• 한국균학회지
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• 제37권1호
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• pp.19-27
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• 2009

25개의 큰느타리버섯 균주를 국내외의 다양한 지역에서 수집하여 본 실험에 사용하였다. PER-007과 PER-012균주는 다른 균주와 비교하여 볼 때 PDA 배지상에서 특징적인 균총 형태를 보였으나 대부분 균주간 유사한 균사생장률을 보였다. 자실체 유도 및 생육 실험에서 PER-007균주는 자실체가 형성 되지 않았고 PER-012균주의 발이가 되었으나 이후 성숙 자실체로 성장하지 않았으며 그 외의 공시한 균주의 자실체 대부분의 갓모양은 볼록반구형, 평판구형 등 다양하게 나타났다. URP primer의 PCR 반응 조건은 $48^{\circ}C$에서 $52^{\circ}C$의 annealing 온도에서 높은 다형성 밴드를 관찰할 수 있었으며 25개의 P. eringii strains의 다형성은 11개의 URP primer 중 URP1F, URP2R, URP2F, URP4R, URP6R, URP9F, URP17R primer에서 계통간 PCR 다형성 밴드를 형성하였다. URP-PCR다형성밴드를 기초로 하여 유전적 유연관계를 분석한 결과 P. eringii strain들은 $76%{\sim}100%$정도의 유전적 유사도를 가지는 3개의 주요 group으로 나눌 수 있었으며 PER-007과 PER-017균주는 outgroup으로 원연관계를 형성하였다.

• 한국수정란이식학회지
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• 제9권3호
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• pp.243-247
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• 1994

최근 의약적으로 유용한 단백질을 대량 생산키 위한 실현 가능한 방법이 유전자변환 가축의 이용과 관련되어 발전되어 왔다. 이러한 유전자 변환동물은 이종의 단백질을 유즙속으로 분비시키는 생체반응기로서 이용되고 있다. 이러한 전략적 목적을 위해 현재 유전자 변환동물의 생산을 위한 이용에 있어 여러 가지 방법들이 보고되고 있다. 그러나 ES 세포의 사용이 이러한 방법들 사이에서 가장 실질적인 것으로 추정되고 있다. 본 실험에서는 유전자 구축을 위해 사람 황체 호르몬(human luteinizing hormone; hLH)의 전사를 유도하기 위해 각각 2.2 및 0.5 kb의 토끼 $\beta$-casein pronoter 단편을 이용하여 생쥐의 유선에 hLH를 발현시키도록 조절하고 발현이 thynidine kinase(TK) pronoter에 의해 좌우되는 neo 유전자를 selectable marker로서 plasnid속에 삽입하였다. 그 결과 생긴 구축 유전자는 각각 pCas 2.2와 pCas 0.5로 명명하였다. 구축된 유전자로 2$\times$107의 TT-2 ES세포를 170V, 550$\mu$F로 100$\mu$g의 선상 plasmid에 의해 electroporation 시켰다. 감염된 colony들은 250$\mu$g/$m\ell$ G418을 함유하는 ESM 배양액에서 선별 7일 이후에 회수하여 성공적으로 감염된 ES세포는 PCR 및 Southern blot에 의해 확인되었고 그들 중 나머지는 trypsin 처리 후 각각 미세조작과 공배양 기술을 사용하여 ICR 생쥐의 8세포기 수정란 속에 도입하였다. 결국 24시간 동안 37$^{\circ}C$, 5% $CO_2$에서 배양된 배반포를 chimera의 생산을 위해 위임신 유기된 G418 선발처리 이후 400 및 275개의 ES 세포 colony가 생존하였으며, 3개의 ES 세포으 colony 의 genome 속에 임의적으로 plamid가 삽입된 것을 Southern blot에 의해 확인되었다. 총 13 chimera 생쥐가 3 colony로부터 생산되었으나 germ-line chimera는 현재 조사중이다. chimera 생산빈도는 공배양 기술보다 주입방법에서 현저히 높았다.

• Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
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• 제15권23호
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• pp.10085-10089
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• 2015

Background: The insulin-like growth factor (IGF) system comprises a group of proteins that play key roles in regulating cell growth, differentiation, and apoptosis in a variety of cellular systems. The aim of this study was to investigate the role of insulin-like growth factor binding protein 3 (IGFBP3) in hepatocellular carcinoma. Materials and Methods: Expression of IGF2, IGFBP3, and PTEN was analyzed by qRT-PCR. Lentivirus vectors were used to overexpress IGFBP3 in hepatocellular carcinoma cell (HCC) lines. The effect of IGFBP3 on proliferation was investigated by MTT and colony formation assays. Results: Expression of IGF2, IGFBP3, and PTEN in several HCC cell lines was lower than in normal cell lines. After 5-aza-2'-deoxycytidine/trichostatin A treatment, significant demethylation of the promoter region of IGFBP3 was observed in HCC cells. Overexpression of IGFBP3 induced apoptosis and reduced colony formation in HUH7 cells. Conclusions: Expression of IGF2, IGFBP3, and PTEN in several HCC cell lines was lower than in normal cell lines. After 5-aza-2'-deoxycytidine/trichostatin A treatment, significant demethylation of the promoter region of IGFBP3 was observed in HCC cells. Overexpression of IGFBP3 induced apoptosis and reduced colony formation in HUH7 cells.

• 미생물학회지
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• 제45권2호
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• pp.208-214
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• 2009

장류에서 식중독 미생물인 Bacillus cereus의 계수 방법상 문제점을 해결하기 위하여, B. cereus 선택 배지인 mannitol-egg york-polymyxin B (MYP)에서 자란 약 1,500개의 집락들을 형태적 차이에 따라 12종으로 분류하였다. 생화학 특성 및 16S rRNA 유전자의 염기서열 분석 결과 집락 주위로 환을 형성하는 직경 11~16 mm 크기의 집락들은 B. cereus 와 B. cereus subsp. cytotoxis로 동정되었고, 환을 형성하지 않아 B. cereus 계수에 포함시키지 않았던 직경 5 mm 크기의 분홍색 집락은 B. cereus로, 6.5 mm 크기의 이중환을 형성하여 B. cereus로 계수하기가 모호하였던 붉은색 집락은 B. cereus로 동정되었다. 나머지 세 종들은 Enterococcus sp., Brevibacillus sp., B. subtilis로 밝혀졌다. B. cereus로 동정된 9종 모두에서 적어도 한 종류 이상의 B. cereus 독소 유전자들을 함유하고 있었지만 다른 형태들에서는 발견되지 않았다.

• 생체재료학회지
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• 제22권4호
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• pp.271-278
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• 2018

Background: The chondrogenic differentiation of mesenchymal stem cells (MSCs) is regulated by many factors, including oxygen tensions, growth factors, and cytokines. Evidences have suggested that low oxygen tension seems to be an important regulatory factor in the proliferation and chondrogenic differentiation in various MSCs. Recent studies report that synovium-derived mesenchymal stem cells (SDSCs) are a potential source of stem cells for the repair of articular cartilage defects. But, the effect of low oxygen tension on the proliferation and chondrogenic differentiation in SDSCs has not characterized. In this study, we investigated the effects of hypoxia on proliferation and chondrogenesis in SDSCs. Method: SDSCs were isolated from patients with osteoarthritis at total knee replacement. To determine the effect of oxygen tension on proliferation and colony-forming characteristics of SDSCs, A colony-forming unit (CFU) assay and cell counting-based proliferation assay were performed under normoxic (21% oxygen) or hypoxic (5% oxygen). For in vitro chondrogenic differentiation, SDSCs were concentrated to form pellets and subjected to conditions appropriate for chondrogenic differentiation under normoxia and hypoxia, followed by the analysis for the expression of genes and proteins of chondrogenesis. qRT-PCR, histological assay, and glycosoaminoglycan assays were determined to assess chondrogenesis. Results: Low oxygen condition significantly increased proliferation and colony-forming characteristics of SDSCs compared to that of SDSCs under normoxic culture. Similar pellet size and weight were found for chondrogensis period under hypoxia and normoxia condition. The mRNA expression of types II collagen, aggrecan, and the transcription factor SOX9 was increased under hypoxia condition. Histological sections stained with Safranin-O demonstrated that hypoxic conditions had increased proteoglycan synthesis. Immunohistochemistry for types II collagen demonstrated that hypoxic culture of SDSCs increased type II collagen expression. In addition, GAG deposition was significantly higher in hypoxia compared with normoxia at 21 days of differentiation. Conclusion: These findings show that hypoxia condition has an important role in regulating the synthesis ECM matrix by SDSCs as they undergo chondrogenesis. This has important implications for cartilage tissue engineering applications of SDSCs.

• 식물병연구
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• 제11권1호
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• pp.21-27
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• 2005

고추 탄저병균인(Colletotrichum acutatum)은 100$\mu\textrm{g}$ / $m\ell$ 의 ampicillin과 tetracycline과 같은 항생물질과 100$\mu\textrm{g}$ / $m\ell$의 carbendazim과 diethofencarb의 혼합체를 첨가한 PDA 배지에서 특이적으로 생장하였다. 탄저병의 발병 정도가 다른 고추 열매르 ㄹ갈아서 C.acutatum의 반선택 배지에 도말한 결과, 발병 정도와 반선택 배지에 나타나는 병원균의 균총 수는 정의 상관 관계를 나타냈다. 고추를 재배했던 포장에서 이병 잔재물과 토양을 채집하여 반선택 배지 상에서 병원균의 수를 조사한 결과, C.acutatum은 토양보다는 이병 잔재물에서 더 많은 수가 검출되었다. 반선택 배지에 나타난 병원균을 무작위로 10균주를 선발하여 동정하였다. 선발한 균주들의 DNA를 추출하여 C. acutatum 특이적인 printer를 사용한 PCR 을 수행한 결과, 모든 균주가 C. acutatum으로 확인되었다.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제32권2호
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• pp.133-147
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• 2005

Objectives: This study was carried out to establish human embryonic stem cells derived from frozen-thawed embryos using mouse embryonic fibroblasts (mEFs), human fetal skin and muscle fibroblasts as feeder cells, and to identify the characteristic of embryonic stem cells. Methods: When primary mEFs, human fetal skin and muscle fibroblasts were prepared, passaging on 4 days from replating could have effective trypsinization and clear feeder layers. Eight of 23 frozenthawed 4~8 cell stage embryos donated from consenting couples developed to blastocysts. Inner cell mass (ICM) was isolated by immunosurgery. ICM was co-cultured on mEFs, human fetal skin or muscle fibroblasts. The ICM colonies grown on mEFs, human fetal skin or muscle fibroblasts were tested the expression of stage specific embryonic antigen-3, -4 (SSEA-3, -4), octamer binding transcription factor-4 mRNA (Oct-4) and alkaline phosphatase surface marker. Results: We obtained 1 ICM colony from 2 ICM co-cultured on mEFs as feeder cells and did not obtain any ICM colony from 6 ICM clumps co-cultured on human fetal skin or muscle fibroblasts. The colony formed on mEFs could be passaged 30 times every 5 days with sustaining undifferentiated colony appearance. When the colonies cultured on mEFs were grown on human fetal skin or muscle fibroblasts, the colonies could be passaged 15 times every 9 days with sustaining undifferentiated colony appearance. The colonies grown on mEFs and human fetal fibroblasts expressed SSEA-4 and alkaline phosphatase surface markers and positive for the expression of Oct-4 by reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR). The produced embryoid body differentiated spontaneously to neural progenitorlike cells, neuron-like cells and beating cardiomyocyte-like cells, and frozen-thawed embryonic stem cells displayed normal 46,XX karyotype. Conclusions: The human embryonic stem cells can be established by using mEFs and human fetal fibroblasts produced in laboratory as feeder cells.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제13권3호
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• pp.354-359
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• 2003

Multiplex-PCR protocols were designed in order to make a rapid identification of MRSA. MecA, femB, and 165 rRNA genes were amplified for making a detection of MRSA. The incidence of MRSA in the clinical isolates of Staphylococcus aureus was examined by using a multiplex-PCR assay. The mecA gene was detected in 266 strains out of 336 clinical isolates of S. aureus, thus the incidence of MRSA was approximately 76.5%. The MRSAs of 247 strains (96.1%) showed resistance to more than eight species of the antimicrobial agents tested. The isolates of MRSA showed 27 different antimicrobial-resistant patterns. The results indicate that many different MRSA strains having high multidrug resistance are actually prevalent in Korea. Also, VISA was screened from the MRSA. Two strains were grown on the BHI agar plate supplemented with $8\;\mu\textrm{g}/ml$ of vancomycin at a frequency of $1/10^8$ colony forming units or higher.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제25권9호
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• pp.1401-1409
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• 2015

The aim of this study was to develop a SYBR Green-based real-time PCR assay for the rapid, specific, and sensitive detection of Acidovorax avenae subsp. citrulli, which causes bacterial fruit blotch (BFB), a serious disease of cucurbit plants. The molecular and serological methods currently available for the detection of this pathogen are insufficiently sensitive and specific. Thus, a novel SYBR Green-based real-time PCR assay targeting the YD-repeat protein gene of A. avenae subsp. citrulli was developed. The specificity of the primer set was evaluated using DNA purified from 6 isolates of A. avenae subsp. citrulli, 7 other Acidovorax species, and 22 of non-targeted strains, including pathogens and non-pathogens. The AC158F/R primer set amplified a single band of the expected size from genomic DNA obtained from the A. avenae subsp. citrulli strains but not from the genomic DNA of other Acidovorax species, including that of other bacterial genera. Using this assay, it was possible to detect at least one genomeequivalents of the cloned amplified target DNA using 5 × 10⁰ fg/µl of purified genomic DNA per reaction or using a calibrated cell suspension, with 6.5 colony-forming units per reaction being employed. In addition, this assay is a highly sensitive and reliable method for identifying and quantifying the target pathogen in infected samples that does not require DNA extraction. Therefore, we suggest that this approach is suitable for the rapid and efficient diagnosis of A. avenae subsp. citrulli contaminations of seed lots and plants.

• 생명과학회지
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• 제20권6호
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• pp.929-933
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• 2010

본 연구는 곤충으로부터 새로운 항 진균 단백질을 발굴하기 하기 위한 목적으로 누에를 대상으로 Aspergillus niger의 감염을 유도하였을 때 발현되는 유전자의 특성을 분석한 것이다. Annealing control primer 법에 기초한 GeneFishing Kit를 사용하여 A. niger를 약 $6{\times}10^8$ colony per unit로 5령기 누에 유충의 체강에 감염시킨 후, 6시간 경과한 다음에 유도 발현되는 유전자(differentially expressed genes, DEGs)를 분석 한 결과, 10개의 유도 발현되는 유전자를 분리하였고 RT-PCR을 통해서 lysozyme, enbocin 그리고 한 개의 기능이 알려지지 않는 유전자등 3개의 유전자가 A. niger의 감염에 의해서 유의하게 과 발현된다는 것을 검증하였다. 일반적으로 그람 음성 및 양성 세균의 감염에 의해 유도된다고 알려진 enbocin 유전자가 A. niger의 감염에서도 과 발현이 유도되는 본 연구의 결과는 앞으로 enbocin 유전자의 항 진균 활성 연구에 중요한 기초 자료로 활용될 수 있을 것이다.