the resource material to develop BmDNV1 resistant commercial hybrids. The selection strategies, depending upon the mode of inheritance of resistance in the resource material chosen, are discussed.
우리나라의 10개 장려 잠품종(1978년 당시)의 양원종의 품종별 FV 및 DNV(이나주)에 대한 저항성을 비교검정한 결과는 다음과 같다. 1. FV에 대한 저항성은 일본종에서는 한생 1호가 가장 높았고 무등이 가장 낮았으며 중국종에서는 잠108이 가장 높았고 잠 116이 가장 낮았다. 2. DNV에 대한 저항성은 일본종에서는 잠 117, 경추, 무등, 한생 1호 및 한생 3호가 완전 저항성을 나타냈으며 잠 115가 가장 낮은 저항성을 나타냈고 중국종에서는 공식된 모든 품종이 완전 저항성을 나타냈다.
수종의 주요 뽕나무 해충-멧누에, 뽕나무 명나방, 환불나방-에 누에 무름병 바이러스(Flacherie virus; FV)와 농핵병 바이러스(Densonucleosis virus: DNV)를 접종하여 감염여부를 2중 면역확산법과 조직관찰로 조사하므로서 이들 누에병의 뽕나무 해충에 의한 전염경로 차단 및 방제법 확립을 위한 기초자료를 얻고자 시험을 수행하였다. 1. 멧누에는 누에 FV 및 DNV-1 각각의 항혈청과 반응하여 침강대를 형성하였고, 뽕나무 명나방은 DNV-1 항혈청과 반응하여 비들의 교차감염을 인정할 수 있었으나, 흰불나방은 FV 및 DNV-1 항혈청과 반응을 일으키지 않아 교차감염을 인정할 수 없었다. 2. FV 접종 멧누에는 중장 배상세포 세포질에 바이러스 특이 공포 형성 및 27nm 크기의 바이러스 입자가 관찰되었다. 3. DNV-1 접종 멧누에는 중장 원통세포 핵이 비대하였으며 군집형과 연쇄상의 2종류의 바이러스 증식 형태가 관찰되었다. 4. DNV-1 접종 뽕나무 명나방은 중장 원통세포의 일부 핵에서 비대 현상이 관찰되었고, feulgen 염색결과 적자색으로 염색되었으며, 비대한 원통세포핵내에 소수의 바이러스들이 여러 곳에서 증식하는 것이 관찰되었다.
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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제11권2호
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pp.135-138
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2005
Two pairs of DNA primers were designed for the detection of the Zhenjiang (China) strain of Bombyx mori densonucleosis virus (BmDNV-Z). These primers were designed from the nucleotide sequence of major structural protein gene (putative VD1-ORF2). PCR amplification was attempted from different issues (including silk gland, blood, skin and midgut) and feces of the silkworm which infected wit BmDNV-Z were amplified by PCR. Both of the primers gave expected size of in the DNA bands from midgut and feces, but not in the DNA of silk gland, blood and skin. The two bands were sequenced, and their sequence were same as the sequence designed for. BmDNV-Z could be successfully detected in single silkworm after it was infected for 12 hrs, and could not be detected before 9 hrs after infected.
가잠에 있어서 피해가 많은 전염성 연화병(Flacherie Virus; FV)과 농핵병 바이러스(Densonucleosis virus; DNV)의 증식에 관한 연구를 행하기 위하여 서당밀도 구배 초원심분리법에 의한 양바이러스의 정제 및 전자현미경에 의한 관찰, 바이러스 감염잠의 중장과 체액에서의 핵산과 단백질의 변동 및 감염중장 피막세포의 전자현미경에 의한 병리조직학적 관찰 등, 일연의 조사를 통하여 다음과 같은 연구결과를 얻었다. 1. 서당밀도구배에 의한 초원심분리법을 이용하여 FV 및 DNV를 분획한 결과, base line이 낮고 좌우상칭의 단일 peak를 나타내는 전형적인 바이러스 분획을 얻었으며, 또한 이들 바이러스의 negative 염색에 의한 전자현미경 관찰에서 FV는 27nm, DNV는 21nm의 균일한 구형입자임이 확인되었다. 2. 두 바이러스 감염잠의 체중은 바이러스 접종 6일 후부터, 중장중은 바이러스 접종 3일 후부터 건전잠에 비해 뚜렷한 감소를 나타냈다. 3. DNA의 양적 변화는 FV 및 DNV 감염잠에서 공히 중장에서는 전기간을 통해 건전잠에서 보다 높았고, 체액에서는 바이러스 접종 초ㆍ중기에는 큰 변화가 없고 바이러스 접종 7일 이후에는 건전잠에서 보다 훨씬 낮았다. 4. RNA의 양적 변화는 FV 및 DNV 감염잠에서 다같이 바이러스 접종 초기에 중장에서는 건전잠에 비해 높았고, 체액에서는 건전잠에 비해 매우 낮았으나, 바이러스 접종 말기에는 중장 및 체액의 경우 공히 건전잠에서 보다 현저히 낮았으며 그 정도는 DNV 감염잠에서 더 심했다. 5. FV 및 DNV 감염잠에서 중장과 체액의 단백질은 바이러스 접종 중기까지는 건전잠에 비해 큰 변화가 없었으나, 접종 말기에서는 건전잠에서 보다 월등히 낮았다. 6. 바이러스 접종 8일 후의 FV 및 DNV 감염잠 중장 RNA 전기영동상은 건전잠의 중장 RNA인 26S, 17S, 5S 및 4S의 4종 band와 동일했다. 7. FV 및 DNV 감염잠의 중장 단백질 전기영동상은 바이러스 접종 1일과 5일 후에는 건전잠의 것과 큰 차이가 없고, 접종 8일 후에는 건전잠에 존재하는 이동도가 낮은 L band가 양 바이러스 감염잠에서는 공히 소실되는 반면, 건전잠에서 볼 수 없는 이동도가 중간인 M band가 새로이 나타났으며 비교적 이동도가 높은 건전잠의 N band는 양 바이러스 감염잠에서는 2개로 분리되었다. 8. 체액단백질의 전기영동상은 FV 및 DNV감염잠 공히 건전잠의 것과 유사하나, 바이러스 접종 8일 후에는 양적인 감소를 나타내어 건전잠의 약 40%에 지나지 않았다. 9. FV 감염중장조직을 pyronin-methyl green 2종 염색을 하여 광학현미경으로 관찰한 결과, 바이러스 접종 8일 후의 중장원동세포내에서 A형 및 B형 봉입체가 형성되었음을 확인하였다. 10. FV감염 중장조직세포의 전자현미경 관찰에서는 바이러스 접종 5일 후에 배상세포의 'cytoplasmic wall'이 비대해지고 그 내부에 virus-specific vesicle이 형성되었으며, 바이러스 접종 8일 후에는 virus-specific vesicle, 바이러스 입자, linear structure, tubular structure 및 전자밀도가 높은 matrix 등의 바이러스 감염에 대한 특이적인 구조물이 배상세포의 세포질에서 관찰되었으며, microvilli내에서 바이러스 입자의 존재도 확정되었다. 특히 virus-specific vesicle 주위에서는 전자밀도가 높은 구형의 바이러스 입자 유사체가 관찰되었는데, 이것은 virus-specific vesicle 주위에서 바이러스 조립이 일어나는 것을 추정된다. 한편 원통세포 내에서 봉입체 관찰되고, 변형소구화된 배상세포가 중장강으로 탈락되는 것이 관찰되었다. 11. DNV감염 중장조직을 acridine orange 염색을 하여 형광현미경으로 관찰한 결과, DNV접종 5일 후에 본 바이러스 증식 장소인 원동세포핵의 비대가 뚜렷이 관찰되었다. 12. 전자현미경에 의해 DNV감염 중장조직세포를 관찰한 결과, 바이러스 접종 5일 후에 원동세포 핵내의 인이 소형 과립으로 붕괴되어 산재되었고, 접종 8일후에는 전자밀도가 높은 virogenic stroma가 출현하였으며, 감염 말기로 추정되는 핵내의 전자밀도가 전자보다 낮고 더욱 확대되어 핵의 대부분을 차지하는 virogenic stroma도 관찰되었다. 또한 이들 virogenic stroma내에서 바이러스 입자유사체가 관찰되는 것으로 보아 이 virogenic stroma는 바이러스 전구물질의 합성 및 바이러스 조립장소임을 시사하고 있다.
Rao, P. Sudhakara;Nataraju B.;Balavenkatasubbaiah M.;Dandin S.B.
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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제13권2호
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pp.109-112
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2006
The use of commercial silkworm hybrids resistant to important silkworm diseases is economical and better option particularly in tropical areas. This necessitated the evolution of productive bivoltine silkworm breeds non-susceptible to $BmDNV_1$. Non-susceptibility to $BmDNV_1$, infection was found to be controlled by a single recessive gene, nsd-l or a dominant gene, Nid-l. A major dominant/recessive gene confers resistance to $BmDNV_1$, from potent donor parents have been transferred to 10 productive but susceptible bivoltine silkworm strains through conventional breeding methods. By utilizing these breeds prepared 25 hybrids $(5{\times}5)$ and hybrid evaluation was carried out to identify most promising hybrids resistant to $BmDNV_1$. All these hybrids are inoculated with $BmDNV_1$ inoculum along with productive control hybrid $CSR2{\times}CSR4$ and reared under standard rearing procedure. Based on inoculated rearing and test reeling results, two most promising hybrids $(CSR18DR{\times}CSR29DR\;and\;CSR21DR{\times}CSR50DR)$ were selected for commercial exploitation. The selected hybrids have shown a survival rate of >85% with productive traits, where as control hybrid have shown 11.1% survival with inferior cocoon traits. The methodologies adopted were discussed.
Rao, P. Sudhakara;Nataraju B.;Balavenkatasubbaiah M.;Dandin S.B.
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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제13권2호
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pp.73-77
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2006
Combining ability and hybrid vigour analysis was carried out in hybrids between newly developed non-susceptible lines to BmDNV1 and popular bivoltine breeds for certain quantitative traits viz. Pupation rate, Cocoon yield, Cocoon weight, Cocoon shell weight and Cocoon shell ratio, Survival rate against BmIFV and BmNPV. General combining ability (GCA) effects revealed that among the lines CSR2DR was found good general combiner exhibiting significant GCA effects for six characters, out of seven traits evaluated. Among testers CSR28DR was found as good combiner exhibiting significant GCA effects for six traits. Out of 36 hybrids made between $resistant{\times}resistant,\;resistant{\times}susceptible\;and\;susceptible{\times}susceptible$ breeds, one hybrid $CSR21DR{\times}CSR28DR$ exhibited significant SCA effects for six traits. The selected hybrid $CSR21DR{\times}CSR28DR$ also exhibited significant positive heterosis and heterobeltiosis expressions for maximum traits and could be exploited as commercial silkworm hybrid resistant to important viral diseases.
국내 양잠농가에 분포되어 있는 FV를 분리하여 그 성상을 파악하기 위하여 경기 3, 경북 4개 농가에서 연화병 증상을 나타내는 병잠을 모집, 바이러스를 분리하여 그 형태 및 크기, 핵산 및 단백질 성상과 항원성을 일본산 FV와 비교 검토한 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. 경기 2, 경북 2개 농가의 연화병 증상을 나타내는 병잠으로부터 바이러스를 분리하였다. 2. 향남산 바이러스는 직경이 27$\pm$1.7nm의 구형입자였으며, 유천산 바이러스는 27$\pm$1.7nm 및 21$\pm$0.8nm의 구형 입자가 혼재되어 있었다. 3. 향산성 바이러스의 핵산은 RNA로 일본산 FV와 동일한 전기영동상을 보였다. 4. 구성단백질은 4개의 polypeptide로 되어 있으며 그 분자량은 각각 35,000, 33,000, 31,000, 11,400 dalton으로 일본산 FV와 동일하였다. 5. 향남산 바이러스는 일본산 FV와 같은 항원성을 가진 바이러스이며, 유천산 바이러스는 일본산 FV 및 DNV-1과 같은 항원성을 가진 2종류의 바이러스였다. 6. 이상의 결과로부터 향남 및 유천에서 분리한 직경 27$\pm$1.7nm의 구형 바이러스는 일본산 FV와 동일한 FV로 판명되었고, 유천에서 분리한 직경 21$\pm$0.8nm의 구형 바이러스는 DNV-1으로 추정되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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