The potential therapeutic action of shikonin in an experimental model of rheumatoid arthritis (RA) was investigated. As a RA animal model, DBA/1J mice were immunized two times with type II collagen. After the second collagen immunization, mice were orally administered shikonin (2 mg/kg) once a day for 35 days, and the incidence, clinical score, bone mineral density (BMD), bone mineral content (BMC) and joint histopathology were evaluated. BMD in the proximal regions of the tibia largely increased in the shikonin treatment group compared with the control group. We also examined the effect of shikonin on inflammatory cytokines and cartilage protection. Shikonin treatment significantly reduced the incidence and severity of collagen-induced arthritis (CIA), markedly abrogating joint swelling and cartilage destruction. Shikonin also significantly inhibited the production of matrix metalloproteinase (MMP)-1 and up-regulated tissue inhibitors of metalloproteinase (TIMP)-1 in mice with CIA. In conclusion, shikonin exerted therapeutic effects through regulation of MMP/TIMP; these results suggest that shikonin is an outstanding candidate as a cartilage protective medicine for RA.
본 연구는 식용 어류로부터 획득한 콜라겐 중 Gly-Pro-Hyp를 주요 지표로 하는 고함량 콜라겐 트리펩타이드에 대한 피부의 광노화 억제 효과를 확인하고자 HaCaT 세포와 SKH-1 hairless 마우스를 활용한 전임상 실험을 실시하였다. HaCaT 세포는 UVB 조사 이후 Collagen 1A와 MMP-1 그리고 -13의 변화를 관찰하였으며 마우스 실험은 총 50마리의 마우스를 5군으로 구분한 다음 NOR을 제외한 모든 마우스에 UVB를 조사하고 양성대조군인 retinoic acid 혹은 실험물질인 CTP (17, 34 mg/kg)를 섭취시키며 실험하였다. CTP는 HaCaT 세포의 Collagen 1A 증가 및 MMP-1와 -13 감소에 긍정적인 영향을 미쳤을 뿐만 아니라 UVB 조사를 통해 증가된 실험동물의 피부 주름 수와 깊이 그리고 넓이를 현저히 개선시키는 효과를 나타내었다. 특히, CTP의 섭취는 UVB 조사에 따라 파괴된 피부조직 내 콜라겐의 양과 밀도를 정상적으로 회복시켰을 뿐만 아니라 Collagen 1A의 발현 증가 및 MMP1과 -13의 발현 감소를 유도함으로써 UVB 조사에 의한 주름 생성을 감소시킨 효과를 보여주었다. 따라서, 본 실험은 CTP 섭취가 콜라겐 붕괴에 관여하는 MMPs 단백질 발현을 감소시키고 이와는 반대로 Collagen 1A의 발현은 증가시킴을 확인함으로써 피부 외관의 주름 수와 넓이 혹은 깊이를 개선시키는 것에 긍정적인 영향을 미치는 것으로 판단할 수 있다.
Purpose: Major drawbacks of conventional bone marrow stromal cells (BSCs) transplantation method are mainly caused by direct transplanted cell to host cell interactions. We hypothesized that separation of the transplanted cells by a microporous membrane might inhibit most of the potential adverse effects and induce superior effect. The purpose of the study is to determine the optimal condition of the microporous membrane. Methods: First, BSCs were placed in polyethylene terephthalate (PET) transwell inserts with 3, 8, or $12{\mu}m$ pore size, and cultured in 24 well culture plates. After 5 days, bottoms of the plates were observed for presence of attached BSCs in monolayer and cell numbers were evaluated. Second, BSCs were placed PET, polycarbonate (PCT), and mixed cellulose esters (MCE) transwell inserts with 3 and $8{\mu}m$ pore size, and cultured in 24 well culture plates. After 3 days, the supernatants of the media left in culture plate were analyzed for collagen, vascular endothelial growth factor (VEGF), platelet derived growth factor BB (PDGF-BB), and basic fibroblast growth factor (bFGF). Third, BSCs were placed in 15% and 70% of the PET membrane with $3{\mu}m$ pore size. All the experimental conditions and methods were same as the second study. Results: The optimal pore sizes to prevent BSC leakage were $3{\mu}m$ and $8{\mu}m$. The amounts of type I collagen and three growth factors tested did not show significant differences among PET, PCT, and MCE groups. However, the collagen, VEGF, and bFGF levels were much higher in the high (70%) density group than in the low (15%) density group. Conclusion: This study revealed that the optimal pore size of membrane to prevent direct BSC to recipient cell contact is in between $3{\mu}m$ and $8{\mu}m$. Membrane materials and pore sizes do not influence the collagen and growth factor passage through the membrane. The most striking factor for collagen and growth factor transport is pore density of the membrane.
Jo, Sung Jun;Kim, Jung Hwan;Kim, Jeung-Won;Choi, Hye Ok;Lee, Seung Hwan;Kim, Mu-Kang;Woo, Sun Hee;Han, Byung Hoon
Natural Product Sciences
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제19권4호
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pp.303-310
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2013
Velvet deer antler (VDA) is well known oriental medicine claimed to have tonic activities as improving bone mineral density (BMD), immune-enhancing, rejuvenating and many other medicinal activities. Ossified deer antler (ODA) is bony product produced by over-calcification of deer antler due to late harvesting. The extraction efficiency of ODA by conventional boiling in water must be very poor due to bony nature, hence the reputations for the medicinal efficacies of ODA has been highly under-evaluated compared to that of VDA without any experimental evidences. Employing our new efficient water extraction process ($135^{\circ}C$), the extracts of ODA and VDA were analysed to compare the contents of bioactive components and the potencies of pharmacological activities. The results showed that; 1) The $135^{\circ}C$ extraction (autoclaving) of ODA gave highly increased amount of biomass, 120% more than the conventional extraction by 100-boiling, whereas the same treatment for VDA showed only 15% increased amount of biomass. 2) Feeding the ODA- or VDA-extracts to oophorectomized rats showed very potent BMD-recovering activity. 3) During the ossification of deer antler, the total collagen content was found to be increased by addition of type-1 to pre-existing type-2 collagen, but not replacement of type-2 to type-1 collagen. High titer of peptide hormones like growth hormone and IGF-1 were detected in the ODA- and VDA-extracts and also in the serum of ODA- or VDA-treated oophorectomized animals dose-dependently. Present experimental data will give a conclusion that folkloric poor reputations on ODA must be concerned only with poor extraction efficiency of conventional $100^{\circ}C$ water extraction and not based on the composition of bioactive substances of ODA.
The purpose of this research was to investigate effects of Bambusae Caulis in Liquamen (BCL) on the synthesis of basement membrane proteins during proliferation and differentiation of 3T3-L1 cells. BCL has been used to relieve the cough and asthma, and remove phlegm in traditional oriental medicines. In recent years. it was studied for its antiinflammatory, antiallergenic. immune-modulating and anticarcinogenic capabilities. We have previously observed that glycyrrhizin stimulates the adipose conversion of 3T3-L1 cells. To investigate effects of BCL on the basement membrane proteins during proliferation and differentiation of 3T3-L1 cells, we have analyzed synthetic amounts of basement membrane components such as type IV collagen and BM40. BCL stimulated the synthesis and secretion of type IV collagen from both 3T3-L1 preadipocytes and adipocytes. The synthesis and secretion of BM40 was not affected by BCL. The continuous addition of BCL markedly stimulated cell growth and increased cell density. These results suggest an important role for type IV collagen in adipocyte differentiation.
In order to investigate the healing effect on inflammation and bone regeneration of low power density laser radiation in dogs, experimental periodontitis was made in dog mandibular 3rd, 4th premolars. All teeth were classified with four groups of two experimental group and control groups. The second group were irradiated on periodontitis site and the first group were control. The fourth group were irradiated on periodontitis site flap operation and the third group were flap control. Experimental groups were irradiated with GaAs low power density laser of pulse wave and continuous wave of 904nm every day by five days respectively and then control group and experimental groups were evaluated by histo-pathological study. The results were as follows : 1. Experimental periodontits site of dog were irradiated with GaAs low power laser results in reducing of pseudoepitheliomatous proliferation and inflammation at light microscope. 2. After irradiation with low power density laser, experimental groups were revealed that PDL forming activity were increased and newly formed collagen deposition were observed. 3. Low power density lsaer irradiation on experimental periodontits site after flap operation showed that decreasing of inflammation, reducing of osteoclast activity. Capillary proliferation, reduction of pseudoepitheliomatous proliferation. 4. After irradiation with low power density laser on flap experimental site, experimental groups were revealed that newly formed collagen in periodontal ligament and alveolar bone were detected on MT staining.
To investigate the effects of dietary patterns on bone mineral density and its biochemical markers among Korean healthy college women for 2 years, 34 female college students were recruited through convenience sampling. Bone mineral density was measured using Dual Energy X-ray Absorptiometry (DEXA) twice at baseline and two years later. Osteocalcin and parathyroid hormone were measured in fasting serum and N-teleopeptides of type collagen (NTx) in urine. Dietary intake was assessed by 24-hour recall method 8 times with average 4-month interval. Dietary patterns with percent energy of each food group using cluster analysis were classified into two groups. The first cluster (n = 16) was characterized with high consumption of bread, snack, fast foods, beverage and considerable of rice so it was determined as 'Modified dietary pattern group'. The second cluster was characterized with high consumption of rice and kimchi so determined as 'Traditional dietary pattern group'. There were no significant difference of age, menarcheal age, body mass index but percent of body fat by pattern groups. The traditional group showed higher value of bone mineral density among lumber spine and all femur sites at baseline and 2 years later but it was not significant after adjusted for percent of body fat. Serum osteocalcin and urine NTx was higher among the traditional group at baseline than the modified group. There were similar proportions of carbohydrate:fat:protein between groups but significantly higher intake of protein, iron, vitamin A among the traditional group. In conclusion, there were two distinctive dietary patterns among Korean college women. There was difference of bone mineral density and its biochemical markers between two patterns. Further research would be necessary to explore the relationship between dietary patterns and health risks for larger-sized and various populations.
Objectives: Diabetic nephropathy is the most common cause of end stage renal disease. Transforming growth factor (TGF)-${\beta}1$, type IV collagen, advanced glycation end-products (AGEs), and angiotensin II type 1 receptor (AT1) are the main factors of diabetic nephropathy. We investigated the effects of Prunus on renal function and histopathological changes of diabetic nephropathy rat model induced by unilateral nephrectomy and streptozotocin. Methods: Diabetes was induced in male Sprague-Dawley rats ($290{\pm}10g$) by injecting streptozotocin (55 mg/kg) into the tail vein after unilateral nephrectomy. Rats were divided into 3 groups (n=6): normal, control, and Prunus. After 8 weeks of oral administration of Prunus extract on the Prunus group from 3 days after streptozotocin injection, we checked weight, 24 hrs urine, blood biochemistry and renal tissue to evaluate renal function and histopathological changes by examining parameters including albuminuria, BUN, creatinine, cholesterol, low density lipoprotein (LDL), triglyceride, TGF-${\beta}1$, type IV collagen, AGEs, and AT1. We also measured mRNA expression of TGF-${\beta}1$, type IV collagen, AGEs, and AT1 by Real Time polymerase chain reaction (RT-PCR). Results: Prunus decreased the amount of 24 hrs proteinuria, and inhibited histopathological changes of diabetic nephropathy including the expression and accumulation of TGF-${\beta}1$, type IV collagen and AGEs which could promote development of diabetic nephropathy. Prunus also inhibited mRNA expression of TGF-${\beta}1$, type IV collagen. Conclusions: These findings suggest that Prunus might protect the renal function and inhibit the development of renal injury by regulating factors including TGF-${\beta}1$, type IV collagen, AGEs, except AT1, so Prunus can be used for diabetic patients to prevent the progression of diabetic nephropathy.
The aim of this study was to investigate the effect of electrical stimulation on healing of impaired wound and alteration of mast cells in experimental diabetic rats. Thirty male Sprague-Dawley rats were divided into three groups : incision (control), diabetes+incision (diabetes) and diabetes + incision + electrical stimulation (D/ES). Diabetes was induced in rats by streptozotocin (STZ) injection (60 mg/kg, one time) and 20 mm length incision wounds were created on the back after shaving hair. The electrical stimulation rats were treated with a current intensity of 30~50 V at 120 pps and $140{\mu}s$ for 10 days from 3 days after STZ injection. The lesion and adjacent skin tissues were fixed with 10% buffered formalin, embedded with paraffin. For wound healing analysis, hematoxylin-eosin (HE) and picrosirius red staining were performed. Mast cells (MC) were stained with toluidine blue (pH 0.5) and quantified at ${\times}200$ using a light microscope. The density of keratinocyte proliferation and microvessels in skin tissues were analyzed using a computerized image analysis system on sections immunostained with proliferative cell nuclear antigen (PCNA) and ${\alpha}$-smooth muscle actin (${\alpha}$-SMA), respectively. The results showed that the wound healing rate, collagen density and neoepidermis thickness, density of PCNA-positive cells and density of ${\alpha}$-SMA-positive vessels were significantly higher in D/ES rats than in diabetic rats. The density of MCs and degranulated MCs in D/ES rats were also significantly higher than those in diabetic rats. These findings suggest that the electrical stimulation may promote the tissue repair process by accelerating collagen production, keratinocyte proliferation and angiogenesis in the diabetic rats, and MCs are required for wound healing of skin in rats.
Objectives: Calpain, a calcium-dependent cysteine proteinase, may be one of the proteolytic enzymes that mediate cartilage degradation associated with rheumatoid arthritis. The object of this study is to ascertain immunohistochemically whether calpain is present in the inflamed joints of collagen-induced arthritis of rats, and examine the effect of Cortex Acanthopanacis Senticosi on the expression of calpain. Methods: Male Lewis rats, around 200g of body weight, were immunized with bovine type II collagen. After 3 weeks from first immunization, rats were divided into arthritic control (n=6) group and Cortex Acanthopanacis Senticosi-treated (n=6) group. Non-immunized rats served as the normal (n=6) group. All animals were sacrificed at 15 days post-treatment and tibiotarsal joints were removed. Calpain immunohistochemistry was performed on the midsagittal section of the tibiotarsal joint. Results: All animals of the control and treated groups showed ankylosing osteoarthritis. However, the animals of the treated group showed alleviation in the fibrous ankylosis, destruction of articular cartilage and destruction of subchondral bony tissue compared with the animals of the control group. Calpain was expressed in the chondrocyte lacunae of growing articular cartilage, in the skeletal muscle fibers, in the peripheral nerves, and in the vessel walls around the joints of all groups. In the control and treated groups, calpain was also expressed in proliferating synovial epithelia, subsynovial stroma cells, surface of articular cartilage, and fibrous pannus around destructive subchondral bony tissue. However, the expression density of calpain in the treated group was diminished compared with the control group, especially in surface of articular cartilage and fibrous pannus. Conclusions: These observations indicated that calpain plays an important role in the destruction of cartilage and bone in collagen-induced arthritis of rats, and also indicated that Cortex Acanthopanacis Senticosi inhibits the development of arthritis by decreasing the expression of calpain.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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